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吗啡对PC12细胞嘌呤核苷酸代谢相关酶基因表达的影响
目的:研究吗啡对神经细胞模型PC12嘌呤核苷酸补救合成酶与分解代谢关键酶基因表达的影响.方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测暴露于吗啡不同时间的PC12细胞次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT)、腺苷激酶(AK)和腺苷脱氨酶(ADA)mRNA的表达水平.结果:与相应时段对照组相比,PC12细胞暴露于吗啡12及24 h时,HGPRT mRNA水平均明显增高(P＜0.05),作用48 h时HGPRT mRNA水平显著降低(P＜0.05),72 h后HGPRT mRNA水平再次升高(P＜0.05);吗啡处理的PC12细胞于12和24 h时,AK mRNA水平均明显降低(P＜0.05),作用48 h时AK mRNA水平升高(P＜0.05),72 h后AK mRNA水平恢复正常;ADA mRNA水平均表现为轻度降低,12 h差异有显著性(P＜0.05).结论:吗啡影响神经细胞嘌呤核苷酸代谢,使细胞内腺苷酸及腺苷水平增高,这可能是吗啡依赖和耐受形成的机理之一.
关键词： 吗啡依赖 PC12细胞 次黄嘌呤磷酸核糖转移酶 腺苷激酶 腺苷脱氨酶 -
嘌呤核苷酸减弱吗啡抑制的PC12细胞嘌呤核苷酸合成代谢
目的:探讨外源性嘌呤核苷酸对吗啡致神经细胞核苷酸合成代谢降低的影响.方法:大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12细胞)分为对照组、吗啡组、单嘌呤核苷酸(AMP+GMP)组、三嘌呤核苷酸(ATP+GTP)组、吗啡+AMP+GMP组及吗啡+ATP+GTP组.应用RT-PCR法检测各实验组腺苷激酶(AK)和次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT)基因转录产物含量的变化.结果:吗啡组AK mRNA及HGPRT mRNA表达量(分别为1.330±0.108和1.407±0.141)与对照组(1.874±0.161和1.923±0.155)比较明显降低(P＜0.01,P＜0.05).吗啡+AMP+GMP组AK mRNA表达量(1.626±0.171)与吗啡组和对照组比较差异无显著性(P＞0.05),HGPRT mRNA表达量(1.796±0.168)高于吗啡组(P＜0.05).吗啡+ATP+GTP组AK mRNA表达量(1.107±0.164)低于对照组(P＜0.01),HGPRT mRNA表达量(1.563±0.209)与吗啡组及对照组比较差异无显著性(P＞0.05).结论:外源性补充嘌呤核苷酸能改善吗啡所致的PC12细胞嘌呤核苷酸合成代谢关键酶基因表达降低.
关键词： 嘌呤核苷酸类 吗啡 PC12细胞 腺苷激酶 次黄嘌呤磷酸核糖转移酶 -
siRNA抑制弓形虫次黄嘌呤-黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶的表达
目的 探讨小干扰RNA(siRNA)在弓形虫体内的对目的 基因的表达调节作用.方法 以弓形虫嘌呤代谢过程中的关键酶--次黄嘌呤、黄嘌呤、鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HXGPRT)编码基因为靶标,合成3对siRNA,以电穿孔的方式将不同的浓度的siRNA转染弓形虫.采用荧光定量PCR及[3H]-次黄嘌呤摄入量分别检测弓形虫HXGPRT mRNA及酶合成量.结果 在针对HXGPRT编码基因设计的3对21 nt的siRNA中,有1对(siRNA415)能明显降低HXGPRT mRNA水平及酶合成量.在转染后24 h,4 μmol/L siRNA415电转弓形虫的HXGPRT mRNA水平及[3H]-次黄嘌呤摄入量分别降为模拟电转弓形虫的0.36±0.04及0.51±0.03倍(P<0.05).结论 21 nt的siRNA在弓形虫体内能有效抑制目的 基因的表达.siRNA在弓形虫体内的应用将为阐明未知基因的功能和抗弓形虫药物的筛选提供有力的工具.
关键词： 嘌呤类/代谢 次黄嘌呤磷酸核糖转移酶 RNA 小分子干扰 -
2450 MHz微波辐照对小鼠外周血淋巴细胞HPRT基因突变的影响
目的: 探讨微波辐照对小鼠外周血淋巴细胞HPRT基因突变的影响. 方法: 选用频率2450 MHz微波,采用不同功率密度(5,10,30 mW·cm-2)辐照小鼠,连续辐照1,3,7 d后,心脏取血, 应用多核细胞法检测HPRT基因位点突变频率. 结果: 淋巴细胞HPRT基因位点突变率随着辐照时间延长和辐照强度的增大呈增加趋势,30 mW·cm-2微波照射7 d组淋巴细胞HPRT基因突变频率与对照组相比相差显著(P < 0.05). 结论: 2450 MHz微波辐照可诱发小鼠外周血淋巴细胞HPRT基因位点的突变.
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西安汉族、西藏珞巴族DXS6799和HPRTB位点的遗传多态性
目的调查X染色体STR位点DXS6799、HPRTB在西安汉族、西藏珞巴族的遗传多态性.方法应用PCR和聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染技术进行基因分型.结果西安汉族DXS6799检出6个等位基因,基因频率在0.016 0～0.484 0之间,女性和男性的个体识别率分别为0.851 6、0.615 7;HPRTB位点检出8个等位基因,等位基因频率在0.011～0.290之间,女性和男性的个体识别率分别为0.797 4、0.703 9.西藏珞巴族DXS6799检出5个等位基因,基因频率为0.022 2～0.607 4之间,女性和男性的个体识别率分别为0.768 4、0.580 5;HPRTB位点检出5个等位基因,等位基因频率在0.042 0～0.386 6之间,女性和男性的个体识别率分别为0.866 1、0.702 9.西安汉族、西藏珞巴族女性的基因型分布均符合Hardy-weinberg平衡.结论 DXS6799和HPRTB有较高的个体识别率和非父排除率,在个体识别和亲权鉴定中有应用价值.
关键词： 次黄嘌呤磷酸核糖转移酶 DXS6799 短串联重复 遗传多态性
