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苯并(α)芘致人支气管上皮细胞DNA损伤及与组蛋白H2A单泛素化水平的关系
[目的]通过体外细胞培养途径,探讨苯并(α)芘(benzo[a]pyrene,B[α]P)作用下人支气管上皮细胞(16HBE)DNA损伤与组蛋白H2A单泛素化表达水平的关系. [方法]取对数生长期16HBE细胞,采用2μmol/L B[α]P染毒不同时间(0、1、2、4、8、12、24、48h)进行实验,用碱性单细胞凝胶电泳实验检测细胞DNA损伤水平,并以Olive尾矩值(olive tail moments,OTM)评价DNA损伤程度；用Western-blot法检测组蛋白H2A单泛素化水平. [结果]单细胞凝胶电泳结果显示:2μmol/LB[α]P染毒不同时间时,随着染毒时间的延长,各染毒组细胞DNA损伤程度均明显增高,与对照组相比,差异均有统计学意义( P＜0.01)；Western-blot结果显示:2μmol/L B[α]P染毒不同时间时,与对照组相比,组蛋白H2A的单泛素化水平增高,且在染毒2h后,差异有统计学意义(P＜0.01)；回归分析显示,单泛素化H2A的表达水平与DNA损伤程度存在高度相关,决定系数(R2)为0.910,P＜0.01. [结论]B[α]P染毒致16HBE细胞DNA损伤与组蛋白H2A单泛素化水平之间存在密切关系.
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蓝氏贾第鞭毛虫中国株组蛋白H2A基因的克隆与重组表达
目的 获取蓝氏贾第鞭毛虫中国株GlH2A基因及重组蛋白.方法 PCR扩增获取G1H2A基因,连接至pMD-19T并进行测序分析.连接至pET28a构建表达载体,并转化宿主菌E.coli BL21 (DE3),然后进行异丙基硫代半乳糖苷酶(IPTG)诱导表达.表达产物进行亲和层析纯化,再用Western blotting进行免疫学鉴定.结果 序列测定获得蓝氏贾第鞭毛虫中国株GlH2A基因的编码序列,与美国WB株H2A (GL50803_14256,Accession:NW_001844132)序列完全一致.该基因编码124个氨基酸,预测分子量13 900 Mr,保留了与核小体形成相关的重要氨基酸位点,在大肠埃希菌中获得表达,纯化后纯度达90％以上.Western blotting检测表明重组蛋白能够被抗His6标签抗体识别.结论 克隆得到GlH2A基因编码序列;得到了重组GlH2A蛋白,并进行了纯化,为进一步研究组蛋白及其修饰酶在基因转录调控中的作用奠定了基础.
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组蛋白H2A衍生抗菌肽的重组表达及活性的研究
目的:受到抗生素类药物在食品生产过程之中大范围应用的影响,我国近期因病源细菌耐药性的提升,导致社会成员身体素质低下的消极健康现象的发生频率逐渐提升.在短时间内找到另一种高效、低廉的新型抗生素药物,就成为了相关技术研发人员的重点研究课题.本文在结合抗菌肽结构特征以及分类方式等内容的基础之上,对组蛋白H2A衍生抗菌肽的重组表达及其活性的构建,进行了深入的分析论述.
