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人β2m文献资料
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含五聚结构域的重组人β2m-GFP蛋白的构建
本研究的目的是为得到表达人MHCⅠ类分子轻链蛋白β2m、β2m的C-末端与一段五聚体(penta)序列相连、且共价结合一段荧光索编码序列(GFP)的五聚重组人β2m-GFP蛋白.采用PCR扩增GFP基因及β2m基因片段,将其克隆到原核表达载体,并通过IPTG诱导目的基因在大肠杆菌中表达融合蛋白.提纯重组蛋白,并用SDS-PAGE和蛋白印迹法鉴定.结果表明,成功将GFP基因或人β2m基因片段插入含五聚结构域的PVT2载体.转化菌经诱导后,SDS-PAGE显示有新生的蛋白表达条带,分子量与预期的大小基本一致.重组蛋白用Ni-NTA柱提纯,纯化蛋白的蛋白质经SDS-PAGE分析可见单一条带.Western blot显示重组蛋白具有良好的免疫活性.因此,我们获得了含五聚结构域的人β2m-GFP在原核系统中的稳定表达,为后续深入研究含五聚结构域的重组MHCⅠ类分子的功能及应用奠定了基础.
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人β 2m基因的克隆及表达
β 2m是含有 99个氨基酸的血清蛋白，也是构成 MHC-I类分子的亚单位。初从肾脏患者的尿液中分离得到 [1]，其表达异常与多种肿瘤及肝、肾疾病有密切关系。 HLA-A2的晶体结构已证实 ,α 3和β 2m折叠起来形成 Ig样功能区 [2],并表明β 2m对维持 I类分子的天然构型的稳定性及其表达起关键作用 [3， 4]。 MHC-I类分子在免疫系统中占有极其重要的地位，目前已趋向利用基因工程技术构建 MHC-I类分子复合物以克服从体内获得的困难 [5,6]。本研究成功地构建了其轻链β 2m的融合表达载体，并在大肠杆菌中获得高效表达。
