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戊四氮诱导癫痫大鼠脑N-cadherins和NT-4的变化及灵芝酸的干预作用
目的:观察戊四氮(PTZ)诱导大鼠癫痫后脑神经型钙粘附素(N-cadherins)和神经营养因子-4(NT-4)变化及应用灵芝酸进行干预与治疗,主要研究灵芝酸预防和治疗癫痫的痫性发作的机理.方法:采用健康的雄性Wistar实验大白鼠33只,按随机分配原则分成正常对照组、癫痫模型组和灵芝酸治疗组每组11只.癫痫模型组与灵芝酸治疗组均采用诱导癫痫亚惊厥发作剂量腹腔注射戊四氮制备Wistar大白鼠慢性点燃痫性模型.在实验室冰盒低温条件下迅速提取大鼠脑组织,采用Western-Blotting方法检测大鼠脑N-cadherins和NT-4的变化.结果:实验性诱导癫痫大鼠痫性模型制备成功,灵芝酸治疗组和癫痫模型组实验动物都达到癫痫点燃的实验标准,与癫痫模型组动物相比,灵芝酸组大鼠潜伏期明显延长,但持续时间之间的差别没有显著性.实验检测Western-Blotting结果发现:PTZ诱导癫痫发作后N-cadherins蛋白表达水平明显高于正常对照组,差异有显著性(P＜0.01);用灵芝酸干预后,N-cadherins的表达有明显下降,差异有显著性(P＜0.01),癫痫模型组大鼠脑NT-4蛋白含量比正常对照组蛋白含量升高,差异具显著性(P＜0.05);灵芝酸组大鼠脑NT-4蛋白含量较癫痫模型组蛋白含量升高,差异具显著性(P＜0.05).结论:灵芝酸作用癫痫大鼠后N-cadherins蛋白表达降低,调整机体病变神经元的兴奋性,灵芝酸还能够增强NT-4的表达从而减轻癫痫发作给神经系统造成的损伤,从而起到抗癫痫作用.
关键词： 癫痫 戊四氮 N-cadherins NT-4 灵芝酸 -
NT-4在成年猴脊髓的表达
目的 探讨NT-4在成年猴脊髓的表达分布情况,为成年猴脊髓中该生长因子的表达提供可靠的免疫组织化学证据.方法 云南成年健康雄性猕猴5只,平均体重6 kg左右,氯氨酮(0.25 ml/kg)肌肉注射麻醉后,Zamboni液经心脏主动脉插管灌注固定动物,取T8脊髓节段入4%多聚甲醛后固定(4℃)6小时.制作20 μm厚的连续冰冻切片,间隔取片后,分别以抗NT-4抗体行免疫组化ABC染色.观察各生长因子在猴脊髓的表达分布情况.结果 NT-4的免疫阳性反应产物在成年猴脊髓腹角神经元、脊髓背角神经元和脊髓中央管(Ⅹ板层)均有分布.结论 成年猴脊髓存在多肽生长因子NT-4的表达,提示多肽生长因子在成年猴脊髓的生理过程中发挥作用.
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针刺对备用背根节和脊髓NT-4表达的影响
目的观察NT-4在针刺部分去背根猫的L6背根节(手术侧和非手术侧)和脊髓表达的时空变化,以了解NT-4与针刺促进脊髓可塑性的关系.方法 25只成年健康雄猫随机分为5组:即正常组,备用根术(动物行单侧部分去背根手术,即切除一侧L1-L5、L7-S2背根节,保留L6为备用根)后7 d组与14 d组、针刺备用根术(动物行单侧部分去背根术后针刺)后7 d组与14 d组.动物处死后,取L6背根节及L3、L5、L6节段脊髓,用兔抗NT-4(1∶200)抗体行免疫组化ABC法染色.观察、计数并比较各组背根节、脊髓实验侧Ⅱ板层(L3、L5、L6)和背核(L3)中NT-4的分布及含量.结果针刺备用根7 d组,针刺侧DRG内NT-4阳性神经元数较正常组和术后7 d组减少(P<0.05),较相应非针刺侧多(P<0.05);针刺14 d组,针刺侧DRG阳性神经元数比针刺7 d组术后14 d和同组非针刺侧增高(P<0.05),且恢复至正常水平.针刺7 d,针刺侧脊髓L6Ⅱ板层NT-4阳性神经元数较术后7 d组及正常组增加(P<0.01).针刺14 d时,L5、L6Ⅱ板层阳性神经元数较正常组及术后14 d组相应节段均增加(P<0.01).针刺后L3背核NT-4阳性神经元数无明显变化(P>0.05).L5Ⅱ板层NT-4阳性神经元在针刺后14 d时比针刺后7 d时增多(P<0.05).结论以上结果提示NT-4与针刺促进脊髓可塑性有关;针刺备用背根对非针刺侧DRG NT-4的表达亦有影响,提示非针刺侧背根节NT-4亦可能参与了脊髓可塑性和针刺促进脊髓可塑性.
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脊髓损伤后DEX治疗上调腹角运动神经元N-4的表达
为探讨在实验性脊髓挤压伤早期,大剂量DEX对内源性NT-4在脊髓腹角运动神经元表达的影响,采用免疫组化ABC法观察了成年大鼠脊髓挤压伤DEX治疗后NT-4在L3节段腹角运动神经元的表达变化.结果:大剂量DEX促进内源性NT-4在脊髓损伤后不同时间的表达.推测DEX在治疗脊髓损伤时除了已知的抗炎作用外,还可能通过促进NT-4的表达,从而产生神经保护作用.
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NT-4在挤压伤脊髓背角表达的时相变化
目的:了解NT-4在挤压伤脊髓背角表达的变化.方法:采用本室建立的成年SD大鼠(T13-L1)脊髓挤压伤模型,分别于术后24h,7h,21h处死动物并设正常对照组,取L3节段脊髓制作20μm厚冰冻连续切片,用抗NT-4抗体按ABC法行免疫组织化学染色.观察NT-4在挤压伤位点尾侧端(L3)背角的表达,计数其免疫阳性神经元和胶质细胞数.结果:NT-4的阳性反应物主要分布于脊髓背角的神经元和胶质细胞.挤压伤后24h,背角NT-4的免疫阳性神经元和胶质细胞数及反应强度与正常者比较无明显变化(P>0.05),但从术后第7h至术后第21h则逐渐增加且高过正常者水平(P<0.01).结论:脊髓挤压伤位点尾侧端背角NT-4的表达从术后第7h开始明显增加,术后第21h时又进一步增多.提示NT-4可能在脊髓挤压伤的早期修复过程中发挥作用.
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内源性GDNF、NT-4对针刺猫脊髓备用根背根节神经元的作用
为了解部分背根切除和针刺及内源性GDNF和NT-4对体外培养备用背根节(DRG)的作用,本研究对5只成年猫进行双侧备用根手术(切除双侧L1～L5和L7～S2 DRG,其中L6 DRG作为备用背根).术后当日开始针刺一侧L6脊神经后肢分布区的两组穴位,即足三里和悬钟、伏兔和三阴交,每天一次,每次30 min,连续针刺7d后无菌条件下取出双侧L6 DRG进行体外培养,24 h后全量换液,并将针刺侧的一部分培养孔的培养液分别用含有200 ng/ml抗GDNF和NT-4抗体培养液替换,分别作为抗GDNF和NT-4抗体封闭组.7 d后终止培养,于显微镜下用显微测微尺测量神经突起的长度;并用抗NSE抗体行免疫细胞化学ABC法染色进行神经元鉴定.结果显示:(1)免疫细胞化学染色可见体外培养的细胞95%以上为NSE阳性细胞,且为典型的体外培养的DRG神经元;(2)体外培养备用根组和抗GDNF抗体组神经突起的平均长度比针刺组的短(P＜0.05);(3)而针刺组神经突起的平均长度与抗NT-4抗体组间无差异(P＞0.05);两抗体组平均突起长度比备用根组的突起长(P＜0.05).本研究结果提示,针刺可促进体外培养DRG神经元突起的生长,进而可能与脊髓可塑性密切相关;内源性GDNF有促进DRG神经元突起生长的作用;而内源性NT-4在DRG神经元突起生长中发挥的作用却不明显.
