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抗噬菌体甲型副伤寒沙门菌突变菌的构建及其生物学特性
目的:采用同源重组基因敲除方法构建3株甲型副伤寒沙门菌(副甲)抗噬菌体突变菌,并研究其生物学特性.方法:通过PCR和融合PCR方法获得了2、3、5号同源臂片段,经酶切后与pYG4载体连接,构建pYG4-2、pYG4-3和pYG4-5同源重组质粒.经PCR测序鉴定正确后,与野生型副甲菌进行同源重组,获得2、3、5号3株抗噬菌体突变菌.将3株突变菌和野生型副甲菌经不同种类和浓度的抗生素、不同pH值和温度及不同浓度的盐离子处理后,测量菌株的A595值,分析3株突变菌对抗生素、温度、pH值和盐离子的敏感性以及生长曲线.结果:PCR和融合PCR扩增出3个同源臂,构建的pYG4-2、pYG4-3和pYG4-5同源重组质粒经PCR测序表明构建成功;同源重组和抗噬菌体验证表明成功获得3株抗噬菌体突变菌.3株突变菌产生了卡那霉素抗性,且对链霉素表现出敏感性;2号菌表现出氨苄青霉素抗性,5号菌表现高温度耐受性;与野性型副甲菌比较,3株突变菌的生长曲线明显平缓,尤以2号突变菌为突出.结论:成功构建抗噬菌体突变菌,并获得一些特殊的生物学特性.
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甲型副伤寒沙门氏菌噬菌体PSPA1感染宿主相关基因分析
目的 分析影响甲型副伤寒沙门氏菌(副甲)噬菌体(PSPAI)感染宿主相关基因.方法 诱导副甲利福平抗性株(副甲Rif+);将副甲Rif+与SM 10λpir/pSC189接合转座,噬菌体PSPA1处理转座菌液后,涂布卡那霉素、利福平双抗平板筛选转座突变菌;提取抗噬菌体突变菌基因组,热不对称PCR、回收片段并测序;测序结果提交NCBI进行序列比对,确定转座质粒插入副甲基因组的位点.结果 成功诱导出副甲Rif+;筛选到6株抗噬菌体的突变菌;测序、NCBI比对发现6个不同的插入基因.结论 利用转座子插入获得抗噬菌体感染甲型副伤寒沙门氏菌突变体,对这些突变体进行PCR、测序分析,说明可能有6个基因及相应的酶或蛋白与抗噬菌体相关,为进一步分析噬菌体与寄主菌相互作用关系提供基础.
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耐药突变选择窗理论的研究与意义
随着抗菌药的广泛应用,细菌的耐药性问题变得越来越严重.现在几乎每一种有效的抗菌药物都发现了相应的耐药菌,其耐药水平越来越高,甚至出现了多重耐药菌株.传统的基于小抑菌浓度(MIC)的治疗策略是通过抗菌药物杀死或抑制敏感细菌而控制感染,再通过宿主防御系统清除耐药变异菌.此治疗方案剂量低、毒副作用小、容易耐受,而且也常常能控制感染.但是在抗菌药物的选择压力下,大部分敏感细菌被杀灭,但少数细菌会发生耐药性变异,以求适者生存[1].由于目前的治疗浓度,往往仅抑制大部分敏感细菌的生长,却选择性增加了耐药突变菌的数量[2].且由于不合理应用或者滥用抗菌药物使细菌中的耐药突变亚群逐渐发展成为优势菌群,并迅速在细菌间传播.耐药突变菌的富集,成为人类健康的严重威胁.为了减少细菌耐药,人们曾试图用限制抗菌药物及抗菌药物轮换使用等手段,但效果并不理想.
