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细胞外调节蛋白激酶1/2磷酸化对嗜心性柯奇病毒B3型感染心肌细胞H9C2能力的影响
目的 探讨细胞外调节蛋白激酶1、2 (extracellular regulated protein kinases 1、2,ERK1、2)磷酸化对嗜心性柯萨奇病毒B3型(coxsackie virus B3,CVB3)感染心肌细胞H9C2能力的影响.方法 通过检测CVB3对心肌细胞H9C2的半数感染量(TCID50)确定病毒的作用浓度,用该浓度CVB3分别作用心肌细胞H9C2 0、20、40和60 min,检测细胞中ERK1/2的磷酸化情况.将ERK1、2的磷酸化激动剂Ceramide C6作用于H9C2细胞,同时加入CVB3,检测TCID50.结果 确定CVB3对H9C2细胞的TCID50为10-7.1,该浓度CVB3作用心肌细胞H9C2 40和60 min时,细胞中磷酸化ERK1、2表达量低,明显低于0min (P＜0.01).加入激动剂Ceramide C6后,CVB3感染心肌细胞H9C2的TCID50为10-6.47.结论 ERK1、2磷酸化可抑制CVB3感染心肌细胞H9C2的能力,本实验为病毒性心肌炎发病机制的研究奠定了基础.
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TGF-β2对心肌细胞H9C2转录因子表达的影响及其组蛋白H3乙酰化调控机制
目的 探讨转化生长因子-β2(transforming growth factor beta2,TGF-β2)对心肌细胞H9C2转录因子Mef2c和GATA4的影响及其与组蛋白H3乙酰化的关系.方法 比较TGF-β2对细胞生长的影响.利用Real-time PCR检测心肌细胞的心脏相关转录因子Mef2c和GATA4mRNA的相对表达量,筛选合适的TGF-β2干预浓度.采用Western blot检测心肌细胞乙酰化组蛋白H3(acetylated histone H3,acH3)的表达差异.染色质免疫共沉淀(chromatin immunoprecipitation,ChIP) Real-time PCR检测Mef2c和GATA4启动子区与acH3结合DNA的相对表达水平.比色分析法检测TGF-β2对心肌细胞的总体组蛋白乙酰化酶(HATs)活性的影响.结果 ①TGF-β2干预组相对于对照组心肌细胞的增殖能力增强(P＜0.05).②心肌细胞的心脏相关转录因子Mef2c和GATA4mRNA的相对表达量随着TGF-β2浓度的升高呈现先升高后降低的趋势,在5 μg/L的浓度时均达到高,Mef2c mRNA相对表达量是对照组的1.8倍,GATA4mRNA是对照组的2.3倍(P＜0.05).③TGF-β2干预72 h后acH3蛋白表达量是对照组的4倍(P＜0.05),HATs活性是对照组的1.34倍(P＜0.05).④TGF-β2干预组Mef2c和GATA4启动子区组蛋白H3的乙酰化水平分别是对照组的2.56和2.16倍(P＜0.05).结论 5μg/L TGF-β2可以促进心肌细胞H9C2的分裂与增殖,并上调心脏相关转录因子Mef2c和GATA4的表达,组蛋白H3乙酰化水平的升高可能是Mef2c和GATA4表达上调的机制之一.
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黄连素对缺氧/复氧诱导的大鼠心肌细胞损伤的拮抗作用
目的:探讨黄连素(BR)对大鼠H9c2心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤后凋亡的影响及其作用机制.方法:将培养的H9c2心肌细胞随机分为:正常对照(NC)组、单纯BR组、H/R组、药物低剂量BR(1.5 × 10-6 mol/L)组及高剂量BR(1.5×10-4mol/L)组.处理结束后,用MTT比色法检测H9c2心肌细胞的活力,用Hoechst33258染色检测细胞核形态的变化,用Western blot法检测Cytochrome-C (Cyt-C),Caspase-9蛋白的表达.结果:与NC组比较,单纯BR组对H9c2心肌细胞无影响.与H/R组比较,低、高剂量BR组细胞的活力分别为(60.8±1.9)％和(81.2±1.9)％明显上升(P＜0.01),心肌细胞的凋亡率明显减少,Western blot的结果显示,BR可抑制凋亡相关蛋白Cyto-chrome-C、Caspase-9的表达.结论:BR对H9c2心肌细胞H/R损伤后的凋亡具有显著的抑制作用,其可能的机制与抑制的Cyt-C的释放和抑制Caspase-9的表达有关.
