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蓝氏贾第鞭毛虫沉默信息调节因子2重组蛋白复性方法比较
目的 采用3种不同复性方法获得具有生物活性的重组蛋白蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lamblia,Gl)沉默信息调节因子2(GlSir2),并比较3种方法的复性效率,为研究其活性和生物学功能奠定基础.方法 表达并纯化GlSir2的包涵体,分别采用稀释复性、透析复性和柱上复性等3种方法对GlSir2包涵体进行复性,并通过检测复性蛋白的活性,比较3种复性方法的特点.结果 蛋白活性回收以柱上复性较高,为1 712 Flu,透析复性和稀释复性法分别为758 Flu和206 Flu.结论 3种复性方法均能获得有活性的融合蛋白GlSir2,其中以柱上复性方法处理的蛋白活性回收值高.
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Sirtuin家族成员及其生物学特性
组蛋白的乙酰化/去乙酰化修饰在基因表达调控中起重要作用.参与去乙酰化的酶除了经典的Ⅰ类和Ⅱ类组蛋白去乙酰化酶(HDAC)外,还有Ⅲ类HDAC,即Sir2相关酶类(Sir2-related enzymes,Sirtuin),它是一类依赖NAD的去乙酰化酶,共有7个成员(SIRT1～SIRT7).哺乳动物Sirtuin可与p53、FOXO、PGC-1α、NF-KB、Ku70等蛋白相互作用,调控细胞应激反应、代谢、衰老和凋亡等过程.本文将对Sirtuin家族成员及其生物功能作一综述.
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骨关节炎软骨组织中SIRT2表达量与炎性反应、骨质破坏的相关性研究
目的 研究骨关节炎(OA)软骨组织中沉默信息调节因子2(SIRT2)表达量与炎性反应、骨质破坏的相关性.方法 选择2015年6月-2017年6月西安市红会医院关节外科行膝关节置换术患者198例作为OA组,126例膝关节损伤患者作为对照组.收集关节软骨并测定SIRT2 mRNA表达量及蛋白阳性表达率,收集关节液并测定炎性因子、骨破坏分子的含量.结果 OA组关节软骨中SIRT2 mRNA表达量及蛋白阳性表达率均显著低于对照组(t=30.090,χ2=66.166,P=0.000,0.000);OA组关节液中Toll样受体(TLR4)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、 趋化因子12(CXCL12)、CXCL13、 蛋白酶激活受体-2(RAR-2)、 核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)、基质金属蛋白酶3(MMP-3)、I型胶原交联C末端肽(ICTP)、抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP-5b)的含量均显著高于对照组(t=25.199、25.207、24.056、16.713、32.570、19.165、32.528、28.112、25.669、27.909,P均=0.000);OA组中SIRT2蛋白阴性表达患者的关节液中TLR4、IL-1β、TNF-α、CXCL12、CXCL13、RAR-2、RANKL、MMP-3、ICTP、TRACP-5b的含量均显著高于SIRT2蛋白阳性表达患者(t=15.026、15.449、14.407、11.081、19.014、12.811、21.400、20.509、16.067、16.732,P均=0.000).结论 骨关节炎软骨组织中低表达的SIRT2能够增强炎性反应、促进骨质破坏.
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沉默信息调节因子2与基因转录调控
沉默信息调节因子2(silence information regulator 2,Sir2)家族是一类保守的去乙酰化酶蛋白家族,广泛存在于古细菌到哺乳动物的多种生物中,具有依赖NAD+的去乙酰化酶和ADP-核糖转移酶活性.Sir2在染色质沉默、基因调控、代谢调节和细胞寿命调节等众多生命活动中发挥着重要作用.它主要是通过去乙酰化酶活性以及与其他蛋白相互作用从而调节染色质结构、修饰转录相关因子,实现对基因转录的调节.本文重点对Sir2参与基因转录调控的研究进展作一综述.
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蓝氏贾第鞭毛虫沉默信息调节因子2(Sir2)基因的克隆、表达与纯化
目的 获取蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lamblia,Gl)沉默信息调节因子2(Sir2)基因序列及其重组蛋白.方法 以蓝氏贾第鞭毛虫中国C2克隆株基因组DNA为模板,PCR扩增GlSir2基因编码序列,将所得片段连接至pMD-19T质粒.转化大肠埃希菌(E.coli)JM109,挑取阳性克隆进行测序.将GlSir2基因插入原核表达载体pET28b,构建表达载体pET28b-GlSir2,转化E.coli BL21(DE3),用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达.十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析重组蛋白的表达情况.收集重组表达产物,用8 mol/L尿素溶解包涵体并收集上清,镍离子亲和层析进行纯化.将纯化产物透析复性,蛋白质印迹(Western blotting)进行免疫学鉴定.结果 获得了蓝氏贾第鞭毛虫中国C2克隆株GlSir2基因编码序列,该序列包含一个1 680 bp的开放阅读框架,可编码559个氨基酸,预测其蛋白的相对分子质量(Mr)约为 62 800.构建表达载体pET28b-GlSir2,经IPTG诱导,重组蛋白以包涵体形式表达.溶解包涵体并经纯化后的目的 蛋白纯度达80%以上,经透析复性后获得可溶蛋白.Western blotting分析显示,该重组蛋白可被His标签抗体识别.结论 克隆了蓝氏贾第鞭毛虫GlSir2基因编码序列,并获得重组表达,重组蛋白可被His标签抗体识别.
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术后认知功能障碍与沉默信息调节因子2之间的潜在关系
背景 术后认知功能障碍(postoperative cognitive dysfunction,POCD)是老年患者术后常见的并发症,其发生机制目前尚不清楚.而近年研究发现沉默信息调节因子2(the silent information regulator 2,SIRT2)在神经退行性变疾病的病理发展过程中起了重要作用. 目的 对POCD可能的机制与SIRT2之间潜在的关系进行综述. 内容 近年来大量动物实验及体外研究发现,SIRT2参与调节神经细胞炎症及凋亡反应,而这一反应也是POCD发生的主要机制. 趋势 POCD的发生机制多年来备受关注,需要进一步研究以找到其防治方法.
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二苯乙烯苷对高糖诱导系膜细胞衰老相关信号的调节作用
高糖引起的细胞衰老与氧化应激、糖基化终产物的产生增加、信号转导通路的活化密切相关~([1]).二苯乙烯苷(TSG)是何首乌中提取的一种具有明显药理活性水溶性有效成分~([2]),具有抗氧化作用、延缓衰老、改善脂质代谢等功能.
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沉默信息调节因子2在人骨关节炎软骨组织及细胞中的表达
目的 检测沉默信息调节因子2(SIRT2)在人软骨中的表达,探讨其在骨关节炎(OA)与正常软骨组织及细胞中表达的差异性.方法 选取临床20例骨关节炎关节软骨,为OA组;另取10例正常关节软骨,为对照组.免疫荧光染色法检测SIRT2在两组软骨组织的表达分布及表达情况.分离软骨细胞并进行细胞传代培养,甲苯胺蓝染色进行细胞鉴定,Western blot法检测软骨组织及细胞中SIRT2的表达情况.结果 免疫荧光染色结果显示SIRT2表达于软骨组织中,分布在细胞核与细胞质中,OA组SIRT2阳性细胞率较对照组明显降低(P<0.01);Western blot结果显示OA组软骨组织中SIRT2表达显著低于对照组(P<0.01),软骨细胞中SIRT2的表达亦显著低于对照组(P<0.01).结论 SIRT2在人类软骨组织中有表达,具体表达在细胞核与细胞质中,SIRT2表达降低可能导致骨关节炎的发生及进展.
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骨钙素对小鼠3T3?L1细胞分化的影响及与irt2/FoxO1关系的研究
目的:观察骨钙素对小鼠3T3?L1前脂肪细胞分化的影响及对Sirt2、FoxO1、GLUT4和脂联素的影响,探讨骨钙素通过Sirt2/FoxO1通路控制肥胖、改善胰岛素抵抗、遏制2型糖尿病的机制.方法:将细胞接种到培养板中,加入诱导分化剂诱导其分化.用ELISA法检测各组中Sirt2、FoxO1以筛选佳骨钙素剂量;油红O染色,观察细胞形态及脂肪含量变化,分光光度计510 nm波长处测量OD值.Real?Time PCR法检测各组中Sirt2、FoxO1、GLUT4和脂联素的表达.结果:骨钙素与Sirt2及FoxO1呈正相关(P<0.05).A组细胞中Sirt2、FoxO1、GLUT4和脂联素的mRNA表达量均较B组升高(P<0.05).C组细胞中Sirt2、FoxO1、GLUT4和脂联素的mRNA表达量较A组降低(P<0.05).B、C组OD值明显高于A组(P<0.05).结论:骨钙素可能通过Sirt2/FoxO1通路发挥作用调节脂联素及GLUT4的表达从而控制肥胖、改善胰岛素抵抗、可能有遏制2型糖尿病发生发展的作用.
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Sirtuin家族及其生物学特性
沉默蛋白(sir2-related enzymes,sirtuin)或沉默信息调节因子2(silence information negulator2,Sir2)是一类从古细菌到人类都高度保守的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide,NAD)依赖的组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase,HDAC),哺乳动物有7种sirtuin同源基因SIRT1-SIRT7,具有不同的亚细胞定位和功能.这些蛋白在细胞周期控制、维持线粒体的动态平衡、自噬和细胞生长调节等过程中发挥重要作用.笔者将对sirtuin家族的蛋白结构、酶学功能、家族成员及其生物学功能做一综述.
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沉默信息调节因子2对骨关节炎软骨组织中炎症反应、骨质破坏的影响
目的:研究沉默信息调节因子2 (SIRT2)对骨关节炎软骨组织中炎症反应、骨质破坏的影响.方法:选择因膝关节骨性关节炎在喀什地区第一人民医院接受膝关节置换术的200患者作为研究的OA组,另取同期因外伤在喀什地区第一人民医院接受膝关节置换术、半月板手术的80例患者作为对照组.术后采集关节软骨组织并测定SIRT2、骨破坏相关细胞凋亡分子的表达量以及炎症反应分子、骨破坏相关胶原代谢分子的含量.结果:OA组患者关节软骨组织中SIRT2、Bcl-2的mRNA表达量以及SOX9、Col-II的含量显著低于对照组,TNF-α、bFGF、NO、IP-10、CCL2、PAR-2、β-catenin、OPN、MMP13的含量以及Fas、GRP78、ATF6、Caspase-3的mRNA表达量均显著高于对照组;OA组患者关节软骨组织中SIRT2的mRNA表达量与Bcl-2的mRNA表达量以及SOX9、Col-II的含量呈正相关,与TNF-α、bFGF、NO、IP-10、CCL2、AR-2、β-catenin、OPN、MMP13的含量以及Fas、GRP78、ATF6、Caspase-3的mRNA表达量呈负相关.结论:骨关节炎软骨组织中低表达的SIRT2能够加剧炎症反应及骨质破坏.
