首页 > 文献资料
-
粉尘螨过敏原蛋白Der f 3的表达纯化及活性鉴定
目的:制备有生物学活性的粉尘螨过敏原蛋白Der f3.方法:构建带有Strep Ⅱ标签的原核表达体系Rosetta-pET44a-Derf3高效表达目的蛋白,分别用梯度透析法和亲和层析法对其进行复性纯化,通过Western Blot试验验证目的蛋白的有效表达,后用丝氨酸蛋白酶特异荧光底物及粉尘螨过敏病人血清分别鉴定目的蛋白的酶学活性及免疫学活性.结果:利用原核表达体系成功表达了目的蛋白Derf3,Western Blot结果显示有目的条带出现.复性纯化后的过敏原蛋白Der f3能够成功降解丝氨酸蛋白酶特异性荧光底物,ELISA试验结果显示该蛋白血清特异性IgE在4级以上粉尘螨过敏病人中阳性率为4％.结论:成功获得有酶学活性及免疫学活性的粉尘螨过敏原蛋白Der f3,为生产高质量的诊断试剂和疫苗奠定了基础.
-
粉尘螨主要变应原基因Der f1和Der f3改组的研究
目的:探索粉尘螨变应原基因Der f 1和Der f 3改组条件,以期获得粉尘螨变应原融合突变基因.方法:RT-PCR方法扩增粉尘螨变应原Der f 1和Der f 3基因,用DnaseⅠ分别酶解Der f 1和Der f 3基因10、15、20、25、30 min;酶解相同时间的Der f 1和Der f 3基因片段两两混合,采用DNA shuffling技术对粉尘螨变应原Der f 1和Der f 3基因进行重组,琼脂糖凝胶电泳检测重组子.结果:以Der f 2 F和Der f 2 R为引物在酶切10、15、20、25、30 min均可扩增出清晰条带;以Der f 1 F和Der f 1 R、Der f 1 F和Der f 2 R、Der f 2 F和Der f 1 R为引物在酶切10、15、20、25、30 min的模板中均无条带出现;而其他引物组合则在不同酶切时间的模板中均出现条带.结论:通过多种条件的组合,可获得多个粉尘螨变应原基因Der f 1和Der f 3间的融合基因,为大规模制备高效、低价的哮喘疫苗奠定了基础.
