首页 > 文献资料
-
HLA-A*0201/HPV-18E77-15五聚体的构建及其初步应用
目的 构建人乳头状瘤病毒18型(HPV-18)特异性HLA-A2肽五聚体,为HPV-18型抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的检测提供直接、有效的方法,并将其初步应用于宫颈癌患者外周血中抗原特异性CTL的检测.方法 构建含有HLA-A2-BSP和β2M基因的原核表达载体,并进行表达、复性、鉴定及纯化.再将特异性短肽与HLA-A2-BSP和β2M在体外进行耦合,该复合物经纯化浓缩后进行生物素化.生物素化的产物经纯化浓缩后形成单体,此单体再与藻红蛋白标记的链霉亲和素按一定比例耦合构建成五聚体.运用所构建的五聚体,通过流式细胞仪检测宫颈癌患者外周血中抗原特异性CTL,并与正常对照组进行比较分析.结果 所构建的pBV220-HLA-A2-BSP和pBV220-β2M原核表达载体的表达高效而且稳定,纯度达90%以上.HPV-18阳性宫颈癌患者体内抗原特异性CTL计数明显高于对照组(P＜0.05).结论 在五聚体复合物的构建中,高效、稳定的pBV220-HLA-A2-BSP和pBV220-β2M原核表达载体是构建成功的基础.所构建的MHC Ⅰ类分子五聚体和传统的四聚体相比,作为体内、外HPV-18E7抗原特异性CTL检测的有效工具,具有一定优势.
-
HBV组织相容性复合物-抗原肽五聚体在特异性细胞毒T淋巴细胞检测中的应用
组织相容性复合物(MHC)-抗原肽五聚体(Pentamer)复合物是目前检测特异性细胞毒T淋巴细胞(eytotoxicT lymphocytes,CTL)为敏感而特异的方法之一,正被广泛应用于多种病毒感染性疾病发病机制的研究以及作为临床感染转归的预测指标.但由于外周血淋巴细胞中特异性CTL的数量非常低,对于如何确定特异性CTL频数存在相当大的困难.
-
正五聚体蛋白3与动脉粥样硬化的炎症反应研究进展
以动脉粥样硬化为基础的心脑血管疾病已是当今危害人类健康的重要原因之一[1-2].当前,血管炎症被认为是动脉粥样硬化形成的关键因素[3].炎症反应中,炎性细胞在内皮细胞释放的炎性细胞因子和趋化因子的作用下,聚集在血管损伤部位,形成脂质条纹,脂质条纹中大部分细胞为巨噬细胞,巨噬细胞吞噬胆固醇后成为泡沫细胞,泡沫细胞在脂质条纹进一步形成粥样斑块中起着重要作用[ 4].正五聚体蛋白3 (pentraxin 3,PTX3)是新近发现与C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)同源的炎症因子,是急性反应蛋白之一.本文就其与动脉粥样硬化炎症反应的关系作一综述.
-
IgM的特点及应用研究进展
免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)M作为血液循环中的主要抗体之一,与IgG共同参与中和抗原和促进抗原吞噬等重要的体液免疫反应.富含IgM的免疫球蛋白制剂在临床上主要用于抗细菌感染,尤其是革兰阴性菌引起的脓毒症的预防和治疗.由于IgM较难纯化,从而限制了富含IgM的免疫球蛋白制剂在临床上的广泛应用.此文主要对IgM的特点及研究进展做一概述.
-
含五聚结构域的重组人β2m-GFP蛋白的构建
本研究的目的是为得到表达人MHCⅠ类分子轻链蛋白β2m、β2m的C-末端与一段五聚体(penta)序列相连、且共价结合一段荧光索编码序列(GFP)的五聚重组人β2m-GFP蛋白.采用PCR扩增GFP基因及β2m基因片段,将其克隆到原核表达载体,并通过IPTG诱导目的基因在大肠杆菌中表达融合蛋白.提纯重组蛋白,并用SDS-PAGE和蛋白印迹法鉴定.结果表明,成功将GFP基因或人β2m基因片段插入含五聚结构域的PVT2载体.转化菌经诱导后,SDS-PAGE显示有新生的蛋白表达条带,分子量与预期的大小基本一致.重组蛋白用Ni-NTA柱提纯,纯化蛋白的蛋白质经SDS-PAGE分析可见单一条带.Western blot显示重组蛋白具有良好的免疫活性.因此,我们获得了含五聚结构域的人β2m-GFP在原核系统中的稳定表达,为后续深入研究含五聚结构域的重组MHCⅠ类分子的功能及应用奠定了基础.
-
霍乱毒素B亚单位与胰岛素B链结构类似多肽融合蛋白的制备
为了在大肠杆菌中表达霍乱毒素B亚单位(Cholera toxin B subunit,CTB)与胰岛素B链(9-23)肽段结构类似多肽(Ins B(9-23))的融合蛋白,使用基因工程方法构建了CTB与Ins B(9-23)的融合基因CTB-Ins B-X若干,并将融合基因克隆到大肠杆菌表达载体pET28a(+)中,获得的重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3).重组菌株经乳糖诱导后,其表达产物经过12％ SDS-PAGE分析表明该菌株可以包含体形式表达融合蛋白,并制备得到纯度较高的重组蛋白.该重组蛋白的包含体经过变性、复性后,可以在体外自组装成五聚体结构.GM1 -ELISA分析结果表明,重组蛋白在体外可以与神经节苷脂GM1(monosialoganglioside)特异性结合,表明该融合蛋白保持了CTB形成五聚体的生物活性.
关键词： 霍乱毒素B亚单位 胰岛素B链(9-23)肽段 包含体 五聚体 神经节苷脂GM1 -
HPV18E77-15免疫原性的实验研究
目的 鉴定抗原肽HPV18 E77-15能否诱导HLA-A2+健康供者的外周血淋巴细胞(PBL)产生抗原肽特异性细胞毒性T细胞(CTL),判断其是否具有免疫原性.方法 通过体外细胞培养技术分为两组,实验组:负荷抗原肽为HPV18E77-15,对照组:负荷的抗原肽为HBVc17-28,采用抗原肽负荷外周血单个核细胞(PBMC)及T2 细胞作为抗原呈递细胞,重复刺激HLA-A2 阳性健康供者的外周血淋巴细胞(PBLs),1 周1次,共3次;分别在第1 轮刺激后和第3 轮刺激后,采用RPE 标记的抗原肽特异性五聚体和FITC标记的CD8+抗体通过流式细胞仪检测抗原肽所诱导产生的抗原肽特异性CTL 的频率.结果 在流式细胞仪检测中,实验组第1轮刺激后所选淋巴细胞群中CD8+五聚体+ 双阳性的抗原肽特异性CTL 为(1.87±0.01)%,第3 轮刺激后抗原肽特异性CTL 增至(15.73±2.47)%;而对照组中未检出抗原肽特异性的CTL细胞增殖.结论 抗原肽HPV18E77-15能够诱导产生抗原肽特异性CTL增殖,具有良好的免疫原性,可能成为针对HPV18感染的治疗性多肽疫苗的候选表位.
-
烟碱乙酰胆碱受体结构的研究进展
烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR)是离子通道型受体,属于Cys-loop受体的超级家族,通过配体门控离子通道介导许多生理活动,是治疗精神类疾病的重要靶点.nAChR包括肌肉型和神经型2种.nAChR是由5个亚基组成的具有中心孔道的五聚体,本文简要介绍了近年来烟碱乙酰胆碱受体结构的研究进展.
-
生殖器疱疹患者HSVⅡ抗原CD8+细胞毒性T细胞检测
目的 研究生殖器疱疹患者外周血中HSVlI抗原特异性CD8+细胞毒性T细胞(CTL)在发病中的作用.方法 采用荧光标记MHC Ⅰ类分子一多肽五聚体技术,以流式细胞仪定量检测20例生殖器疱疹患者初发和复发双份外周血中HSV Ⅱ抗原特异性CD8+细胞毒性T细胞.并进行比较分析.结果 生殖器疱疹患者初发和复发双份外周血中HSVⅡ抗原特异性CD8+细胞毒性T细胞百分数分别为0.73%±0.29%和0.35%±0.24%,正常对照组为0.31%±0.27%,初发组与复发组、正常对照两组结果相比较P＜0.001;复发组和正常对照组结果相比较P＞0.05.结论 初发生殖器疱疹患者外周血HSVⅡ抗原特异性CD8+细胞毒性T细胞活性增强,复发时惠者CIL的活性减弱.五聚体技术具有快速、敏感、高效和特异的特点.
