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单纯疱疹病毒2型表面糖蛋白D亚单位疫苗免疫佐剂的筛选及免疫方案优化
目的 筛选单纯疱疹病毒2型(herpes simplex virus type 2,HSV-2)表面糖蛋白(glycoprotein)D2 (gD2)亚单位疫苗的免疫佐剂,对免疫剂量、免疫次数等免疫方案进行优化.方法 使用Alum佐剂、Poly I:C佐剂及Alum+ PolyI:C混合佐剂,分别配伍不同剂量(2、5、10 μg)的gD2蛋白,共制成9种注射制剂,经后腿肌肉注射免疫9组雌性BALB/c小鼠,分别于初次免疫后第28和42天各加强免疫1次,于初次免疫后28 d及第2、3次免疫后14 d,经眼眶静脉窦取血,分离血清,ELISA法检测特异性抗gD2抗体效价;脱颈椎处死小鼠,分离研磨脾脏后,获得脾细胞,加入gD2抗原刺激培养71 h后,收集细胞上清,应用CBA试剂盒测定细胞因子(IL-2 、IFNγ 、TNF-α)浓度;确定佳免疫方案.结果 初次免疫后28 d,各组总抗体效价偏低,混合佐剂(Alum+ Poly I:C)配伍10 μg抗原组小鼠血清抗体效价高,但动物个体差异大.第2次免疫后14 d,各组小鼠血清抗体效价较第1次免疫显著增高;佐剂及抗原剂量对抗体效价影响显著,其中Poly I:C佐剂配伍10 μg抗原组小鼠抗体效价及细胞因子分泌水平综合高.末次免疫后14 d,小鼠血清中抗体效价较第2次免疫再次升高,动物个体间效价差异缩小,混合佐剂组效价高;各组细胞因子分泌水平较第2次免疫略有增高,混合佐剂配伍2 μg抗原组分泌高水平的IL-2、IFNγ、TNF-α.结论 小鼠免疫模型中,使用Alum+ Poly I:C混合佐剂较使用任一单独佐剂可产生佳免疫效果,佳免疫组为混合佐剂配伍2 μg抗原组,佳免疫次数为3次,第1和2次免疫间隔28 d,第2和第3次免疫间隔14d,佳免疫剂量为2 μg/只小鼠.
