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用原子力显微镜研究炎症反应中粘附分子间相互作用
在炎症反应中,白细胞在血液流动动力和粘附分子的作用下在血管内皮上的滚动,是白细胞从流动的血液中浸润、迁移到炎症部位整个过程的第一步.白细胞在内皮细胞上滚动由选择素分子与其配体分子相互作用所导致,其中P选择素分子(P-selectin)与其对应的P-选择素糖蛋白配体-1(PSGL-1)的相互作用起着重要的作用.原子力显微镜技术能定量分析P-selectin/PSGL-1相互作用的动力学反应.
关键词： P选择素 P-选择素糖蛋白配体-1 原子力显微镜 -
炎症反应中选择素粘附分子与配体间相互作用的研究
在炎症反应中,白细胞在内皮细胞上滚动由选择素分子与其配体分子相互作用所导致,选择素分子有3种,P选择素分子(P-selectin)、E选择素分子(E-selectin)、L选择素分子(L-selectin),选择素分子与其对应的P-选择素糖蛋白配体-1(PS-GL-1)的相互作用起着重要的作用.用等离子共振、流动腔、原子力显微镜等技术能定量分析选择素分子与其配体分子相互作用的动力学反应.
关键词： 选择素 P-选择素糖蛋白配体-1 动力学 -
P-选择素基因S290 N和P-选择素糖蛋白配体-1基因M62 I多态性与缺血性脑梗死临床关联性研究
目的 探讨P-选择素(SELP)基因S290N和P-选择素糖蛋白配体-1(PSGL-1)基因M62I多态性与缺血性脑梗死的关系.方法 选取148例缺血性脑梗死患者作为脑梗死组,并分为大动脉粥样硬化性(LAA)亚组、心源性脑栓塞(CE)亚组和小动脉闭塞性(SAO)亚组;88例正常人群作为正常对照组.运用基因测序方法检测所有受试者SELP基因S290N和PSGL-1基因M62I的基因多态性.结果 与正常对照组比较,脑梗死组及其亚组S290N基因型和等位基因频率差异无统计学意义(均P>0.05);脑梗死组M62I基因型和等位基因频率差异有统计学意义(均P<0.01);LAA亚组M62I基因型差异无统计学意义(χ2=5.889,P=0.053),但等位基因频率差异有统计学意义(χ2=6.156,P=0.021);CE亚组基因型和等位基因频率差异均无统计学意义(χ2=1.693,P=0.429;χ2=1.372,P=0.238);SAO亚组基因型和等位基因频率差异均有统计学意义(χ2=12.572,P=0.002;χ2=8.736,P=0.004).S290N与缺血性脑梗死风险无相关性(均P>0.05).M62I显性模型和超显性模型与缺血性脑梗死风险有相关性(OR=2.662,95%CI:1.531~4.630,P=0.000;OR=0.392,95%CI:0.219~0.701,P=0.001),而隐性模型和加性模型与缺血性脑梗死风险无相关性(OR=1.428,95%CI:0.528~3.862,P=0.630;OR=2.121,95%CI:0.766~5.872,P=0.156).结论 PSGL-1基因M62I多态性与缺血性脑梗死之间具有相关性.
关键词： P-选择素 P-选择素糖蛋白配体-1 缺血性脑梗死 基因多态性 亚型 -
清肾颗粒对肾纤维化大鼠P-selectin/PSGL-1的干预作用
目的 观察清肾颗粒对5/6肾切除肾纤维化模型大鼠肾组织P-选择素(P-selectin)/P-选择素糖蛋白配体-1(P-selectin glycoprotein ligand 1,PSGL-1)表达的影响及其抗肾纤维化的作用机制.方法 将72只雄性SD大鼠随机分为正常组,模型组,清肾颗粒高、中、低剂量组,氯沙坦组,每组12只;除正常组外,剩余60只大鼠均按手术方法制备5/6肾切除肾纤维化模型,各组动物均从模型复制1周后开始灌胃给药,清肾颗粒各剂量组和氯沙坦组分别予以一定比例的清肾颗粒和氯沙坦水溶液灌胃,模型组和正常组均以等比例温水灌服.12周后处死大鼠,取残余肾组织用于检测P-selectin/PSGL-1蛋白及其mRNA的表达水平.结果 与正常组比较,模型组P-selectin、PSGL-1蛋白及其mRNA相对表达水平明显升高,差异均有统计学意义(P＜0.05);与模型组比较,清肾颗粒各剂量组和氯沙坦组P-selectin、PSGL-1蛋白及其mRNA表达水平降低,差异均有统计学意义(P＜0.05);与氯沙坦组比较,清肾颗粒高剂量组P-selectin、PSGL-1蛋白及其mRNA表达水平降低,差异均有统计学意义(P＜0.05);清肾颗粒各组之间比较,清肾颗粒高剂量组P-se-lectin、PSGL-1蛋白及其mRNA表达水平低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 清肾颗粒能够降低5/6肾切除大鼠肾组织P-selectin及PSGL-1的表达,这可能是其抗肾纤维化的机制之一.
关键词： 清肾颗粒 P-选择素 P-选择素糖蛋白配体-1 肾纤维化 -
P-选择素和 P-选择素糖蛋白配体-1血液水平及基因多态性与缺血性脑梗死
P-选择素(SELP)和 P-选择素糖蛋白配体-1(PSGL-1)水平基因多态性，可能是缺血性脑梗死(ICI)发病的因素之一。本文综述 SELP、PSGL-1的结构特点和功能，基因多态性位点分布及其外周血水平和基因多态性变化与 ICI 关联性的国内外研究进展。
关键词： P-选择素 P-选择素糖蛋白配体-1 基因多态性 缺血性脑梗死 -
融合蛋白TAP-SSL5抑制动静脉血栓形成
目的:探讨重组抗炎、抗凝双效融合蛋白蜱抗凝血肽(TAP)-金黄色葡萄球菌超抗原样蛋白-5(SSL5)对动静脉血栓形成的影响和机制.方法:采用基因重组技术构建TAP-SSL5基因,进而制备融合蛋白TAP-SSL5,通过流式细胞检测技术研究重组蛋白TAP-SSL5与粒细胞表面P-选择素糖蛋白配体1(P-selectin glycoprotein ligand-1,PSGL-1)结合的特性;采用反应底物法在体外检测融合蛋白TAP-SSL5对活化的凝血因子Xa(factor Xa,FXa)活性的抑制作用.采用FeCl3诱导的SD大鼠下腔静脉血栓模型,研究TAP-SSL5对静脉血栓形成的影响;采用FeCl3诱导的C57BL/6J小鼠肠系膜动脉血栓模型,在双光子显微镜下连续检测TAP-SSL5对动脉血栓形成的影响.结果:TAP-SSL5可与粒细胞表面PSGL-1结合,并抑制粒细胞与P-selectin和血小板的结合.TAP-SSL5呈剂量依赖性地抑制FXa活性(P<0.01).体内实验中TAP-SSL5可明显抑制FeCl3诱导的SD大鼠下腔静脉及C57BL/6J小鼠肠系膜动脉血栓的形成.结论:融合蛋白TAP-SSL5具有抗炎和抗凝双重效果,可以明显抑制动静脉血栓的形成.
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融合蛋白TAP-SSL5对血小板与粒细胞结合的影响
目的 探讨融合蛋白TAP-SSL5对血小板与粒细胞结合作用的影响.方法 采用CCK-8试剂盒检测TAP-SSL5对细胞活力的影响；流式细胞仪检测THP-1细胞表面CD162(PSGL-1)的表达,及TAP-SSL5对小鼠抗人CD162单抗KPL-1与THP-1细胞结合的抑制作用.以20 μmol/L ADP激活人血小板,采用流式细胞仪、瑞氏-姬姆萨染色检测血小板与THP-1细胞或人中性粒细胞的结合情况,并研究TAP-SSL5的干预作用.结果 TAP-SSL5浓度在30 mg/L或以下时对THP-1细胞或中性粒细胞的活力无明显影响.流式细胞仪检测显示,TAP-SSL5(终浓度10 mg/L)能显著抑制KPL-1与THP-1细胞的结合；20μmol/L ADP激活的血小板与THP-1细胞或中性粒细胞的结合率分别为(31.3±8.4)％和(35.6±5.9)％；细胞经10 mg/L TAP-SSL5预先处理后,其结合率分别降至(13.4±6.7)％和(10.4±6.4)％(P＜0.01).瑞氏-姬姆萨染色的结果表明,TAP-SSL5和SSL5均可抑制激活的血小板与中性粒细胞的结合(P＜0.05).结论 TAP-SSL5可通过与PSGL-1的结合,而直接抑制激活的血小板与粒细胞的结合.
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抗炎、抗凝双效融合蛋白TAP-SSL5表达载体的构建及其功能研究
目的 构建一种具有抗炎和抗凝双效功能的融合蛋白,并对共功能进行初步鉴定.方法 将重组金黄色葡萄球菌超抗原样蛋白-5(staphylococcal supemntigen-like protein-5,SSL5)与蜱抗凝血肽(tick anticoagulant peptide,TAP)融合,从金黄色葡萄球NCTC8325菌株中克隆SSL5基因;经DNA重组技术,将编码pelB前导序列、SSL5和TAP的基因重组并克隆于原核表达载体pHOG21中,再转染于大肠杆菌B121中扩增表达,制备融合蛋白SSL5-TAP或TAP-SSL5,采用流式细胞仪检测融合蛋白是否和SSL5一样,具有与粒细胞表面P-选择素糖蛋白配体-1(P-selectin glycoprotein ligand-1,PSGL-1)结合的特性;采用反应底物法在体外检测融合蛋白对活化的凝血因子X(factor Xa,FXa)活性的抑制作用.结果 TAP-SSL5保留了SSL5与PSGL-1结合的特性,并且融合蛋白TAP-SSL5可显著抑制FXa的活性(P<0.01),抑制率达39.5%.结论 融合蛋白TAP-SSL5是一种以PSGL-1为靶向的新型抗炎、抗凝双效分子.
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P-selectin糖蛋白配体-1的基因克隆及其Ig融合蛋白的表达和纯化
目的:克隆P-selectin糖蛋白配体-1的基因,表达和纯化其Ig融合蛋白.方法:RT-PCR法克隆出P-选择素糖蛋白配体-1(CD162)cDNA,构建真核表达载体,DEAD-Dextran法转染C0S7细胞,上清经纯化后,分别使用Western Blot和流式细胞仪鉴定CD162-hIgFc融合蛋白的性质和活性.结果:RT-PCR克隆出801bp的CD-162 cDNA片段,插入载体构建出pIg-CD162,将其转染COS7细胞后获得CD162-hIgFc融合蛋白,分子量为74KD.Western Blot证实其为CD162-hIgFc融合蛋白,流式细胞仪证明获得的CD162-hIgFc融合蛋白能够识别血小板表面的CD62P.结论:本研究成功制备了CD162-hIgFc融合蛋白,为进一步探讨P选择素与其配体CD162之间的作用打下坚实的基础.
关键词： P-选择素糖蛋白配体-1 融合蛋白
