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青钱柳提取物对HepG2 2.2.15细胞HBsAg和HBeAg表达的影响
目的 研究青钱柳提取物体外抗乙肝病毒作用.方法 青钱柳用75％乙醇提取后按溶剂极性萃取,获得的三氯甲烷部位经柱层析得到Fr.2组分.体外培养HepG22.2.15细胞,MTT法检测青钱柳提取物Fr.2组分对HepG22.2.15细胞的细胞毒作用,用ELISA法检测HepG22.2.15细胞培养液中HBsAg和HBeAg的表达.结果 青钱柳提取物Fr.2组分对HepG2 2.2.15细胞无明显的细胞毒作用.与对照组比较,Fr.2组分对HBsAg和HBeAg的表达均有显著性抑制作用(P＜0.01或0.05).结论 青钱柳提取物体外具有较强的抗乙肝病毒作用.
关键词： 青钱柳 HepG2 2.2.15细胞 HBsAg HBeAg -
更昔洛韦的体外抗乙肝病毒活性
目的:评价更昔洛韦(GCV)体外抗乙肝病毒(HBV)活性.方法:应用HBVDNA转染的人肝癌细胞株(HepG22.2.15),进行GCV体外抗HBV活性的研究.结果:GCV能明显减少HepG22.2.15细胞培养上清液中HBsAg、HBVDNA的产生.Southern印迹法分析:GCV能显著抑制HBV复制中间体(包括共价闭合环状态DNA),而同时该药物对细胞形态、细胞计数及总细胞DNA无明显的影响.结论:GCV作为新的抗HBV药物,具有抑制HBV复制的活性,而细胞毒性作用不明显,值得临床上进一步推广应用.
关键词： 更昔洛韦 乙肝病毒 HepG2 2.2.15细胞 -
干扰素-α诱导HepG2 2.2.15细胞APOBEC3G的表达及其机制
目的 探讨干扰素(IFN)-α刺激HepG2 2.2.15细胞后,对载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样3G(apolipoprotein B mRNA-editing enzyme catalytic polypeptide-like 3G,APOBEC3G)表达的影响,以及初步探讨Ja-nus激酶-信号传导和转录激活子(JAK-STAT)信号通道是否参与APOBEC3G基因转录调控.方法 对HepG22.2.15细胞给予不同剂量(0、1、101、102、103、104 U/mL)IFN-α刺激8 h时,以及10U/mL IFN-α刺激2、4、6、8、10、12 h时,收集细胞或培养上清液.应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot检测HepG2 2.2.15细胞APOBEC3G、STAT-1 mRNA及蛋白的表达水平.应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清液中乙型肝炎表面抗原与e抗原(HBsAg与HBeAg)水平,应用实时荧光定量PCP及RT-PCR分别检测上清液中HBV DNA水平以及细胞中HBV mRNA水平.结果 无IFN-α(O U/mL)刺激时,HepG2 2.2.15细胞APOBEC3G表达水平很低.随着IFN-α浓度的升高,APOBEC3G mRNA及蛋白水平逐步升高,IFN-α浓度为104U/mL时,APOBEC3G表达量高,并且STAT-1分子mRNA及蛋白的表达量亦逐步升高,与APOBEC3G表达量呈现平行相关.随着IFN-α刺激时间的延长,APOBEC3G表达量明显升高,8 h时达到高,其后逐渐下降.104 U/mL-α刺激8 h时,HepG2 2.2.15细胞培养上清液中HBsAg、HBeAg、HBV DNA及细胞中HBV mR-NA水平均明显低于无IFN-α刺激的HepG2 2.2.15细胞.结论 IFN-α能诱导HepG2 2.2.15细胞表达APO-BEC3G,在一定范围内,APOBEC3G的表达与IFN-α的剂量、作用时间呈正相关;IFN-α诱导APOBEC3G的表达可能是其发挥抗病毒作用的机制之一;IFN-α是否经JAK-STAT信号通道刺激APOBEC3G的表达,二者之间的关系及其机制尚待进一步研究.
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10-23脱氧核酶抑制乙型肝炎病毒基因表达的实验研究
目的在细胞水平上探讨10-23脱氧核酶(10-23DRz)成为新型乙型肝炎基因治疗药物的可能性.方法设计合成针对乙型肝炎病毒(HBV)aywl亚型前C/C区的2031位点的10-23DRz,并对其进行硫代磷酸化修饰,同时针对该位点设计一条未硫代化修饰的10-23DRz,经脂质体转染HepG2 2.2.15细胞(简称2.2.15细胞)中观察其对HBV基因表达的抑制效应.结果修饰与未修饰的10-23DRz作用于2.2.15细胞后均可显著抑制乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和乙型肝炎e抗原(HBeAg)的表达,高抑制率分别可达93.75%和90.26%,有效抑制持续时间可达96 h,修饰后的脱氧核酶在细胞内对HBsAg和HBeAg表达的抑制作用时间长于未修饰的DRz,其抑制率的高值低于未修饰的DRz,但两者明显高于作为对照的反义脱氧寡核苷酸.对2.2.15细胞内HBV DNA复制无明显影响,未见明显的细胞毒性作用.结论经过硫代化修饰的10-23DRz和未修饰的10-23DRz在2.2.15细胞模型中能高效阻断HBV DNA的表达,是一种高度特异性的、高效的基因治疗剂.
关键词： 肝炎病毒 乙型 基因疗法 脱氧核酶 HepG2 2.2.15细胞 -
苦参碱的体外抗乙型肝炎病毒作用
目的:观察苦参碱的体外抗HBV作用,初步探讨其作用机理.方法:4×104个/mL有HBV基因组的HepG2 2.2.15细胞接种于24孔板,37℃5%C02培养24h收取上清液后,更换培养基并加入0.025-0.5mg·mL-1的苦参碱.每3 d收取上清,换原浓度药液继续培养,共9天.用酶联免疫法测定上清中HBsAg和HBeAg,酚氯仿抽提被裂解细胞中的HBV DNA,用荧光定量PCR法测定细胞内及细胞外HBV DNA的拷贝数.结果:0.025-0.5mg·mL-1的苦参碱给药9 d,对HepG2 2.2.15细胞分泌HBsAg的半数抑制浓度(IC50)为0.14mg·mL-1,选择指数(SI)为5.66;对HBeAg的IC50和SI分别为0.29mg·mL-1和2.69;对细胞内HBVDNA的IC50和SI分别为0.109mg·mL-1和7.0;对细胞外HBVDNA的IC50和SI则分别为0.120mg·mL-1和6.39.结论:体外实验表明:在0.25-0.5mg·mL-1的剂量范围内,苦参碱对2.2.15细胞中人乙型肝炎病毒的复制有不同程度的抑制作用.
关键词： 苦参碱 HBV HepG2 2.2.15细胞 HBeAg HBsAg
