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免疫组织化学图像光密度分析的标准化方法
免疫组织化学图像阳性物质着色的深浅和面积大小与绝对蛋白水平相关[1],即使阳性表达很弱的免疫组化图片,计算机图像分析也能准确地定量检测,并提供可重复的定量数据和客观的分析标准[2].但是对于阳性结果的定量分析方法和指标却没有统一的标准.因此,现介绍免疫组织化学图像光密度分析的标准化方法.
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致炎与抗炎细胞因子对小鼠肺泡巨噬细胞SR、CD14表达的影响
清道夫受体(scavenger receptor,SR)是细胞膜上的一类重要防御性受体, 在LPS 的摄取与降解过程中发挥重要作用.早期研究显示,内毒素血症时机体在高表达多种致炎与抗炎因子如TNF-α、IL-10的同时,多种组织巨噬细胞的SR表达下调.目的: 研究致炎与抗炎细胞因子对小鼠肺泡巨噬细胞(alveolar macrophage,AM)SR、CD14表达的影响.[ HTH〗方法:分离昆明种小鼠肺泡巨噬细胞,培养24 h后以不同浓度TNF-α、 IL-6、IL-10刺激不同时间(0、2、4、8、12、16、24 h),用免疫细胞化学方法及RT-PCR方法分别检测SR/ CD14蛋白及mRNA表达变化,所有实验重复3次.数据(光密度分析)采用SPSS软件进行统计分析,P<0.05代表差异显著,P<0.01代表差异非常显著.结果:①TNF-α及IL-6单独刺激 AM均能以剂量-时间依赖关系增强CD14的表达,但抑制SR的表达.刺激后2 h可检测到CD14 /SR蛋白及mRNA的表达变化(P<0.05),随刺激时间增加变化更趋明显,12 h时变化为明显,CD14表达达高峰(P<0.01),SR表达至低谷(与正常对照组相比,蛋白水平及mR NA水平均有P<0.01),TNF-α浓度在0-100 μg/L范围内及IL-6浓度在0-1 000 μg/L范围内对CD14/SR表达的影响具有剂量依赖关系,刺激剂量越大,影响越明显;②IL-10刺激AM 6 h后能增强SRmRNA的表达并部份抑制CD14mRNA表达(P<0.05),刺激16 h对SR/CD14 的影响为明显(P<0.01),免疫组化同样显示出IL-10增强SR的表达(P<0.01),但对CD 14表达没有明显影响.结论: ①致炎细胞因子TNF-α、IL-6刺激小鼠肺泡巨噬细胞能以剂量-时间依赖关系从mRNA及蛋白水平上调CD14、下调SR的表达. ②抗炎细胞因子IL-10能以时间依赖关系从mRNA及蛋白水平上调SR表达,同时能在mRNA水平下调CD14表达.