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Kinectin与树突状细胞TLR4-TRIF信号途径的相关性
驱动结合蛋白Kinectin是真核细胞内一种与囊泡转运相关的膜受体蛋白,为驱动蛋白(Kinesin)受体.当树突状细胞(DC)接受细菌脂多糖(LPS)的刺激后,其Toll样受体(TLR)4信号途径被活化,大量的抗原肽-MHC Ⅱ复合物被转运到细胞表面以启动免疫应答.研究表明,TLR4-TRIF信号途径对MHCⅡ从胞内转运到细胞表面至关重要.由于Kineetin定位于合成MHCⅡ的内质网且参与调节胞吐、胞质运输等过程,我们通过荧光定量PCR检测了小鼠骨髓来源DC中Kineetin的mRNA表达,以探讨其与TLR4-TRIF信号途径的关系.
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阻断病毒抗原提呈途径在免疫逃逸机制中的研究
抗原的加工和提呈在适应免疫应答过程中发挥着中枢作用,是淋巴细胞活化、增生、发挥效应的始动环节,也是启动特异性免疫的关键步骤。病毒抗原肽提呈的过程包括病毒蛋白经胞质中的蛋白酶体降解成抗原多肽,由抗原加工相关转运子( transporter associated with antigen presentation, TAP)转运至内质网( endoplasmic reticulum,ER)腔内,与糖基修饰的主要组织相容性复合体( major histocompatibility complex,MHC)分子共同组成MHC-抗原肽分子复合体,经高尔基复合体(Golgi complex,GC)提呈至细胞表面,被T细胞受体(T cell receptor,TCR)识别,激活特异性细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocytes,CTL)等一系列反应。
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T细胞交叉反应性研究进展
T淋巴细胞是免疫系统的重要成分,执行特异性细胞免疫应答,在感染、肿瘤以及自身免疫病的免疫过程中发挥着至关重要的作用. 初始T细胞通过其细胞膜表面的T细胞受体( T cell receptor, TCR)与抗原提呈细胞( antigen presen-ting cell, APC)表面的抗原肽-主要组织相容性复合体( major histocompatibility complex, MHC)复合物特异结合后,在其他辅助因素作用下,活化、增殖并分化为效应T细胞,进而完成对抗原的清除,以及对免疫应答的调节. 克隆选择学说[1]提出,每个淋巴细胞都会对某一个抗原特异,识别其他配体是不可能的. 多年来,人们广泛认同这种观点,即TCR以"一个克隆一种特异性"的形式为所有外源肽提供免疫. 然而,有些人对这种观点提出了质疑. 其中著名的就是Don Ma-son,他提出要摈弃这种观点[2]. 为何会出现这种观念的转换? 这是因为基于一个简单的算术,即有效免疫需要识别的潜在外源肽>1015. 事实上,人体只有1012个T细胞,在人初始T细胞池中,不同特异性的TCR种类<108. 因此,TCR的数量与大量潜在的外源肽-MHC复合物相比,是相形见绌的.事实上,1015个T细胞的重量超过500 kg,因此克隆选择学说提出的通过初始池中1015具有单一特异性的TCR来进行免疫覆盖的观点明显是荒谬的[2]. 一个全面的免疫系统要求每个T细胞都能识别大量的肽,因此T细胞具有广泛的交叉反应性.
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淋巴细胞膜分子CD160结构与功能的研究进展
T细胞活化需要两个信号:一是T细胞抗原受体(TCR)与抗原肽-MHC Ⅰ/Ⅱ类分子复合物相互作用的第一信号,决定了T细胞应答的特异性;二是T细胞表面辅助受体与抗原提呈细胞(APC)的共刺激分子相互作用传递的辅助或协同信号,加强或抑制了第一信号的刺激[1.2].
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CFSE标记分析小鼠胸腺及末梢T淋巴细胞的活化分裂
T细胞表面受体(TCR)识别抗原提呈细胞(APC)提呈的抗原肽-MHC分子复合物,产生第一信号,T细胞及APC表面的协同刺激分子与配体的结合产生第二信号,双信号使T细胞活化、增殖及分化,双信号的强度及信号持续时间决定细胞的活化及进行增值的程度[1].
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检测抗原特异T细胞反应技术的新进展
研究T细胞的识别、活化和频数分布是现代免疫学的重要课题,其中细胞毒性T淋巴细胞(CTL或Tc)通过识别细胞表面与MHCⅠ类分子结合的抗原肽而杀伤靶细胞,是机体抗肿瘤、抗移植物及有效控制各种感染的重要途径之一.目前缺乏精确分析CTL频数及快速分离扩增这类细胞的技术.近,发展了一些新技术用来评估T细胞的特异性,这些新方法很敏感,可以直接体外分析T细胞,而不需体外扩增,这样对体内免疫反应提供了更精确的描述.简介如下:
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中国广州人群中HBV感染与HLA-DRB1基因的相关性研究
HLA系统在机体的免疫应答和免疫调节中发挥着重要的作用,Ⅱ类抗原递呈外源性抗原肽给CD4+辅助性T细胞,其多态性影响着个体的免疫应答和抗原多肽的递呈,与自身免疫性疾病和许多感染性疾病的易感性密切相关,是研究疾病易感性中不可忽视的遗传因素。
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HBV组织相容性复合物-抗原肽五聚体在特异性细胞毒T淋巴细胞检测中的应用
组织相容性复合物(MHC)-抗原肽五聚体(Pentamer)复合物是目前检测特异性细胞毒T淋巴细胞(eytotoxicT lymphocytes,CTL)为敏感而特异的方法之一,正被广泛应用于多种病毒感染性疾病发病机制的研究以及作为临床感染转归的预测指标.但由于外周血淋巴细胞中特异性CTL的数量非常低,对于如何确定特异性CTL频数存在相当大的困难.
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负载食管癌酸洗抗原树突状细胞诱导高效特异的抗肿瘤免疫
目的:研究负载食管癌酸洗抗原树突状细胞(DC)诱导的特异性CTL对食管癌细胞的杀伤效应.方法:酸洗涤法获得T.Tn细胞膜抗原多肽,GM-CSF,IL-4和TNF-α体外诱导扩增DC并负载酸洗抗原,制备食管癌抗原特异性CTL;用CytoTox 96TM检测其对T.Tn体外杀伤效应.结果:负载食管癌抗原肽的DC诱导的特异性CTL对T.Tn的杀伤率达89.4%,显著高于LAK细胞的杀伤率43.9%(P<0.05).而对MCC803及Hep2肿瘤细胞株无显著杀伤作用(P<0.05).结论:负载食管癌抗原的DC体外可诱导出高效而特异的抗食管癌效应,提示以DC为中心的肿瘤生物治疗可望提高食管癌综合治疗水平.
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共刺激信号阻断对大鼠过敏性哮喘治疗作用的研究
在过敏性哮喘研究中发现,CD+4 T细胞参与了慢性气道炎症的启动和持续过程,成为介导嗜酸细胞性炎症、气道高反应的主要炎性细胞.CD+4 T细胞的激活需要识别信号和共刺激信号,识别信号由抗原递呈细胞(APC)递呈的特异性抗原肽与T细胞表面的抗原受体交联后提供;共刺激信号是非抗原特异性的,由APC表面分子与T细胞表面相应的受体提供.
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抗结核分枝杆菌培养滤液蛋白10的新型单克隆抗体的制备及其临床应用
目的 制备抗结核分枝杆菌培养滤液蛋白10(CFP-10)特定抗原肽的单克隆抗体,为建立结核病临床早期诊断的免疫学方法奠定物质基础.方法 设计并合成结核分枝杆菌CFP-10第53 ~ 66位氨基酸(14肽AAVVRFQEAANKQK)作为特定的抗原肽序列,经免疫BALB/C小鼠,取其脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,经酶联免疫吸附试验(ELISA)检测、多次有限稀释亚克隆建立能稳定分泌抗结核分枝杆菌特异抗原肽单克隆抗体的杂交瘤细胞系,纯化该单克隆抗体,进行免疫球蛋白亚型分析,并鉴定分析该单克隆抗体在蛋白质免疫印迹法(Western blotting)、免疫沉淀法和ELISA检测中的应用效果.共检测结核分枝杆菌培养上清样本38份,非结核分枝杆菌培养上清样本20份,结核性胸水样本32份,非结核性胸水样本24份以及健康对照血清样本20份.结果 单克隆抗体免疫球蛋白亚型分析显示该杂交瘤细胞系产生的抗体类型为IgG1和κ型.该抗结核分枝杆菌CFP-10特异性单克隆抗体可成功用于Western blotting和免疫沉淀法分析.ELISA定量检测显示,该特异性抗体检测结核分枝杆菌的敏感性为78.6% (55/70),特异性为92.2% (59/64).结论 CFP-10特定抗原肽单克隆抗体用于结核分枝杆菌检测有较高的敏感性和特异性,可用于结核病的早期诊断.
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黑色素瘤抗原基因在肝细胞癌细胞株中的表达
黑色素瘤抗原基因(MAGE)是van der Bruggen等[1]于1991年发现的重要的肿瘤相关基因,在肝癌标本中MAGE-1表达率达80%左右,应用MAGE抗原肽对手术、化疗等常规方法治疗效果差的肝细胞肝癌(HCC)进行免疫治疗有一定的应用价值和可行性[2,3].应用MAGE抗原肽对HCC进行免疫治疗的体外研究的关键是,诱导出对带有MAGE抗原的靶细胞具有特异性杀伤性能力的细胞毒淋巴细胞(CTL).本实验对8种HCC细胞株MAGE基因的表达和人类白细胞抗原一类抗原(HLAⅠ类抗原)类型进行了研究,筛选出相应的靶细胞.
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负载抗原肽的树突状细胞增强腺病毒载体介导hTRP2诱发抗小鼠黑色素瘤免疫
目的 探讨人黑色素瘤相关抗原TRP2(hTRP2)MHC Ⅰ多肽TRP2p180-188(SVYDFFVWL)修饰小鼠骨髓来源的树突状细胞(DC),增强腺病毒载体介导hTRP2(Ad hTRP2)诱发的抗小鼠黑色素瘤免疫效果.方法 Ad hTRP2免疫C57BL/6小鼠,3周后分别用Ad hTRP2或DC/SVYDFFVWL再免疫一次.用体内细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤实验和细胞内IFNγ染色(ICS)分析CTL杀伤活性和IFNγ的产生;或给免疫小鼠皮下接种B16.F10细胞,观察荷瘤小鼠的成活情况.结果 测定脾脏中6 h CTL杀伤率和产生IFNγ的CD8+T细胞比例,结果分别是:Ad hTRP2(初免)-Ad hTRP2(加强)组为68.40%±5.50%和0.67%±0.16%,DC/SVYDFFVWL(初免)-DC/SVYDFFVWL(加强)组为28.50%±6.40%和0.22%±0.07%,而Ad hTRP2(初免)-DC/SVYDFFVWL(加强)组为98.90%±0.90%和1.05%±0.21%.荷瘤实验显示,小鼠接种1×106B16.F10细胞后3个月,DC/SVYDFFVWL(初免)-DC/SVYDFFVWL(加强)组小鼠无一成活,AdhTRP2(初免)-Ad hTRP2(加强)组只有40%的小鼠存活,而Ad hTRP2(初免)-DC/SVYDFFVWL(加强)组小鼠100%存活.结论 用DC/SVYDFFVWL加强免疫能显著地增强Ad hTRP2初次免疫的效果,表明Ad hTRP2(初免)-DC/SVYDFFVWL(加强)免疫是一种克服重复应用腺病毒并不能提高抗肿瘤免疫效应的有效方式.
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合理设计基子肽的肿瘤疫苗
体内摄入人工合成的肿瘤细胞所专有的或过表达的肿瘤相关抗原(TAA)肽,就能引发肿瘤特异性免疫应答。但与病毒性抗原的肽不同,TAA肽与主要组织相容性复合体(MHC)分子的结合力一般都较弱。因此,设法通过提高MHC的结合力来上调对抗原的识别,就有可能使低亲和力的TAA肽制备成疫苗而用于肿瘤免疫治疗。本文叙述了迄今为止对TAA肽进行修饰所采取的路线和临床试验的初步结果,以及今后在这一方面探索的努力方向。
关键词: Ⅰ类主要组织相容性复合 抗原肽 肿瘤相关抗原 细胞杀伤性T细胞 肿瘤免疫治疗 -
人C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白-1高特异性抗体的制备
目的 制备人补体C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白1(hCTRP1)的特异性抗体.方法 合成了hCTRP1的C端抗原肽并免疫新西兰大白兔,利用亲合纯化色谱柱对抗体进行了纯化.结果 间接ELISA测定表明,抗血清效价达1∶64 000,Western印迹及ELISA验证表明纯化抗体具有很高的特异性.结论 人工合成的hCTRP1抗原肽免疫新西兰大白兔,制备了高效价的抗血清,并纯化制备了hCTRP1特性抗体.
关键词: 人C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白1 抗原肽 多克隆抗体 亲合纯化 -
戊型肝炎病毒(HEV)蛋白抗原肽的化学合成及在血清学诊断中的应用
目的:为诊断戊型肝炎,寻找更好的诊断试剂盒.方法:根据戊型肝炎病毒(HEV)蛋白含有2个可能的抗原表位,从戊型肝炎病毒中国株蛋白的氨基酸序列中选取S30,NS33和S42 3段抗原肽,用固相合成法进行化学合成,所得目标肽段纯化后经质谱和氨基酸组成分析确证.结果:本文试剂盒与国外品进行比较,血清分析结果表明,前者质量与日本产品相当,明显优于美国Genelabs试剂盒.结论:以这3个合成的抗原肽作为包被抗原组装的戊型肝炎病毒血清抗体的ELISA诊断试剂盒有较好的灵敏性和专一性,可用于临床检测和流行病调查.
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甲型流感病毒致病力相关因子PB1-F2研究进展
流感病毒是引起流行性感冒的病原体,不定期出现的流感大流行以及每年的季节性流感给人类社会带来严重危害.Chen等[1]在研究主要组织相容性复合物Ⅰ类分子递呈甲型流感病毒A/Puerto Rico/8/34(PR8)抗原肽时,发现了一个全新的小分子蛋白,由87个氨基酸残基组成,分子量约为10.5kDa,称之为PB1-F2.PB1-F2的起始密码子开始于PB1基因编码区的第95位核苷酸,通过核糖体扫描机制,+1位移码形成第2阅读框架.PB1-F2属于非结构蛋白,对病毒复制并非必需,其在细胞内存在时间短,半衰期仅为30min,表达起始于感染后2h,5h后表达量大.近年来,诸多研究表明PB1-F2在流感病毒的致病力方面发挥重要作用,并在一定程度上具有毒株和宿主依赖性口[2].因此,深入认识PB1-F2有助于阐明流感病毒的致病机制,对流感的预防以及新型药物研发具有重要意义.
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内质网氨肽酶与银屑病研究进展
内质网氨肽酶1(ERAP1)及其异构体内质网氨肽酶2(ERAP2)都属于锌指金属基质肽酶M1家族中的“缩宫素酶亚家族”,在人类细胞均由IFN-γ和TNF-α诱导表达[1,2].参与许多生化过程:在细胞内质网中参与内源性抗原肽的修饰及递呈,被认为是内质网中参与内源性抗原肽修饰的关键酶[3].ERAP1还参与细胞因子受体(如促进肿瘤坏死因子受体1(TNFR1),IL-6α受体和IL-1β受体胞外结构域)的脱落,使之成为可溶性受体.
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小分子干扰RNA对人类白细胞抗原DRβ1*0401基因表达的抑制作用
人类白细胞抗原(HLA)-DR分子、抗原肽及T细胞受体(TCR)三者之间的相互识别以及三分子复合物的形成是类风湿关节炎(RA)发病的始动环节[1].很多实验室通过抑制三分子复合物的形成,在RA病理过程的免疫反应上游阻碍该病的发生,从而达到RA免疫治疗的目的[2, 3].但运用的抗体及肽类等免疫治疗制剂由于半衰期较短、易被水解,需要持续给药,并且这些治疗并没有从根本上阻断三分子复合物的形成[4].
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人HL-60白血病细胞混合抗原肽诱导特异性免疫应答的研究
目的研究人HL-60白血病细胞混合抗原肽诱导特异性免疫应答的作用及其特异性.方法用细胞冻融、加热沉淀及酸处理等方法除去HL-60细胞的核酸、脂质及大部分蛋白,制备混合抗原肽;体外将抗原肽与热休克蛋白70(Hsp70)结合,以T细胞体外激活试验检测结合物对人外周血单个核细胞(PBMNC)的刺激作用,并对激活的淋巴细胞进行传代培养,观察细胞的增殖;收集传代增殖的淋巴细胞,检测其对HL-60及K562白血病细胞的杀伤功能.结果采用上述方法制备的抗原肽为混合肽,该混合肽经Hsp70提呈后,体外能激活PBMNC,并使激活的细胞增殖,增殖的淋巴细胞可特异性地杀伤HL-60细胞,但对K562细胞无杀伤作用.结论白血病细胞内含有可用生化方法制备的特异性抗原肽;利用Hsp70提呈此抗原肽可激活细胞毒性T淋巴细胞增殖,对白血病细胞产生特异性的杀伤作用,对于化疗后防止白血病复发将具有十分重要的意义.