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快速建立心肌细胞缺氧/复氧损伤模型的方法
目的 探索一种快速建立心肌细胞缺氧/复氧损伤模型的方法.方法 取新生1d ～3d SD乳鼠,原代心肌细胞培养,观察连二亚硫酸钠(Na2S2O4)不同浓度(1,2,4mmol/L)分别缺氧1h/复氧24h及在4mmol/LNa2S2O4的终浓度下,缺氧30min,观察不同复氧时间(1h,2h,3h,4h,5h,6h),利用MTT法检测心肌细胞存活率及化学比色法测定乳酸脱氢酶(LDH)的释放,并进行细胞形态学观察.结果 乳鼠心肌细胞给予不同浓度Na2S2O4进行缺氧1h/复氧24h处理后,发现Na2S2O4浓度为4mmol/L时,MTT的OD值与正常对照组相比有显著性差异,同时上清液中LDH含量升高,差异具有统计学意义(P＜0.01).在Na2 S2 O4终浓度为4mmol/L的基础上,给予缺氧30min,复氧1h～6h,心肌细胞存活率显著降低,上清液中LDH释放显著增加,差异具有统计学意义(P＜0.01).结论 使用Na2S2O4建立乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤模型方便、快捷、高效.
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Na2S2O4通过诱导环境胁迫次生代谢提高五味子药材质量机制研究
目的 探讨环境胁迫产生的活性氧能够增强植物的次生代谢改变药材的质量的方法.方法 分别采用0.004μmol/L、0.4μmol/L和40 μ mol/L Na2S2O4处理五味子鲜果,研究活性氧、抗氧化酶活性及木脂素类成分三者之间关系.结果 0.4 μμmol/L Na2S2O4显著降低超氧化物歧化酶(SOD)活性,40μ mol/L Na2S2O4显著降低SOD活性;过氧化氢酶(CAT)活性变化主要发生在第1～2天和5～6天,与浓度呈负相关,0.004μmol/L和0.4μmol/L Na2S2O4处理组增加CAT活性,40μmol/L处理组CAT活性变化很小;过氧化物酶(POD)活性变化主要发生在5～6天,三个浓度均显著增加;抗坏血酸氧化酶(APX)活性变化不明显.苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性第5天和第6天显著升高,促进木脂素类成分生物合成,其中40μmol/L Na2S2O4处理5d为显著,五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素比传统加工方法分别提高24.6％、21.9％、28.0％、19.3％、27.3％.结论 Na2S2O4改变了五味子抗氧化酶活性,提高了次生代谢水平,提高了质量.
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外源性Na2S2O4和干旱逆境对黄芩抗氧化系统相关酶活性的影响
目的 环境影响药材质量的本质原因是活性氧.通过·O2的载体Na2S2O4打破原有的活性氧平衡,模拟胁迫条件下生理过程,增强次生代谢,构建提高药材质量新方法.方法 对中药材黄芩叶面分别喷施40、0.4和0.004μmol/L的Na2S2O4,以不同程度的干旱模型为参照,分析比较Na2S2O4与逆境条件下超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)、抗坏血酸氧化酶(APX)和苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性的差异.结果 干旱状态下植物相关抗氧化酶SOD、CAT、POD活性变化与H2O2作用不尽相同,但均提高了PAL的活性.结论 在活性氧模拟环境胁迫的作用下,能够调节次生代谢,提高药材质量.
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人参皂苷Rd对Na2S2O4致人脐静脉内皮细胞缺氧损伤的保护作用
目的 建立Na2S2O4致人脐静脉内皮细胞(HUVEC)缺氧损伤模型,并观察人参皂苷Rd的保护作用.方法 体外培养HUVEC,实验分为7组:空白对照组、溶媒对照组、连二亚硫酸钠(Na2 S2O4)缺氧损伤组(模型组)、人参皂苷Rd不同浓度组(25 μmol· L-、125 μmol·L-1、625 μmol· L-1)、阳性药组(Nimodipine 50 μmol·L-1),药物干预24 h后,除空白对照组和溶媒对照组外,其余各组用8 mmol·L-1 Na2S2O4诱导HUVEC损伤4h,进行相关指标检测:①倒置显微镜下观察细胞形态.②线粒体琥珀酸脱氢酶(MTT)法检测细胞存活率.③光化学法检测培养液LDH外漏浓度.结果 8 mmol·L-1的Na2S2O4缺氧损伤4h可明显降低HUVEC的增殖活性,增加LDH的外漏,与空白对照组比较有显著性差异(P＜0.01),表明HUVEC Na2S2O4缺氧损伤模型成功;人参皂苷Rd能明显减轻缺氧所致细胞形态学的改变、减轻内皮细胞损伤,提高HUVEC的MTT吸光度值,减少LDH的外漏,与模型组比较有显著性差异(P＜0.01或P＜0.05).结论 人参皂苷Rd对Na2S2O4致缺氧损伤的HUVEC具有保护作用,能提高细胞的存活率及改善其形态.
