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14-3-3 zeta蛋白文献资料
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14-3-3 zeta蛋白C-端多肽抗体的制备与鉴定
目的 制备14-3-3 zeta蛋白C-端多肽多克隆抗体,并鉴定其特异性.方法 用生物信息学分析14-3-3 zeta蛋白的同源性、亲水性和抗原性,设计并合成zeta蛋白C-端特异性的氨基酸序列,将其与牛血清白蛋白铰链;分别转化14-3-3的7个亚型质粒于大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达,并分离纯化His-zeta融合蛋白;分别以zeta C-端多肽及zeta融合蛋白为抗原,免疫新西兰大耳白兔,制备多克隆抗体;用Western blot分析zeta蛋白C-端多肽抗体亚型特异性,并用该特异性抗体检测zeta蛋白在COS-7细胞中的分布规律.结果 在14-3-3的7个亚型蛋白存在的条件下,zeta蛋白C-端多肽抗体仅识别zeta亚型蛋白,而zeta融合蛋白抗体可以识别gamma、zeta、tau 3种亚型;14-3-3 zeta蛋白主要分布在COS-7细胞质一侧.结论 已获得了亚型特异性的14-3-3 zeta多克隆抗体,该抗体可用于14-3-3 zeta免疫细胞化学等分析.
关键词： 14-3-3 zeta蛋白 C-端多肽 多克隆抗体 生物信息学 特异性
