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低渗诱导人小梁细胞容积敏感性氯电流的电生理学特点
目的:探讨与小梁细胞容积调节有关的氯通道电流的生理学特点,阐明该电流与容积敏感性氯通道电流的关系.方法:体外培养人小梁细胞,全细胞膜片钳记录等渗和低渗条件下小梁细胞膜上的氯通道电流,观察该电流特点.低渗状态下在浴液中加入氯离子通道阻断剂NPPB和他莫昔芬及ATP后记录电流的变化.结果:在等渗条件下,仅观察到微弱且稳定的背景电流,在+100和-100 mV电压钳钳制下,外向和内向电流密度值(pA/pF)分别为1.48±0.36和-0.91±0.10(n=6).低渗刺激后,细胞迅速肿胀,电流较等渗时明显增大,呈外向优势,外向和内向电流密度值(pA/pF)分别为19.94±0.87和-6.53±0.41(n=6,P<0.01).在低渗状态下的浴液中分别加入NPPB (100 mol·L~(-1))、他莫昔芬(50 mol·L~(-1))和ATP(2μmol·L~(-1))20 min 后,外向和内向电流密度值(pA/pF)分别为7.61±0.50和-3.70±0.25、8.21±0.63和-3.83±0.25、9.08±0.67和3.89±0.22,均较低渗时明显减小(P<0.01).结论:细胞外低渗诱导人小梁细胞产生呈外向优势氯电流,此电流对细胞容积的改变敏感,可被NPPB、他莫昔芬和ATP抑制,该电流符合容积敏感性氯电流的特征.
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氧化应激介导的 NF-κB 信号通路在人小梁细胞表达的作用研究
目的：研究氧化应激对人眼小梁细胞NF-κB p65表达的影响，探讨氧化应激介导的NF-KB信号通路在人小梁细胞中的作用。方法选择第3代的人眼小梁细胞血清饥饿培养24 h后，利用NF-κB的特异抑制剂吡咯二硫氨基甲酸（ PDTC）进行预处理，或直接用H2 O2进行干预，免疫荧光方法和Wstern blot检测人眼小梁细胞NF-KB p65的表达；采用Trans AM NF-KB p65活性检测试剂盒检测人眼小梁细胞NF-κB p65活性。结果H2 O2处理组人眼小梁细胞NF-κB p65的表达明显增加，与对照组比较，差异均有统计学意义。 PDTC组H2 O2诱导的人眼小梁细胞NF-κB p65的表达明显降低，但仍高于对照组人眼小梁细胞的表达。结论外源性H2 O2可以模拟人眼的氧化应激状态，激活人眼小梁细胞的NF-κB信号通路，可能参与人小梁细胞房水流出阻力的调控。
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小梁细胞表达的miRNA研究新进展
miRNA是一种长约22个核苷酸的非编码蛋白质的单链小RNA,其对基因的调控主要是在转录后和翻译水平来调节基因表达.目前发现与眼部相关的miRNA已达上百种,有不少研究旨在探索miRNA在人小梁细胞上的表达及其与靶基因之间的调控机制,为进一步阐述青光眼的发病机制及其诊断、治疗提供更好的理论依据.近年来,有关miRNA与眼部组织发育、眼部疾病关系的探讨已成为眼科领域研究热点之一.本文就小梁细胞表达的miRNA研究新进展作一综述.
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选择性激光小梁成形术的激光效应对体外小梁细胞MMP-3及MMP-9表达的影响
背景 选择性激光小梁成形术(SLT)可增加前房水排出,降低开角型青光眼患者的眼压,但其作用机制尚不清楚.小梁网房水排出阻力受到细胞外基质(ECM)影响,基质金属蛋白酶3(MMP-3)、MMP-9与小梁网ECM的降解密切相关. 目的 利用永生化小梁细胞建立SLT激光效应模型,观察激光效应对小梁细胞表达MMP-3及MMP-9的影响.方法 将永生化人小梁细胞与色素颗粒混悬液共同隔夜培养16h,用SLT所用的Q开关倍频532 nm Nd:YAG激光照射人小梁细胞,制备SLT激光效应细胞模型,激光能量为0.2mJ,光斑直径为400 μm,脉冲持续时间为3 ns.分别于激光照射后1、4、8、12和24 h,采用实时荧光定量PCR法检测激光照射前后小梁细胞中MMP-3 mRNA及MMP-9 mRNA的相对表达情况;ELISA法检测激光照射前后不同时间点培养液中MMP-3及MMP-9蛋白质量浓度的变化. 结果 SLT激光照射人小梁细胞前及照射后1、4、8、12和24 h后细胞中MMP-3 mRNA的相对表达量分别为1.00、1.32±0.12、2.08±0.05、2.34±0.04、2.77±0.05、2.49±0.27,各组间差异有统计学意义(F=15.966,P=0.007),其中激光照射后各时间点细胞中MMP-3mRNA的相对表达量均明显高于对照组,至12h表达量高,差异均有统计学意义(均P＜0.05).激光照射前后不同时间点细胞中MMP-9 mRNA的相对表达量分别为1.00、0.91±0.10、1.27±0.07、1.46±0.07、1.69±0.09、0.87±0.09,各组间差异有统计学意义(F=30.526,P=0.005),其中激光照射后4、8和12h小梁细胞中MMP-9 mRNA的相对表达量明显高于对照组,差异均有统计学意义(P=0.001、＜0.001、＜0.001).激光作用后不同时间点小梁细胞培养液中MMP-3及MMP-9蛋白的质量浓度均明显高于相应时间点对照组的检测值,差异均有统计学意义(均P＜0.05). 结论 SLT激光效应小梁细胞模型在激光作用后早期对MMP-3及MMP-9基因的表达和分泌均明显增加,但其表达随着激光照射后时间的延长而减弱.
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过氧化氢对人小梁细胞 GRP78和 CHOP 表达的影响
目的：观察H2 O2对人小梁细胞（ HTCs）内质网应激相关蛋白GRP78、CHOP及其mRNA表达的影响。方法：实验分为对照组、H2 O26 h组、H2 O212 h组和H2 O224 h组，分别以600μmol／L H2 O2作用于HTCs 0、6、12及24 h后，采用 Real-time PCR 和Western blot 检测细胞中 CHOP、GRP78 mRNA 和蛋白的表达。结果：对照组无GRP78和CHOP的表达；H2 O2处理后HTCs GRP78、CHOP mRNA及蛋白的表达水平均升高，且随着H2 O2作用时间的延长，GRP78、CHOP mRNA及蛋白的表达水平升高（P均＜0．05）。结论：H2O2可诱导HTCs发生内质网应激，从而参与HTCs的氧化损伤。
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中药青光安含药血清对体外加压后人小梁细胞凋亡的影响机制
目的:通过观察青光安颗粒含药血清对加压后人小梁细胞Caspase-3和Caspase-8表达的影响,探讨青光安颗粒含药血清抑制加压后人小梁细胞凋亡的分子机制.方法:制备青光安颗粒2.5,5,10,20倍含药血清、益脉康5倍含药血清和不含药血清,建立人小梁细胞体外加压模型,用不同药物与浓度的含药血清分别作用体外加压培养人小梁细胞,用TUNEL技术及流式细胞术检测各组的凋亡细胞.用免疫组化、流式细胞术分析加压后人小梁细胞Caspase-3和Caspase-8表达的变化.结果:青光安颗粒5,10,20倍组和益脉康组都可以显著抑制加压后人小梁细胞的凋亡和Caspase-3,Caspase-8的表达,与空白组比较,差异有显著统计学意义(P＜0.01);青光安5倍组与益脉康5倍组比较差异无统计学意义(P＞0.05);与青光安10倍组比较,青光安5倍组、益脉康5倍组的细胞凋亡率和Caspase-3和Caspase-8表达率都较高,比较差异都有统计学意义(P＜0.05),但青光安10倍组与青光安20倍组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论:青光安颗粒通过阻断Caspase-3与Caspase-8凋亡信号传导系统而抑制加压后人小梁细胞的凋亡.
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青光安颗粒含药血清对加压后人小梁细胞活性的影响
目的:观察青光安颗粒对体外加压培养人小梁细胞活性的影响, 探讨青光安颗粒预防与治疗原发性开角型青光眼术后眼压回升的作用机制.方法:制备2.5倍,5倍,10倍,20倍青光安颗粒含药血清和5倍益脉康含药血清,用不同药物与浓度的含药血清分别作用体外加压培养人小梁细胞12,24,36h,观察细胞形态学的变化和MTT法检测的细胞活性(OD)的变化.结果:加压后小梁细胞的OD值与青光安颗粒的浓度和作用时间均有关系.青光安5倍,10倍,20倍组都能够明显提高细胞OD值,与空白组比较有显著性差异(P＜0.01),10倍,20倍组与益脉康组比较有显著性差异(P＜0.01),但是青光安10倍组与20倍组之间没有统计学意义;培养24,36h的OD值明显高于培养12h的OD值(P<0.01),但是培养24h与培养36h时间段之间没有统计学意义.结论:青光安颗粒能够提高加压后人眼小梁细胞的活性.
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白细胞介素-1α对培养的人眼小梁细胞增殖和形态结构的影响
目的:观察白细胞介素-1α(interleukin-1α,IL-1α)对体外培养的人眼小梁细胞(human trabecular meshwork cell,HTC)增殖和形态结构的影响.方法:取人眼小梁组织进行小梁细胞体外培养,取传3～5代的人小梁细胞,加入不同浓度的IL-1α的DMEM/F12液,通过比色法检测IL-1α对培养的人小梁细胞增殖的影响;用倒置相差显微镜、光镜、和电镜观察细胞形态结构的变化.结果:(1)MTT测定法:阴性对照组与低浓度实验组(0.5,1μg/L)相比,吸光度值无显著差异(P＞0.05),IL-1α≥10μg/L组与对照组相比,吸光度值有显著差异(P＜0.05),与对照组比较,0.5μg/L浓度的IL-1α对人小梁细胞形态结构差异无显著性;IL-1α浓度进一步增加,作用时间延长,细胞的损伤也加重.结论:IL-1α≥10μg/L时,将破坏细胞形态结构并影响其功能,而且显著抑制体外培养的人小梁细胞的增殖.
