首页 > 文献资料
-
利用流式细胞仪计数蓝氏贾第鞭毛虫和微小隐孢子虫方法的初探
目的 研究利用流式细胞仪对蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lamblia)孢囊和微小隐孢子虫(Crypto sporidium parvum)卵囊的高浓度混合样本进行计数,为“两虫”标准品制备提供技术支撑,以期能降低“两虫”检测试剂成本.方法 利用已知浓度的荧光微球对经免疫荧光染色的“两虫”混合样本进行计数,采用非参数检验中两个相关样本检验方法对流式细胞仪和荧光显微镜计数结果进行统计学分析比较.结果 流式细胞仪方法计数蓝氏贾第鞭毛虫孢囊和微小隐孢子虫卵囊的相对标准偏差(RSD)分别为14.7％和15.2％,比荧光显微镜计数结果的RSD(14.1％和15.1％)稍高.利用Wilcoxon检验得出两种方法对孢囊和卵囊的计数结果差异均无统计学意义(Z=-0.91 8,P=0.359和Z=-0.102,P=0.919).结论 利用流式细胞仪计数高浓度“两虫”混合样本的方法能达到生物学实验要求的精确度,并与荧光显微镜计数方法具有等效性,可弥补荧光显微镜无法直接计数高浓度样本的不足,并为“两虫”标准品的筛选与分装奠定基础.
关键词： 蓝氏贾第鞭毛虫 微小隐孢子虫 流式细胞仪 荧光显微镜 Wilcoxon检验 -
两种机会性寄生原虫——微小隐孢子虫和蓝氏贾第鞭毛虫基因检测方法的建立
目的 建立两种机会性寄生原虫--微小隐孢子虫和蓝氏贾第鞭毛虫(贾第虫)基因检测方法.方法 从微小隐孢子虫和蓝氏贾第鞭毛虫感染者粪便标本内分离纯化卵囊和包囊,提取基因组DNA.根据微小隐孢子虫18S rRNA基因和贾第虫磷酸丙糖异构酶(tim)基因各设计或合成两对特异性引物,采用PCR技术分别对从卵囊和包囊提取的和6种对照DNA样本(日本血吸虫、刚地弓形虫、溶组织内阿米巴、旋毛虫和阴道毛滴虫以及人体血细胞DNA等),以及此二种虫相互间的DNA样本进行检测,以确定该法的特异性和敏感性.方法 建立后,取艾滋病患者粪便标本对之进行检测.结果 从微小隐孢子虫和贾第虫的DNA样本中分别扩增出各自相应基因的500bp和683 bp长度的片段;少可检测出20pg隐孢子虫和0.4pg贾第虫DNA;几种对照DNA样本均不发生交叉反应;受检的30例艾滋病患者粪便标本中,7例显示微小隐孢子虫阳性,未检出贾第虫.结论 建立的基因检测方法,对微小隐孢子虫和贾第虫的检测具有高度的特异性和敏感性,可用于临床艾滋病合并感染的早期诊断和人群流行病学筛查.
关键词： 微小隐孢子虫 蓝氏贾第鞭毛虫 18S rRNA基因 磷酸丙糖异构酶基因 -
蓝氏贾第鞭毛虫PPDK特异性锤头状核酶-GCV重组载体的构建及鉴定
丙酮酸磷酸双激酶(Pymvate phosphate dikinase,PPDK)可能是蓝氏贾第鞭毛虫能量代谢中具有催化作用的关键酶桩一.为了进一步探讨该酶在贾第虫能量代谢中的作用,本文采用RNA draw软件分析贾第虫编码PPDK的基因序列并设计特异性反义锤头状核酶(Hammerheade ribozyme),克隆该核酶序列并与犬贾第虫病毒(GCV)连接,构建了载有特异性锤头状核酶的贾第虫病毒重组载体pGCV634/H5/2174.该载体经线性化处理后进行体外转录,转录产物以电击方式转染对数生长期的贾第虫滋养体.提取转染后24 h虫体总RNA,并以其为模板进行RT-PcR验证转染效果和对靶mRNA的切割效果.结果初步证实了该载体对虫体细胞内编码PPDK的mRNA具有切割作用.
-
实验感染C57 BL/6N小鼠粪内蓝氏贾第鞭毛虫tim基因检测
建立蓝氏贾第鞭毛虫感染动物模型,用PCR技术对感染动物粪内该虫tim基因进行检测,探讨蓝氏贾第鞭毛虫基因检测方法.用人源蓝氏贾第鞭毛虫河北株(CD)和江苏株(XZ)的包囊分别接种两组C57BL/6N小鼠,于接种后第6天、10天和14天收集粪便标本,采用酚-氯仿法提取总DNA.将提取液分别按10°、10-1、10-2和10-3稀释并纯化.根据该虫磷酸丙糖异构酶(Triose phosphate isomerase,tim)基因合成1对特异性引物,采用PCR技术分别扩增各个稀释度的样本.结果贾第虫阳性样本均被扩增出相应基因的1条683bp长的片段,纯化后的各个稀释度样本的PCR检测阳性率随稀释倍数的增加而增高.本研究结果为贾第虫感染基因检测方法的进一步研究提供了实验资料.
-
苦参对蓝氏贾第鞭毛虫作用及其机理初步研究
目的研究苦参对蓝氏贾第鞭毛虫的作用及其机理. 方法用苦参作用蓝氏贾第鞭毛虫滋养体,观察滋养体脱壁及死亡情况,并用光镜和透射电镜观察其形态和内部结构的变化. 结果在作用 6、8和24 h后,滋养体脱壁率分别为47.4%、70.9%和80.2%,死亡率为 24.5%、36.1%和54.2%;形态观察可见,苦参作用的滋养体收缩,胞质内容物减少,吸盘部分脱离胞体,有的滋养体部分胞膜内陷. 结论苦参在体外能引起滋养体脱壁、死亡,其抗虫作用是肯定的,吸盘脱离、质膜凹陷及胞质减少等,这可能是其对贾第虫作用机理所在.
-
微型核酶对贾第虫组织蛋白酶B基因体外转录体切割效果的研究
目的 检测微型核酶对篮氏贾第鞭毛虫(简称贾第虫)组织蛋白酶B基因体外转录体的切割效率. 方法 用RNA draw软件对贾第虫组织蛋白酶B基因序列二级结构进行模拟分析,并按照微型核酶设计的原则,选取合适的核酶切割位点,设计微型核酶序列,构建含贾第虫组织蛋白酶B基因短反义序列和长反义序列的两个微型核酶嵌合型犬贾第虫病毒重组质粒(CRzS和CRzL),以三磷酸甘油醛脱氢酶基因的微型核酶(GRzL)和无核酶的组织蛋白酶B基因(PCB)重组质粒作对照.将重组质粒线性化后体外转录为mRNA,然后用微型核酶体外切割组织蛋白酶B基因转录体,采用实时荧光定量PCR检测切割效率. 结果 微型核酶CRzS和CRzL对组织蛋白酶B基因转录体切割效率分别为75.42％和83.14％,微型核酶GRzL的切割效率为0.02％,无核酶PCB切割效率为23.0％. 结论 微型核酶可有效切割贾第虫组织蛋白酶B基因转录体,为开展体内抑制组织蛋白酶B基因表达试验奠定了基础.
-
蓝氏贾第鞭毛虫α-4贾第素特异性多克隆抗体的制备及免疫电镜定位研究
目的 制备针对蓝氏贾第鞭毛虫α-4贾第素的特异性抗体,免疫胶体金电镜观察该贾第素的亚细胞定位.方法 生物信息学分析并合成α-4贾第素抗原肽,与钥孔血蓝蛋白(KLH)偶联后免疫新西兰白兔,Protein A亲和层析纯化抗血清,采用α-4贾第素重组蛋白和贾第虫滋养体全虫体裂解物通过Western blot验证抗血清结合力和结合特异性,选择高特异性抗体通过免疫胶体金电镜观察α-4贾第素的亚细胞定位. 结果 筛选出3段可能的抗原肽,合成的抗原肽与KLH偶联后免疫兔得到高效价抗血清,Protein A纯化效果良好;3种纯化抗血清均能与α-4贾第素结合,其中anti-P2具有较高的抗原结合特异性.采用anti-P2进行免疫胶体金电镜,显示α-4贾第素主要定位于鞭毛,胞浆也有少量散在表达. 结论 制备的α-4贾第素多克隆抗体具有抗原结合特异性.用anti-P2进行免疫胶体金电镜,α-4贾第素主要定位于贾第虫鞭毛.
-
人源蓝氏贾第鞭毛虫表面变异抗原部分基因的克隆及序列分析
目的 获取蓝氏贾第鞭毛虫(简称贾第虫)表面变异抗原基因的部分核苷酸序列,并对其进行序列分析.方法 根据贾第虫VSP已知基因序列的特点设计引物,利用PCR技术扩增VSP基因的部分核苷酸序列,将PCR产物纯化后连接到pMD19-TSimple Vector,转化至感受态细胞JM109,扩增目的 片段.扩增的片段测序后进行生物信息学分析.结果 成功克隆了编码贾第虫VSP的一分子质量为1 486 bp的基因片段.该片段富含半胱氨酸(12.8%),且含有26个-CXXC-模体,所得序列与GenBank中Gillin(1990)公布的TSA 417基因序列同源性为99%.结论 我国人源贾第虫北京株(BEIJ 88/BTMR1/1)中表面变异抗原部分基因已测序完成.
-
型特异性基因鉴定法确定蓝氏贾第鞭毛虫C2株基因型的研究
目的 鉴定中国四川蓝氏贾第鞭毛虫(简称贾第虫)C2株的型特异性基因,为其基因分型提供依据. 方法 根据GenBank中收录的贾第虫基因序列,选取贾第虫WB株的2个型特异性基因和GS株的5个型特异性基因,设计引物,以C2株基因组DNA为模板,进行PCR反应.从中选取一个没有PCR产物的基因设计外围引物(该引物预期能扩增出此基因的侧翼序列 和其相邻基因的部分序列),再次进行PCR反应.将纯化的PCR产物克隆至pMD19 T载体并测序.型特异性基因的缺失通过对其相邻片段的扩增验证. 结果 从中国四川贾第虫C2株基因组DNA中成功扩增出贾第虫WB株的2个型特异性基因GL50803_3386和GL50803_4447,扩增片段长度分别为1 586 bp和1 080 bp,并证实其缺失1个贾第虫GS株的型特异性基因GL50581_2613. 结论 中国四川贾第虫C2侏可能属于贾第虫WB株.
-
蛇床子素体外抗犬源蓝氏贾第鞭毛虫作用研究
目的 观察蛇床子素在体外抗犬源蓝氏贾第鞭毛虫的作用效果. 方法 本研究首先分析了不同浓度蛇床子素对犬贾第虫滋养体的生长抑制作用,进而研究了在IC50浓度下蛇床子素对贾第虫虫体活力的影响. 结果 生长抑制试验显示,不同浓度的蛇床子素均对贾第虫的生长有一定的抑制作用,而且随着浓度的增高,生长抑制作用越明显,尤其是在5.0 mg/ml,培养48 h,可使犬贾第虫数量减少78.62％;运动性检测试验显示在IC50浓度下,蛇床子素对贾第虫活力具有明显的抑制作用. 结论 蛇床子素具有一定的抗贾第虫作用,这为蛇床子素在贾第虫病的防治方面的应用提供了理论基础.
-
基于TPI基因的城市污水中蓝氏贾第鞭毛虫的分子鉴定
目的 对哈尔滨市污水处理厂原水中的蓝氏贾第鞭毛虫进行分子鉴定.方法 收集哈尔滨市污水处理厂原水样,提取基因组DNA,巢式PCR扩增蓝氏贾第鞭毛虫TPI基因,通过序列分析确定蓝氏贾第鞭毛虫的集聚体类型和亚型,并进行同源性分析.结果 从哈尔滨市污水处理厂原水DNA提取物中扩增出蓝氏贾第鞭毛虫TPI基因,经分子鉴定为蓝氏贾第鞭毛虫集聚体AⅡ,其序列与文献报道人源蓝氏贾第鞭毛虫集聚体AII序列(AB516351,FJ560570,EF688021)的同源性为100％.结论 哈尔滨市污水处理厂原水中存在蓝氏贾第鞭毛虫集聚体AII,威胁当地居民健康.
-
蓝氏贾第鞭毛虫沉默信息调节因子2重组蛋白复性方法比较
目的 采用3种不同复性方法获得具有生物活性的重组蛋白蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lamblia,Gl)沉默信息调节因子2(GlSir2),并比较3种方法的复性效率,为研究其活性和生物学功能奠定基础.方法 表达并纯化GlSir2的包涵体,分别采用稀释复性、透析复性和柱上复性等3种方法对GlSir2包涵体进行复性,并通过检测复性蛋白的活性,比较3种复性方法的特点.结果 蛋白活性回收以柱上复性较高,为1 712 Flu,透析复性和稀释复性法分别为758 Flu和206 Flu.结论 3种复性方法均能获得有活性的融合蛋白GlSir2,其中以柱上复性方法处理的蛋白活性回收值高.
-
α1-Giardin的原核表达与多克隆抗体制备
目的 原核表达α1-Giardin并制备兔抗rα1-Giardin多克隆抗体. 方法 以蓝氏贾第鞭毛虫DNA为模板,PCR扩增α1-giardin编码基因片段,经双酶切后连入原核表达载体pET-4 1a(+),构建重组表达载体pET-41a(+)-α1-giardin,热激法转化大肠埃希菌E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导后收集菌体并裂解,采用SDS-PAGE检测目的蛋白的表达,采用His-tag亲和层析柱纯化融合蛋白.将α1-Giardin蛋白与等体积弗氏完全佐剂乳化后免疫新西兰白兔,隔周以同样剂量蛋白加等体积弗氏不完全佐剂加强免疫2次.末次免疫后一周颈动脉取血,制备多抗血清,采用间接ELISA法测定抗体效价. 结果 成功构建原核表达载体pET-41a(+)α1-giardin,转化大肠埃希菌后经IPTG诱导表达分子质量单位为34.8 ku的可溶性蛋白;经His-tag亲和层析柱纯化获得高纯度的重组α1-giardin蛋白,制备的免疫兔抗血清ELISA滴度为1∶51 200. 结论 成功克隆、表达并纯化了贾第虫α1-giardin蛋白,制备了高滴度的抗α1-giardin多克隆兔血清,为以α1 Giardin为抗原的疫苗研究奠定了基础.
-
青海省土族人体肠道寄生虫感染状况调查
青海省位于我国西北、青藏高原之东北部，总面积72.12万km2，总人口488.3万人(1996年)。青海是我国多民族聚居的省份，土族是其主要的少数民族之一，人口总数(18.4万人)仅次于藏族和回族，主要分布在互助、民和、大通、乐都、同仁等地。该民族具有悠久和特有的风俗习惯，以农业生产为主，种植青稞、小麦和薯类。1 调查方法 按全国人体寄生虫分布调查实施细则［1］的要求和方法进行。计数蛔虫卵，按WHO分类标准［2］划分感染强度，轻度：EPG≤5 000，中度：5 000
-
新疆喀什地区住院及门诊患者蓝氏贾第鞭毛虫感染情况分析
蓝氏贾第鞭毛虫是一种致病性肠道原虫,在我国分布广泛.新疆为游牧民族聚集区,受其生活和饮食习惯影响,人群感染率高.作者统计了1994年4月～2004年4月住院及门诊患者大便常规检查资料,蓝氏贾第鞭毛虫感染情况报告如下.
-
硝基咪唑类药物治疗贾第虫感染的效果观察
贾第虫(蓝氏贾第鞭毛虫)是人体肠道寄生虫病重要的病原之一,感染者临床表现差异很大,可从无症状直到重症慢性腹泻和小肠吸收不良.临床上可分为无症状感染、急性贾第虫病和慢性贾第虫病3型[1].目前治疗贾第虫病的药物有3类,即硝基咪唑类、盐酸咪帕林和呋喃唑酮.为观察硝基咪唑类药物治疗贾第虫病的效果,作者应用硝基咪唑的衍生物甲硝唑和替硝唑对贾第虫感染者进行了对比治疗.
-
蓝氏贾第鞭毛虫基因型及其检测方法概述
蓝氏贾第鞭毛虫致病性与其基因型密切相关.近发展的一项分子技术real-time PCR以其实时定量、灵敏度高、特异性强等优势,被广泛应用于病毒、细菌和寄生虫的临床检测.本文就蓝氏贾第鞭毛虫基因型及检测方法的研究进行了综述.
关键词： 蓝氏贾第鞭毛虫 基因型 Real-time PCR 综述 -
性传播寄生虫病的流行病学分析
性传播寄生虫病(Sexually transmitted parasitosis, STP)是指以寄生虫为病原体,可以通过性接触、类似性行为等方式传播的多种寄生虫病的总称.然而,性接触或类似性行为并非这类疾病的唯一传播途径,所以绝大多数STP既属于性传播疾病(Sexually transmitted disease, STD)范畴,又属于医学寄生虫病范畴.STP的病原体包括阴道毛滴虫、疥螨、耻阴虱、溶组织内阿米巴和蓝氏贾第鞭毛虫等.由前4种病原体引起的阴道毛滴虫病、疥疮、阴虱病和阿米巴病较多见,已被列为重点防治和监测的STD.近年来,随着艾滋病(获得性免疫缺陷综合征,AIDS)在全球的迅速蔓延,过去认为对人类危害不明显的寄生虫,如肺孢子虫、弓形虫、隐孢子虫、粪类圆线虫、等孢球虫、微孢子虫和棘阿米巴等可成为这类患者的严重并发症和死亡原因,这些机会致病寄生虫也被认为与STD密切相关,从而逐渐引起人们的重视[1,2].
-
蓝氏贾第鞭毛虫病毒研究进展
自从1972年Mattern等[1,2]首次在溶组织阿米巴的某些虫株中发现病毒样粒子后,人们相继在阴道毛滴虫[3]、蓝氏贾第鞭毛虫(简称贾第虫)[4]、艾美尔球虫[5]、巴贝斯虫[6]及利什曼原虫[7]等原虫中发现特异性双链RNA病毒,目前原虫病毒已成为寄生虫学研究的热点.蓝氏贾第虫病毒(Giardia lamblia virus,GLV)是继阴道毛滴虫病毒发现后确认的第2个原虫病毒,GLV的发现为贾第虫病的诊断与防治、原虫与病毒及宿主间相互关系的研究提供了新的方向.
-
寄生性原虫病毒研究进展
自从1972年Mattern等[1,2]首次在溶组织阿米巴的某些虫株中观察到病毒样粒子后,人们相继在阴道毛滴虫[3]、蓝氏贾第鞭毛虫[4]、艾美尔球虫[5]、巴贝斯球虫[6]及利什曼原虫[7]等寄生性原虫中发现特异性双链RNA病毒,它们有的影响虫体表型,有的影响虫体致病性,有的影响虫体生长特性.
