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RNA干涉临床应用的研究进展
RNA干涉(RNA interference,RNAi)是近年来疾病基因组学和功能基因组学领域的研究热点,它通过双链RNA(double-strand RNA,dsRNA)的介导特异性地降解相应序列的mRNA,从而导致转录后水平的基因沉默,并广泛存在于各种生物.正是由于RNAi在基因组学研究中的巨大潜力,近年来,各国学者在RNAi临床应用方面进行了深入的研究,并取得了令人瞩目的成绩.本文着重就RNAi临床应用的研究进展做一介绍.
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RNAi技术在临床中的运用
RNA 干涉 (RNA interference ,RNAi)现象是指内源性或外源性双链RNA(dsRNA)介导细胞内的mRNA发生特异性降解,导致靶基因的表达沉默,产生相应的功能表型缺失.这一现象属于转录后的基因沉默机制(posttranscriptional gene silencing ,PTGS).
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RNA干涉MSP58基因抑制神经胶质瘤细胞U251增值和侵袭性研究
目的 MSP58是一种能够通过调节基因的转录和翻译水平来改变细胞恶性表型的癌基因,其蛋白的分子量大小为58kDa.但截止目前,其在肿瘤发牛及发展中所起的作用仍不是十分清楚.我们通过构建MSP58基因的干涉表达载体,下调MSP58基因在人脑胶质瘤细胞系U251中的表达以揭示其在胶质瘤增殖、迁移和侵袭中所起的作用.方法 将特异性的MSP58干涉表达载体pSilencer3.1-MSP58转染人脑胶质瘤细胞系U251,同时构建相应的阴性对照载体pSilencer3.1-NC以及空载体pSilencer3.1-H1 neo.运用半定量RT-PCR及Western blot的方法检测稳定转染和未转染干涉载体的胶质瘤细胞的MSP58的mRNA和蛋白的表达水平.运用MTT法测定胶质瘤细胞的增殖水平.流式细胞仪检测细胞周期变化以及单层细胞划痕试验和侵袭小室试验检测胶质瘤细胞的迁移及侵袭能力变化.结果 成功建立了三种稳定转染细胞株:分别是具有稳定下调MSP58基因表达的U251-S细胞,阴性对照U251-NC细胞以及含有空载体的U25l-H1 neo细胞.干涉组细胞的MSP58的表达水平无论在mRNA水平还是在蛋白水平均较阴性对照组及空载体组细胞显著降低.其表达抑制率分别为62.7%和60.3%.干涉组细胞的增殖能力明显降低.同时在细胞周期方面,干涉组细胞与阴性对照组及空载体组细胞相比,发生了显著的G1期阻滞.细胞迁移及侵袭试验结果显示,MSP58干涉组的细胞较其他对照组细胞的迁移及侵袭能力均受到明显抑制.结论 通过RNA干涉的方法下调MSP58基因的mRNA和蛋白的表达,不但可以明显的抑制人脑胶质瘤细胞的增殖,并且可以显著的抑制胶质瘤细胞的迁移及侵袭能力.因此,靶向性MSP58基因RNAi介导的胶质瘤基凶治疗具有良好的应用前景.
