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FoxO3a基因缺失致小鼠脾脏进行性慢性炎性反应的观察
目的 观察FoxO3a基因缺失致小鼠脾脏进行性慢性炎性反应.方法 分别于16周、24周和12个月称取FoxO3a基因敲除小鼠和对照小鼠体重；于16、24和38周处死各组小鼠,取脾脏,肉眼观察脾脏变化,并制备脾细胞悬液,进行细胞计数,同时取各组小鼠卵巢、肺及皮下等组织,观察其炎性变化.流式细胞术检测24周的FoxO3a基因敲除小鼠和对照小鼠脾细胞中T、B淋巴细胞和Mac-1+细胞数量及百分率；Real-time PCR检测脾细胞中炎性细胞因子S100A8和S100A9基因mRNA的表达水平.结果 与对照小鼠相比,FoxO3a基因敲除小鼠脾脏明显肥大,且随年龄增加更加显著,卵巢、肺及皮下等组织内可见大量炎性细胞浸润,脾细胞数明显升高；基因敲除组老年小鼠的体重明显低于对照小鼠；FoxO3a基因敲除小鼠的脾细胞中T、B淋巴细胞数增加明显,但所占脾细胞的百分率无明显增加,Mac-1+细胞数和百分率均明显增加；S100A8和S100A9基因mRNA的表达水平明显高于对照小鼠.结论 FoxO3a基因缺失致小鼠脾脏进行性慢性炎性反应.
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FoxO3a、BubR1基因在皮肤自然衰老过程中的表达及意义
目的:探讨FoxO3a和BubR1基因与人皮肤自然衰老的关系.方法:收集80例急腹症手术患者非曝光部位皮肤标本,用反转录(RT)-PCR技术检测皮肤组织中FoxO3a和BubR1 mRNA的表达量,并根据年龄分为3组:青年组(＜25岁)、中年组(35～45岁)和老年组(＞55岁),分析不同年龄组之间各基因表达水平的差异.结果:FoxO3a mRNA的表达量随年龄增长而增多,BubR1 mRNA随年龄增大而表达降低,两者在3组之间表达差异均有显著性(P＜0.01),且两者呈显著负相关(P＜0.01).结论:FoxO3a和BubR1均可能在防止人的皮肤自然衰老过程中有一定的作用.
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重叠延伸聚合酶链反应克隆大鼠Foxo3a基因及序列测定
目的 获得大鼠Foxo3a基因全长编码区基因.方法 运用重叠延伸PCR方法从大鼠脾脏总RNA中扩增Foxo3a编码区基因全长,将其插入pMD19-T载体中进行酶切及测序鉴定.结果 Foxo3a编码区基因全长2 019 bp,与GenBank中大鼠Foxo3a基因同源性为99.9%.结论 运用重叠延伸PCR技术可成功克隆高GC含量大鼠Foxo3a的cDNA,为进一步研究该基因奠定了基础.
关键词： FoxO3a基因 克隆 重叠延伸聚合酶链反应 -
Tempol对紫外线照射所致HaCaT细胞损伤保护作用
目的 观察氮氧化物4-羟基-2,2,6,6-四甲基哌啶(Tempol)对中波紫外线(UVB)照射所致人角质形成细胞(HaCaT细胞)损伤的保护作用,并探讨其发生机制.方法 在HaCaT细胞培养系统中加入不同浓度的Tempol进行培养,12 h后洗掉培养液中的Tempol,用30 mJ/cm2 UVB照射细胞后,重新加入培养液继续培养24 h.用MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术测定细胞凋亡率.RT-PCR方法测定FoxO3a和 BubR1基因的表达.结果 UVB照射组与正常对照组相比,细胞增殖活性明显降低(F=27.71,q=13.57,P<0.05), FoxO3a mRNA的表达明显增强(F=13.93,q=9.79,P<0.05),BubR1 mRNA的表达明显减弱(F=29.69,q=14.54,P<0.05), 凋亡率明显增高(χ2=93.69,P<0.05);与UVB照射组相比,不同浓度的Tempol可以恢复UVB照射细胞的增殖能力(q=3.24～13.60,P<0.05),降低照射细胞的凋亡率(χ2=12.02～101.02,P<0.05),下调FoxO3a mRNA的表达(q=2.92～9.95,P<0.05),上调BubR1 mRNA的表达(q=2.97～14.61,P<0.05).结论 Tempol可以保护HaCaT细胞免受UVB照射造成的损伤.
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Foxo3a基因调控大鼠卵巢颗粒细胞体外发育及预防顺铂对卵巢的毒性作用
目的：研究Foxo3a基因对大鼠卵巢颗粒细胞体外发育的调控及其预防顺铂卵巢毒性作用。方法大鼠原代颗粒细胞体外培养，利用HE染色法及免疫荧光法进行原代颗粒细胞鉴定；构建携带Foxo3a基因的重组腺病毒AD-rFoxo3a，利用RT-PCR及Western-blot法检测Foxo3a表达；实验分为3组：实验组（AD-rFoxo3a组）、阴性对照组（rAD组）及空白对照组（Control组），分别绘制各组细胞生长曲线，Western-blot法检测各组cyclin D1、p27、Bax、Bim蛋白表达，利用流式细胞术、Hoechst33342/PI法分别检测细胞周期及细胞凋亡情况，流式细胞术检测各组细胞加入适浓度顺铂后细胞凋亡情况。结果（1）体外分离培养大鼠原代卵巢颗粒细胞存活率>90%，细胞纯度>95%；（2）重组腺病毒AD-rFoxo3a感染颗粒细胞36 h后Foxo3a基因在mRNA水平高表达，感染48 h后在蛋白水平高表达；（3）实验组细胞增殖受到抑制，G1期细胞比例及细胞凋亡率较空白对照组及实验对照组增加（P<0.01），后两组差异无统计学意义；（3）实验组Bim、p27、cyclin D1蛋白较对照组高表达，而各组Bax蛋白表达无明显差异；（4）加入顺铂24 h后实验组细胞凋亡率高于空白对照组及实验对照组（P<0.01），后两组细胞凋亡率差异无统计学意义。结论过表达Foxo3a基因在体外可能通过促进cyclin D1和p27蛋白表达诱导大鼠卵巢颗粒细胞静止在G1期，通过增加Bim蛋白表达诱导颗粒细胞凋亡；同时过表达Foxo3a基因在体外不能逆转顺铂导致的颗粒细胞凋亡，其对于卵泡发育的调控及预防顺铂对卵巢的毒性作用还有待体内实验进一步研究。
