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微载体浓度与细胞接种密度对MDCK细胞生长的影响
目的 探讨微载体浓度与犬肾脏上皮(Madin-Darby canine kidney,MDCK)细胞接种密度之间的关系,及其对MDCK细胞生长代谢的影响.方法 实验设计了4组不同的单个微载体周围的细胞数范围,分别为0～10、10 ～ 20、20～60和60～ 120个,每组范围分别通过控制微载体浓度或细胞接种密度得到2组不同条件的实验组,即12 g/L微载体组和5×104个/ml MDCK细胞组、7 g/L微载体组和1×105个/ml MDCK细胞组、3 g/L微载体组和5×105个/ml MDCK细胞组、1 g/L微载体组和1×106个/ml MDCK细胞组,其中1、3、7、12 g/L微载体组细胞接种密度均为2×105个/ml,5×106、1×105、5×105、1×106个/ml MDCK细胞组微载体浓度均为3 g/L.经转瓶培养,每隔24h取样,进行细胞计数,并检测细胞代谢.按确定的佳细胞接种密度和微载体浓度培养MDCK细胞72 h后,接种0.01 MOI的甲型流感病毒株A/PR8/34,检测病毒的HA效价.结果 当一个微载体周围的细胞数控制在20～ 60个之间,微载体浓度为3 g/L,细胞接种密度为5×105个/ml时,活细胞密度(viable cell density,VCD)可达3×106个/ml以上,细胞在72 ～ 96 h之间,能获得一个较为稳定的平台期,葡萄糖等营养物不会消耗过多以致耗竭,而乳酸、氨等代谢副产物的累积对培养环境造成的压力较小,有利于后期流感病毒的接种,同时还可达到理论高活细胞值的60％以上.HA效价可达12 log2HA units/50μl.结论 控制单个微载体周围细胞数在20～60个之间,细胞生长和代谢显著优于其他条件,且有利于病毒的复制,提高了病毒滴度.为基于MDCK细胞大规模高效生产流感病毒疫苗的工业化生产提供了数据参考.
