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抗结核中药材抑菌成分的虚拟筛选及验证
目的 采用计算预测的方法,筛选经典抗结核中药材的抑菌成分,并初步评价筛选成分的抗结核作用.方法 建立经典抗结核杀虫方剂月华丸和百合固金汤中百部、白及、川贝母的成分数据库,应用dock方法进行成分筛选,并以耻垢分枝杆菌为研究对象,采用小抑菌浓度实验和抑菌圈方法评价筛选成分的抗结核作用.结果 通过虚拟筛选方法预测了3个潜在抑菌成分,通过体外实验表明,这3个成分都具有抗耻垢分枝杆菌的作用.结论 应用虚拟筛选方法可提高筛选抗结核杀虫药材中抑菌成分的效率.
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弓形虫GRA4基因体外扩增、克隆及在耻垢分枝杆菌中的表达
目的 体外扩增弓形虫RH株致密颗粒蛋白4(GRA4)基因,构建大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭质粒ps3000-GRA4,重组耻垢分枝杆菌,鉴定重组蛋白的抗原性. 方法 用聚合酶链式反应(PCR)方法从弓形虫RH株基因组DNA中扩增GRA4基因,克隆入pGEM-T载体,然后亚克隆法构建ps3000-GRA4大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭质粒,经电转化方法,将GRA4基因片断的穿梭质粒转化到耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis mc2 155)中,用重组耻垢分枝杆菌免疫小鼠,Western blot方法检测免疫小鼠血清中的弓形虫抗体. 结果 成功扩增了弓形虫的GRA4基因并构建克隆质粒pGEMT-GRA4、穿梭质粒ps3000-GRA4,Western blot分析显示,GRA4重组蛋白能被重组质粒免疫小鼠血清识别,分子质量单位约为40.0 ku. 结论 重组耻垢分枝杆菌在小鼠体内表达出了重组蛋白GRA4,具有抗原性,刺激小鼠机体产生了抗弓形虫的抗体,为弓形虫重组BCG(Bacillus Calmette-Guerin)疫苗的研究奠定了基础.
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3种分枝杆菌耐热蛋白抗原对人γδT细胞的刺激活性研究
目的 研究3种分枝杆菌耐热蛋白抗原体外对人γδT细胞的刺激活性. 方法 分离健康人外周血单个核细胞(PBMC),分别使用人型结核分枝杆菌H37Ra耐热蛋白抗原(H37Ra-HAg)、牛型结核分枝杆菌BCG耐热蛋白抗原(BCG-HAg)和耻垢分枝杆菌耐热蛋白抗原(MS-HAg)进行刺激并持续培养12d,采用流式细胞仪检测增殖细胞中γδT细胞数量及CD4+T细胞所占比例. 结果 H37Ra-HAg刺激组扩增细胞中γδT细胞的比例和数量均显著高于BCG-HAg、MS-HAg刺激组和IL-2对照组[((50.52±5.40)％v.s(7.31±3.15)％、(5.82±3.42)％、(5.56±2.68)％);(9.63±1.64)×106 v.s(0.69±0.36)×106、(0.57±0.22)×106、(0.34±0.18)×106))].BCG-HAg刺激组扩增细胞中CD4+T细胞的比例和数量均显著高于H37Ra-HAg刺激组和IL-2对照组[(73.56±7.12％、66.93±7.65)％v.s(23.18±6.29)％、(52.61±5.37)％;(4.75±0.86)×10 6、(3.28±0.59)×106 v.s(2.71±0.65)×106、(1.63±0.45)×106].而BCG-HAg刺激组和MS-HAg刺激组扩增细胞中γδT细胞的比例和数量和IL-2对照组相比并无显著性差异.结论 H37Ra-HAg具有促进γδT细胞增殖活性,BCG-HAg和MS-HAg具有促进CD4+T细胞增殖活性,BCG-HAg和MS-HAg无刺激γδT细胞增殖活性.
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间日疟原虫PvMSP1-19基因重组耻垢分枝杆菌疫苗的构建与鉴定
目的 体外扩增间日疟原虫pvMSP1-19基因,构建大肠埃希菌-穿梭质粒PMV261/pvMSP1-19和电转化耻垢分枝杆菌.方法 采用聚合酶链反应(PCR),体外扩增间日疟原虫的pvMSP1-19基因,克隆入PMD19-T载体,构建亚克隆PMV/pvMSP1-19大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭质粒；电转化方法将PMV/pvMSP1-19穿梭质粒转化到耻垢分枝杆菌中.并热诱导此重组分枝杆菌,SDS-PAGE电泳观察pvMSP1-19蛋白的表达,Western blot鉴定其免疫学活性.结果 成功扩增了间日疟原虫pvMSP1-19基因,并且正确构建PMV/pvMSP1-19穿梭质粒和转化耻垢分枝杆菌.采用Westernblot证实该重组耻垢分枝杆菌表达的pvMSP1-19蛋白能被间日疟患者的血清识别.结论 构建的重组耻垢分枝杆菌能表达pvMSP1-19蛋白,该蛋白具有免疫反应性,为pvMSP1-19基因重组BCG疫苗的研制提供了必要的基础.
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人类乳头瘤病毒16型E7C亚基因在耻垢分枝杆菌中的表达
目的 在耻垢分枝杆菌Mycobaterium smegmatis mc2155中表达人类乳头瘤病毒16型E7C亚基因,为其重组BCG疫苗的研究奠定基础.方法 采用电穿孔转化法将重组质粒pBCG-E7C导入耻垢分枝杆菌(M. smegmatis mc2155)中,通过卡那霉素抗性筛选经PCR鉴定的重组M. smegmatis mc2155,培养于middlebrook7H9 broth(M7H9)培养基中,并添加10%M7H9 enrichment ADC和0.05%Tween 80,37 ℃培养48 h～72 h,42 ℃诱导表达5 h,表达产物进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及Western blot分析.结果 成功构建pBCG3000-E7C质粒,SDS-PAGE显示表达产物的分子质量单位约为6.5 ku,与预期理论值相符,Western blot分析表达产物能被宫颈癌患者血清识别.结论人类乳头瘤病毒16型E7C基因在M. smegmatis mc2155中成功表达.
关键词： 人类乳头瘤病毒16型 E7C基因 耻垢分枝杆菌 基因表达 -
基因工程重组耻垢分枝杆菌研究进展
耻垢分枝杆菌(M ycobacterium smegmatis,MS)是一种在自然界中普遍存在的非致病性分枝杆菌.随着基因工程技术的发展,选择MS作为载体已在细菌、病毒、肿瘤和寄生虫等领域得到广泛应用,本文就基因工程重组MS的构建及免疫效果的研究进展作一综述.
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耻垢分枝杆菌与结核分枝杆菌抗原的交叉免疫应答研究
目的 探讨耻垢分枝杆菌(Mycobacteria smegmatis,MS)与结核分枝杆菌(Mycobacteria tuberculosis,MTB)抗原及其免疫原性的交叉情况.方法 以低温超声破碎方法提取MS和MTB菌体抗原,通过Western blot观察菌体抗原与抗血清的交叉免疫应答.将超声破碎的菌体抗原与不完全弗氏佐剂混匀后肌肉注射于小鼠,免疫后7 d以ELISPOT技术及流式细胞学技术检测小鼠脾脏淋巴细胞经不同细菌抗原分别刺激后产生的各类细胞因子水平,ELISA技术检测血清中抗体效价水平.结果 MS与MTB间存在一些交叉抗原,经两细菌致敏的小鼠均能对不同分枝杆菌抗原产生以细胞免疫为主的免疫应答,CD4+及CD8+T淋巴细胞分泌IL-2、IFN-γ水平均较未免疫组明显增高(P<0.05), 对非分枝杆菌属布氏杆菌的对照抗原几乎不产生细胞免疫应答.结论 MS与MTB间存在这些共同抗原使MS致敏动物能引起针对结核分枝杆菌特异性免疫应答,为MS用于结核新疫苗佐剂等研究提供科学依据.
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恶性疟原虫FCC-1/HN株裂殖子表面抗原2基因在M.smegmatis mc2155中的表达
目的研究裂殖子表面抗原2 (merozoite surface antigen 2,MSA2)基因重组BCG疫苗的保护作用. 方法采用电穿孔转化法将重组质粒pBCG/MSA2导入耻垢分枝杆菌(M.smegmatis)mc2 155中,通过卡那霉素抗性筛选并经PCR鉴定的重组M.smegmatis mc2 155培养于middlebrook 7H9 broth (M7H9) 培养基,并添加10% M7H9 enrichment ADC 和0.05% Tween80,48～72?h后于45℃进行30?min的诱导表达,表达产物进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及Western blot分析. 结果 SDS-PAGE及Western blot分析结果均显示在相对分子质量(Mr)约31×103的位置上可见明显的蛋白条带,并与MSA2基因编码序列推断的Mr相符. 结论恶性疟原虫裂殖子表面抗原2可在M.smegmatis中表达,这些结果将为恶性疟原虫多价BCG疫苗的研制提供有用的资料.
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低频低强度超声对耻垢分枝杆菌细胞壁通透性影响的实验研究
目的 探讨不同剂量低频低强度超声对耻垢分枝杆菌细胞壁通透性的影响.方法 改变超声辐照耻垢分枝杆菌的声强和时间,通过流式细胞仪检测菌体内双醋酸酯(FDA)、碘化丙啶(PI)荧光强度的变化;电镜对比观察菌体超微结构的改变.结果 随着超声辐照耻垢分枝杆菌剂量的增加:(1)菌体内FDA荧光强度逐渐减弱(P＜0.01);(2)菌体内PI荧光强度逐渐增强(P＜0.05);(3)电镜观察到细胞壁破裂、菌体内脂滴增多、形态改变等逐渐加重现象.结论 一定剂量的低频低强度超声可增加耻垢分枝杆菌细胞壁的通透性.
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以耻垢分枝杆菌为模式菌快速筛选新型抗结核药物
目的:评价以耻垢分枝杆菌(Msm)进行抗结核药物筛选的可行性与局限性,并应用该菌快速筛选新型抗结核药物先导物.方法:测定抗结核药物对Msm的小抑菌浓度(MIC);用基于微孔板的高通量方法筛选抑制Msm和结核分枝杆菌(MTB)的化合物;用MTT法测定抗结核化合物的细胞毒性.结果:靶向于分枝菌酸和蛋白质合成、能量和核酸代谢的药物,在抑制Msm和MTB方面具有平行性;从7万余样品中筛选到5个对MTB(H37Rv)的MIC小于10 μg·mL-1的化合物;其中的IMBYH2232为喹啉胺类化合物,对MTB(H37 Rv)的MIC为0.125 μg·mL-1,该化合物对巨噬细胞J774A.1、人肝细胞L02和人肾上皮细胞293T的ID50分别为12.5,15.2和10.5 μg·mL-1.结论:本研究确定了Msm高效快速表型筛选模型的可行性与局限性,发现了具有极强的抗结核活性的化合物.
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无细胞耻垢分枝杆菌疫苗的Ⅰ期临床研究
目的:通过Ⅰ期临床研究探讨无细胞耻垢分枝杆菌疫苗(M.S疫苗)的人群安全性和耐受性,并初步观察该疫苗对结核病高危人群皮试反应强度的影响.方法:给55例健康志愿者注射不同剂量的疫苗(8.7,17.5和35.0 μg),每例注射6次,每2周注射1次.通过对受试者的随访、心率和血压测试、血液常规、尿液常规、肝功能、胸部X-片以及肝、胆、脾、胰的B超检查以及PPD皮肤试验,评估M.S疫苗的不良反应,并比较疫苗注射前后PPD反应强度的变化.结果:在55例、330例次M.S疫苗注射过程中,发生14例、17例次的轻度不良反应,包括局部疼痛、淋巴结肿大、发热、局部硬结、心慌、皮疹和乏力,轻度不良反应总发生率为25.5%(14/55),未发生中度及重度不良反应;PPD皮试强阳性者经不同剂量M.S疫苗的注射,PPD皮试反应强度均显著降低(P＜0.05).结论:M.S疫苗具有较高安全性,并可显著降低结核病高危人群PPD皮试反应的强度.
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乙酰丙酸-十二烷基硫酸钠对大肠埃希菌、耻垢分枝杆菌、结核分枝杆菌的杀灭作用研究
目的 研究消毒剂乙酰丙酸-十二烷基硫酸钠(levulinic acid,sodium dodecyl sulfate,LVA-SDS)对大肠埃希菌、耻垢分枝杆菌、结核分枝杆菌标准株H37Rv的杀灭作用.方法 按照2002年版卫生部《消毒技术规范》要求,同时参照美国临床和实验室标准协会(Clinical and Laboratory Standards Institute,CLSI) M07-A9的试验方法,在96微孔板上采用微量培养法和悬液定量杀菌试验,分别检测LVA-SDS的低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)和低杀菌浓度(minimal bactericidal concentration,MBC)以及不同浓度的LVA-SDS对大肠埃希菌、耻垢分枝杆菌、结核分枝杆菌标准株H37Rv的杀灭作用.结果 LVA对大肠埃希菌作用后的MIC值、MBC值均为0.3％LVA,对耻垢分枝杆菌作用后均为0.6％LVA,对结核分枝杆菌标准株H37Rv作用后均为0.075％LVA.LVA-SDS对大肠埃希菌作用后的MIC值、MBC值均为0.3％LVA+0.03％ SDS,而对耻垢分枝杆菌作用后均为0.6％LVA+0.06％SDS,对结核分枝杆菌标准株H37Rv作用后均为0.075％LVA+0.0075％ SDS.一定浓度范围的LVA-SDS随着时间(1～10 min)的延长,对大肠埃希菌、耻垢分枝杆菌的杀灭作用逐渐增强.5％LVA+0.5％SDS作用3 min对大肠埃希菌、耻垢分枝杆菌的杀灭率均达到100％.结论 LVA-SDS对大肠埃希菌、耻垢分枝杆菌、结核分枝杆菌标准株H37Rv均有较好的杀灭作用,具有较强的实际应用前景.
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模拟实验在病原生物学与免疫学实验教学中的应用
病原生物学实验对象多为病原生物体,免疫学实验所用试剂多为诊断性抗体.因此传统真实的实验,例如:结核分枝杆菌镜检、钩虫卵镜检、免疫学玻片凝集实验与斑点ELISA实验等具有潜在生物安全和实验成本高昂的特点,在本实验室难以大规模开展.而模拟实验是本实验室在实验成本增加与生物安全压力下,开展地一类选用替代标本或试剂模拟真实实验过程与结果的实验.此类模拟实验在本实验室开展的过程中能够有效避免生物安全与实验成本高昂的问题,实验过程与结果相对真实有效.因此,在对医学生实践能力培养与课程知识体系的构建上,此类模拟实验具有重要意义.
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耻垢分枝杆菌疫苗对小鼠巨噬细胞产生一氧化氮的影响
目的 探讨耻垢分枝杆菌疫苗对小鼠腹腔巨噬细胞产生一氧化氮的影响.方法 将Balh/c小鼠随机分成生理盐水对照组和耻垢分枝杆菌疫苗低、中、高剂量组,分别注射生理盐水和不同剂量的耻垢分枝杆菌疫苗.取小鼠腹腔巨噬细胞体外培养,化学显色法测定培养上清中一氧化氮的含量.结果 生理盐水对照组和耻垢分枝杆菌疫苗低、中、高剂量组产生的一氧化氮分别为(3.50±3.11)、(16.63±6.47)、(13.97±6.20)和(7.55±2.26)ng/ml,不同剂量疫苗免疫小鼠产生的一氧化氮水平均显著高于对照组(P<0.01).结论 耻垢分枝杆菌疫苗可促进小鼠巨噬细胞产生一氧化氮.
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耻垢分枝杆菌蛋白酶体辅助因子 A 的敲除和功能探讨
目的：用同源重组方法构建耻垢分枝杆菌 MC2155蛋白酶体辅助因子 A(proteasome accessory factor A,PafA)基因敲除菌株,初步探究 PafA 基因的缺失对耻垢分枝杆菌的生长活力及药物敏感性的影响。方法对耻垢分枝杆菌基因组中 PafA 两侧序列分别进行扩增,连接载体及目的片段构建自杀载体,电击转入耻垢分枝杆菌中,与基因组中的 PafA 进行同源交换,通过蓝白斑筛选出基因敲除菌株。对敲除菌株与野生菌株每隔3 h 测定其正常条件、厌氧条件下及加不同浓度异烟肼、利福平和乙胺丁醇条件下菌液的吸光度(A580)值,比较其生长活力,连续2 d,绘制生长曲线。结果通过同源重组方法成功得到了耻垢分枝杆菌的 PafA 基因敲除株,不同药物浓度及生长条件下两者的生长曲线呈“S”形,两者之间的生长速度未见明显差别。结论 PafA 虽然是原核细胞类泛素-蛋白酶体系统中的重要组成部分,但它的缺失并未引起显著的菌株生长活力和药物敏感性的变化,提示 PafA 的主要功能可能不在于此,菌株另外还有代偿的途径,PafA 基因功能并不是影响耻垢分枝杆菌生长及药物作用效果的唯一因素,对它的功能研究需要更加深入。
关键词： 耻垢分枝杆菌 蛋白酶体辅助因子 A 同源重组 药物敏感性 -
小毛莨内酯对重组耻垢分枝杆菌eis基因表达的影响
目的 研究小毛莨内酯(Ternatolide,Tern)对重组耻垢分枝杆菌生长增殖及其eis基因表达的影响.方法 将5×105 MS-eis-PMV261接种于LB培养基培养并加入200 mg/L的Tern作为实验组,MS-eis-PMV261单独培养作为对照,不同时间点测量取菌液波长为600 nm的A值,根据所测A值绘制增殖曲线；提取菌液DNA以RT-PCR方法检测Tern对eis基因表达的影响；免疫印迹法SDS-PAGE及Western Blot检测Tern对EIS蛋白表达的影响.结果 Tern对两组重组耻垢分枝杆菌增殖差异无统计学意义(P ＞0.05)；Tern可抑制eis基因的表达(P＜0.05)；SDS-PAGE及Western Blot检测发现Tern可显著降低EIS蛋白的表达(P＜0.05).结论 Tern对重组耻垢分枝杆菌的增殖无影响,但可抑制结核分枝杆菌eis基因及其表达的蛋白.该结果对研究持留性结核分枝杆菌的药物治疗提供了实验依据.
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GLS和IL-12偶联重组耻垢分枝杆菌免疫效果的观察
目的:研究携带编码人天然颗粒溶素(GLS)和小鼠IL-12基因质粒(pZM03)偶联重组耻垢分枝杆菌(ATCC607)经鼻黏膜免疫小鼠后,小鼠体内的免疫状况.方法:BALB/c小鼠36只,随机分为生理盐水、pZM03、ATCC607、卡介苗(BCG)、重组ATCC607(即携带pZM03的ATCC607)、灭活重组ATCC607组;采用滴鼻法免疫小鼠,BCG组0、14天各1次,其它组0、4、14天各1次,第0天免疫后4周处死小鼠,用ELISA检测血清中IFN-γ、IL-12、IgG2a、lL-4的分泌水平和淋巴细胞PPD诱导的IFN-γ分泌水平以及肺泡灌洗液特异性SIgA的水平,用MTS法检测免疫小鼠脾淋巴细胞增殖情况.结果:重组ATCC607血清中IFN-γ、IL-12水平与BCG组无明显差异但明显高于其他组(P＜0.05),IgG2a水平重组ATCC607组高于BCG组和其他组(P＜0.05),各组间IL-4水平差异无统计学意义.重组ATCC607、BCG、灭活重组ATCC607及ATCC607组用PPD均可诱导小鼠脾淋巴细胞增殖,各组间差异无显著意义,但与生理盐水和pZM03组间差异有显著意义(P＜0.05).重组ATCC607组PPD诱导淋巴细胞IFN-γ明显高于其它组(P＜0.05),与BCG组比较无显著差异.重组ATCC607等含菌组经鼻黏膜免疫可产生黏膜特异性SIgA.结论:重组ATCC607经鼻黏膜免疫小鼠后,机体特异性免疫特别是细胞免疫和黏膜免疫增强,为重组ATCC607治疗结核病的研究奠定了基础.
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用单水相发酵体系生产4-雄烯二酮的新技术研究
本实验研究了应用不同的乳化剂、种子培养周期、接种量、发酵周期及溶氧量对耻垢分枝杆菌Mycobacterium smegmatis ZS3进行发酵生产4-雄烯二酮的影响，并对从摇瓶发酵到200 L发酵罐发酵的效价及进行200 L发酵罐菌种发酵的流加补糖方案进行了研究。研究结果显示，在进行200 L发酵罐菌种发酵的过程中，将溶氧量控制为25%-30%，在发酵60 h后进行流加补葡萄糖且将残糖的浓度维持在1 g/L时，终植物甾醇转化为4-雄烯二酮的效价高于9.5 g/L。
关键词： 耻垢分枝杆菌 4-雄烯二酮 溶氧 摇瓶发酵 200 L发酵罐流加发酵 -
耻垢分枝杆菌与卡介苗作为载体在鼠结核病治疗中的作用比较
目的 比较耻垢分枝杆菌(MS)与卡介苗(SCG)作为载体在鼠结核病治疗中的作用.方法 分别以不同剂量的MS和BEG免疫BALB/c小鼠,观察二者的致病作用.以结核分枝杆菌H37Rv感染BALB/c小鼠4周后,分别用生理盐水、MS、GLS/IL-12、重组MS、BCG及GLS/IL-12重组BCG治疗6次,于第6次治疗后7 d处死小鼠,检测肺、脾荷菌量、血清IL-12和IFN-γ水平、脾淋巴细胞IFN-γ和TNF-α的水平及肺、脾组织中颗粒溶素表达,并观察小鼠肺组织病理改变.结果 重组MS和重组BCG组器官荷菌量明显低于MS和BCG组;重组MS和重组BCG组血清IL-12和IFN-γ水平明显高于MS和BCG组,MS和BCG组明显高于生理盐水组;重组MS和重组BCG组脾淋巴细胞IFN-γ和TNF-α的水平明显高于其他组;MS与BCG组比较,重组MS与重组BCG比较,荷菌量、病理变化、肺、脾中的IL-12和IFN-γ水平差异均无显著意义;淋巴细胞中的IFN-γ和TNF-α水平,MS与BCG组差异有显著意义,而重组MS与重组BCG组差异无显著意义;重组MS和重组BCG组在肺、脾中均有颗粒溶素表达;MS所致病变比相同剂量BCG轻.结论 MS与BCG一样,可将要表达的基因靶向递送到相应的组织,并诱导特异性细胞免疫,同时其在体内的副作用低于BCG,因此可作为良好的有机载体.
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重组IL-17A耻垢分枝杆菌的构建及其对巨噬细胞表达炎症因子的影响
目的 构建携带小鼠IL-17a编码基因的重组耻垢分枝杆菌(Recombinant Mycobacterium smegmatis,rMs),并研究其对巨噬细胞表达炎症因子的影响.方法 双酶切质粒pET28a/mIL-17a和pMFA41,转化感受态E.coli TOP10,构建大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达质粒pMFA41/mIL-17a,电转化耻垢分枝杆菌mc2155,经SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物.分别以MOI为10∶1加入rMs、rMs+anti-IL-17A、Ms感染小鼠巨噬细胞系RAW264.7,并设PBS对照组.荧光定量PCR法检测转染细胞中β防御素-2(Defensin β2,Defb-2)、巨噬细胞炎症蛋白(Macrophage inflammatory protein,MIP)-1α和MIP-2β基因mRNA水平；ELISA法检测细胞培养上清中MIP-1α、MIP-2β、IL-4及IFNγ蛋白的表达水平.结果 重组表达质粒pMFA41/mIL-17a经双酶切及测序鉴定证明构建正确；表达的重组蛋白mIL-17A可与大鼠抗小鼠IL-17A单克隆抗体特异性结合,在相对分子质量约20 000处可见特异性反应条带；rMs组RAW264.7细胞中Defb-2、MIP-1α、MIP-2β基因mRNA水平较Ms组及PBS组明显升高(P＜0.01);rMs组细胞培养上清中MIP-1α、MIP-2β、IL-4和IFNγ的蛋白浓度较Ms组及PBS组明显升高(P＜0.01).结论 成功构建了表达具有生物学活性mIL-17A的重组耻垢分枝杆菌疫苗,该疫苗可有效促进体外培养的巨噬细胞表达MIP、Defb2、IFN-γ及IL-4,为新型疫苗的研发奠定基础.
