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胸膜肺炎放线杆菌血清型特异的疫苗候选基因的筛选及痤疮丙酸杆菌异源免疫
目的 筛选猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)1型与5型特异的疫苗候选基因,并研究瘴疮丙酸杆菌对猪传染性胸膜肺炎的异源免疫.方法 采用cDNA代表性差异分析、大肠杆菌核糖体展示、免疫筛选和RT-PCR技术筛选APP 1型和5型血清型特异的疫苗候选基因,进行克隆、测序及同源序列分析.并用与APP疫苗候选基因具有同源序列的痤疮丙酸杆菌(PA)免疫小鼠,研究其对APP感染的异源免疫.结果 获得血清1型APP 6条疫苗候选基因,2条为未知基因,2条与PA同源性为98%,2条与人cDNA有同源性.获得血清5型APP 7条疫苗候选基因,其中2条为未知基因,2条与PA同源性分别为93%和100%.用PA全菌免疫小鼠,产生的抗血清可与1型和5型APP发生强的免疫反应,ELISA检测效价达1:3 200;脾淋巴细胞检测结果 显示,免疫组CD3+、CD4+T细胞的百分率及CD4+/CD8+比值与对照组相比均升高,两组CD3+T细胞百分率差异有显著意义.以10倍LD50 1型和5型APP分别感染PA免疫小鼠,小鼠存活率分别为95%和90%,并且在攻毒后第15天体内APP可全部被清除.结论 1型与5型APP存在不同的疫苗候选基因,痤疮丙酸杆菌与之存在共同抗原,能够产生交叉免疫应答,对血清1型和5型APP的感染具有预防作用.
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问号钩端螺旋体中一个新的OmpA家族蛋白抗原性及保守性研究
目的 克隆表达和鉴定问号钩端螺旋体(L.interrogans)黄疸出血群赖型赖株中一个新的外膜蛋白(Omp)A家族基因LA0301,研究LA0301编码蛋白的抗原性和在15个钩端螺旋体(简称钩体)血清群代表株中的保守性,探讨其在疫苗研究中的意义.方法 生物信息学软件分析预测LA0301的特征.构建原核表达重组体pQE31-LA0301,经IPTG诱导后用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDs-PAGE)及蛋白质印迹法(Western blot)鉴定表达情况.用表达的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,Western印迹检测其免疫反应性和在不同血清型钩体中的保守性.酶联免疫吸附试验(ELISA)和Western印迹检测兔抗钩体全菌血清中的LA0301编码蛋白的抗体.结果 生物信息学预测结果显示,LA0301具有OmpA家族的结构域.克隆表达了重组质粒pQE31-LA0301,重组蛋白能刺激BALB/e小鼠产生特异性抗体,效价为1:32000.在兔抗钩体全菌血清中检测到特异的LA0301蛋白抗体,并在15个血清群的代表株钩体中均可检测到LA0301蛋白.结论 LA0301蛋白是问号钩体中一个新的OmpA家族蛋白,具有良好的抗原性和保守性,并且能在钩体感染的过程中刺激机体产生相应的抗体.为进一步研究钩体新型疫苗候选基因奠定了基础.
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问号钩端螺旋体疫苗候选基因LB061的抗原性和保守性研究
目的 克隆表达和鉴定问号钩端螺旋体黄疸出血群赖型赖株中疫苗候选基因LB061,研究LB061的免疫原性和在不同血清型钩端螺旋体菌中的保守性.方法 生物信息学软件分析预测LB061的特征.构建原核表达质粒pQE31-LB061,经IPTG诱导后用SDS-PAGE及Western 印迹法鉴定表达情况.用表达的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,Western印迹法检测其抗原性和在不同血清型钩端螺旋体中的保守性.Western印迹法检测钩端螺旋体全菌兔抗血清中的LB061抗体.结果 生物信息学预测结果显示,LB061含有DUF839家族结构域.成功克隆了重组质粒pQS31-LB061,表达的重组蛋白能刺激BALB/c小鼠产生抗体(效价为1:32 000),并能与相应抗体反应,具有良好的抗原性.在16株不同血清型的钩端螺旋体中均可检测到LB061蛋白的表达,并在钩端螺旋体赖株全菌兔抗血清中检测到其抗体.结论 LB061蛋白可以作为外膜蛋白刺激宿主免疫系统产生抗体,具有良好的抗原性和保守性.本研究为其作为疫苗候选基因的研究奠定了基础.
