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谷氨酸脱羧酶抗体检测的生物素-链霉亲合素放大ELISA系统构建及其临床应用
目的 建立检测谷氨酸脱羧酶抗体(GADA)的新方法,即生物素-链霉亲合素放大ELISA系统(ELISA,BAS ELISA),并进行验证及初步临床应用.方法 人脑组织经过破碎、抽提、二次凝胶过滤层析与阴、阳离子交换层析分离蛋白,收集纯化的谷氨酸脱羧酶(GAD)；以链霉亲和素(SA)预包被,使GAD生物素化(bio-GAD),探讨检测GADA的优实验条件,并对BAS ELISA的灵敏度、特异性、准确性及精密性进行验证.然后选择新诊断的成年1型糖尿病患者106例(T1 DM组),以健康体检者98例为对照组,抽取空腹外周静脉血3ml,分离血清冷冻标本,用构建的BASELISA和德国宝灵曼公司Anti-GAD65 ELISA检测血清中的GADA,对比研究并进行统计学分析.结果 成功构建了检测GADA的BAS ELISA新方法；在T1DM组中,BAS ELISA方法测得T1DM的GADA阳性率显著高于anti-GAD65 ELISA方法(82.08％vs 52.83％,P＜0.01)；在对照组中BASELISA方法测得T1DM的GADA阳性率也明显高于anti-GAD65 ELISA方法(10.20％ vs6.12％,P＜0.05).结论 利用生物素-链霉亲合素放大系统可以构建检测GADA的ELISA新方法；生物素-链霉亲合素放大ELISA系统在检测GADA方面具有较高的特异性、灵敏度、准确性和精密性,提高了GADA检测的阳性率,降低T1 DM的漏检率,为早期检测T1 DM提供新方法.
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应用生物素-链霉亲合素放大ELISA系统检测抗环瓜氨酸肽抗体
目的 用生物素一链霉亲合素放大ELJSA系统建立一种敏感、特异、经济简便的抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体的测定法.方法 用链霉亲合素(SA)预包被,使生物素化的CCP(bio-CCP)固相化,摸索检测抗CCP抗体的优实验条件,并进行方法学考核和临床应用评价.结果 本法对类风湿关节炎(RA)的诊断敏感性为69.4%,特异性为96.8%,阳性预测值为89.1%,阴性预测值为94.1%.阳性似然比为19.28,阴性似然比为0.317,Youden指数为0.658.与欧蒙试剂比对,两法所测抗CCP抗体吸光度/cut off比值显著相关(n=61,r=0.9253,P<0.001).在所统计的168例血清样本中,两法同时阳性者60例,同时阴性者105例,一致性百分率达98.2%,结果具有高度一致性(Kappa=0.961,P<0.001).ROC曲线分析结果显示本法所测抗CCP抗体对RA诊断准确性达到了一个较高水平(AUCROC值=0.901).在13例诊断为早期RA者中,有10例抗CCP抗体阳性(阳性率76.9%),未发现抗CCP抗体与RA患者临床症状、疾病活动指标(ESR)及RF水平有关.结论 成功将生物素-链霉亲合素ELISA系统应用于抗CCP抗体检测,方法敏感、特异、可靠,可用于RA的常规实验室诊断.
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心肌营养素-1 ELISA测定法的建立及初步应用
目的应用生物素-链霉亲和素酶联免疫吸附法(BSA-ELISA)建立血浆心肌营养素-1(CT-1)测定法,并初步应用于冠心病患者血浆CT-1水平的检测.方法用鼠抗重组人CT-1单抗包被酶标板,加入待测抗原,并依次加入生物素化羊抗重组人CT-1多克隆抗体、辣根过氧化物酶标记链霉亲合素,用H2O2-邻苯二胺显色.检测35名冠心病患者及对照组血浆CT-1含量的变化.结果方法的线性范围为10～2 000 pg/ml,检测下限为10 pg/ml,批内变异系数为1.76%～7.64%,批间变异系数为5.96%～9.04%.结论该方法简便、快速,特异性、敏感性、重复性均在临床检测可接受范围内,标准曲线线性良好,适用于基础研究与临床检验.
