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比较口服不同亲和力重组耻垢分支杆菌调节免疫的差异
目的:Th1与Th2的平衡紊乱是过敏性哮喘的免疫学基础,本研究通过给予小鼠口服免疫不同亲和力屋尘螨抗原Der p2重组耻垢分枝杆菌,来比较其调节免疫应答的差异.方法:1,分别给予6-8周BALB/c小鼠口服接种Mycobacterium Smegmatis(M.S)、pCW-Der p2-rM.S及pCW-Der p2-PEB1-rM.S,在末次免疫后第14、28、56天分别用夹心ELISA法测定小鼠血清及脾脏淋巴细胞培养上清中IFN-γ、IL-2及IL-4的含量.结果:夹心ELISA结果显示,无论是血清还是脾脏淋巴细胞培养上清中,各组IFN-γ、IL-2水平逐渐升高,IL-4水平逐渐降低,8周时更明显,pCW-Der p2-PEB1-rM.S组与M.S、pCW-Der p2-rM.S组相比有明显统计学差异.体外给予Der p2蛋白刺激后,pCW-Der p2-rM.S及pCW-Der p2-PEB1-rM.S组变化更加明显,而M.S组无明显变化.结论:小鼠口服免疫pCW-Der p2-PEB1-rM.S能明显提高Th1型免疫反应,与pCW-Der p2-rM.S组相比有统计学学差异.三种不同亲和力重组耻垢分枝杆菌经口服后均能诱导小鼠产生Th1型免疫应答,且pCW-Der p2-rM.S及pCW-Der p2-PEB1-rM.S诱导产生的Th1优势应答具有Der p2抗原特异性.本研究弥补了粘膜型疫苗低亲和力的不足,为新型口服疫苗的制备和改进创造了条件.
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空肠弯曲菌PEB1的B细胞免疫优势表位的鉴定及保护效果的评价
目的 利用表位预测分析技术筛选空肠弯曲菌(C.jejuni)黏附蛋白PEB1的B细胞免疫优势表位,并评价其免疫保护效果.方法 采用氨基酸步移策略,合成18 mer氨基酸重叠肽段.ELISA系统筛选鉴定PEB1的B细胞免疫优势表位.采用KLH偶联免疫优势表位肽免疫BALB/c小鼠,ELISA测定优势表位肽诱导的IgG抗体效价.末次免疫后7d,经口灌胃感染C.jejuni 11168,在感染后的28 d,定量检测感染攻毒后各组小鼠的空肠组织C.jejuni的定植量以及qRT-PCR技术检测炎性细胞因子TNF-α的相对表达水平.通过HL-60细胞调理吞噬实验测定表位肽诱导产生抗体所介导的调理吞噬杀伤功能.免疫B细胞缺失小鼠,感染攻毒后检测肠组织C.jejuni的定植量.结果 PEB155-72aa、PEB197-114aa、PEB12u-228aa均能与PEB1抗血清产生强烈IgG抗体反应.抗PEB155-72aa、抗PEB197-114aa和PEB1211-228aa血清均能与重组的PEB1产生较强的抗原抗体反应.与CFA/IFA组相比,免疫PEB155-72aa、PEB197-114aa、PEB1211-228aa后血清中的抗体能够显著增强抗体介导的HL-60细胞的调理吞噬作用(P＜0.01),均显著降低C.jejuni在空肠组织中的定植量,同时也均显著降低炎性细胞因子TNF-α的相对表达水平(P＜0.01).PEB155-72aa-KLH+CFA/IFA组,PEB197-114aa-KLH+CFA/IFA组,PEB1211-228aa-KLH+CFA/IFA组中,免疫B cell Knock out(B细胞缺失)小鼠攻毒后,C.jejuni在空肠组织中的定植量均显著高于WT(野生型)小鼠的定植量(P＜0.01).结论 成功鉴定出3个具有良好免疫原性和免疫保护作用的优势B细胞抗原表位(PEB155-72aa、PEB197-114aa、PEB1211-228aa),可用于C.jejuni疫苗的后续开发研究.
