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腺病毒介导CTLA4Ig基因在骨髓基质细胞中的表达
成熟T细胞在移植物抗宿主病(GVHD)的发生、发展中起着核心作用,而T细胞活化必须同时存在MHC/抗原肽-TCR和共刺激信号,缺少或阻断T细胞的共刺激信号将导致T细胞的无反应、细胞凋亡或克隆丢失,从而诱导免疫耐受.在众多的共刺激信号途径中,作用明显,肯定的是B7/CD28途径[1].
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肝癌热休克蛋白-抗原肽复合物的构建及诱导CTL反应的初步研究
目的:研究体外构建热休克蛋白-抗原肽复合物的方法,观察其在体外的抗肿瘤作用.方法:用经43℃热处理1小时的人肝细胞悬液,经过裂解液裂解,60%~80%饱和硫酸铵沉淀,用SephadexG-100柱制备,取分子量为70KD组份,Western blot进行性质鉴定.应用多肽解离液处理该组份,SephadexG-25柱过滤获得未结合多肽的蛋白分子,使其在体外与肝癌抗原肽SLIVHLNEV结合,构建成热休克蛋白-抗原肽复合物.应用此复合物刺激树突状细胞,激活同源外周血T淋巴细胞产生肿瘤特异性杀伤T淋巴细胞(CTL),应用MTT法检测其对T2细胞及肿瘤细胞的杀伤活性.结果:所得蛋白经电泳及Western blot进行蛋白分子量及性质鉴定为热休克蛋白70.SephadexG-25柱双分离法证实应用上述方法成功构建了肝癌热休克蛋白70-抗原肽复合物,用该复合物负荷树突状细胞在体外可以诱导出较强的肝癌抗原肽特异性CTL,可以杀伤负荷有该肽的T2细胞及递呈该肽的肿瘤细胞系.结论:体外构建的热休克蛋白-抗原肽复合物可以增强抗原肽诱导CTL反应能力,热休克蛋白是良好的T细胞免疫佐剂,有可能在肿瘤疫苗治疗中发挥重要作用.
关键词: 热休克蛋白 肝癌 抗原肽 特异性杀伤性T淋巴细胞 树突状细胞 -
树突状细胞在系统性红斑狼疮免疫发病中的作用
系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)是一种以机体内广泛的免疫异常和多器官功能损伤为特征的自身免疫性疾病,其临床表现多种多样,病情往往呈缓解和恶化交替进行.自身抗体形成和免疫复合物沉积所致的组织损伤是该病的特点之一.其中,大多数的自身抗体是针对DNA和核小体的,这是SLE的一大免疫学特征,由此提出一种假说:抗原递呈细胞(APC)对凋亡细胞不恰当的处理导致了SLE的发生[1].而树突状细胞(dendritic cell,DC)是一类有效的APC,无论在体内外它都可以激活未致敏T淋巴细胞.更重要的是,DC能高效地摄取、处理内源性和外源性抗原肽,并递呈给T淋巴细胞,因此DC可能在SLE发病中有重要的作用.本文就近几年来的研究进展作一综述.
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MICA基因多态性及其与免疫性疾病相关性的研究进展
人类主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)基因分为三类,MHCⅠ类,Ⅱ类,Ⅲ类。 MHC I类(HLA-A,B,C)和MHCⅡ类(HLA-DR,DP,DQ)基因编码人类白细胞抗原(human leukocyte antigen ,HLA)分子,通过识别和递呈抗原肽,分别激活CD4+T细胞或CD8+T细胞,从而达到免疫监视及免疫激活的目的。然而1994年Bahram等学者[1]发现一组新的与MHC I类基因相关的位点基因,其后命名为MIC基因(MHC class I chain-related genes)。MIC家族包含7个基因(MICA~MICG),但其中只有MICA、MICB参与编码转录表达, MICC,MICD,MICE,MICF,MICG是伪基因[2]。MICA 是 MIC 家族中具有高度多态性的基因(IMGT/HLA database;http://www.ebi.ac.uk/imgt/hla/align.html)。其多态性目前尚未完全清楚,本文将对MICA的结构、表达产物及其作用,以及对MICA与风湿免疫疾病相关研究进展做一综述,以冀有助于进一步了解MICA基因多态性及其与风湿免疫疾病的关系。
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抗原肽处理相关运载体及其等位基因与类风湿关节炎相关性研究进展
抗原肽处理相关运载体(transporter associated with antigen processing,TAP)基因位于HLA-Ⅱ区,TAP蛋白参与内源性抗原的加工呈递;并与MHC-Ⅰ类分子表达水平有关.TAP参与CTL (细胞毒性T淋巴细胞)的抗原识别并激活CTL细胞的免疫反应过程,从而参与免疫应答.其在异常免疫应答导致的自身免疫性疾病过程中可能发挥重要作用.本文就近年来有关TAP及其等位基因与类风湿关节炎(RA)两者相关性的研究进展作一综述.
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程序性死亡受体1阻断抗体pembrolizumab孤儿药的研究进展
在控制肿瘤细胞的生长、扩散和复发过程中,T细胞介导的免疫应答有着重要的作用。T细胞的活化需要双信号作用,第一信号来自抗原肽-主要组织相容性复合体(major histo-compatibility complex,MHC)复合物与T细胞表面受体(TRC)结合。第二信号来自抗原呈递细胞(APC)上协同刺激分子与T细胞表面上相应受体的结合[1]。协同刺激分子影响T细胞发育、活化、增殖、起效、凋亡的各个阶段。缺少协同刺激分子提供的第二信号,会导致T细胞不能充分活化,使效应T细胞被诱导呈无能状态或凋亡,进而使得肿瘤逃脱机体的免疫监控。
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B7:CD28/CTLA-4在子痫前期T细胞免疫中的新进展
T细胞活化的双信号模式认为,T细胞活化不仅需要抗原特异性T细胞受体(TCR)与抗原递呈细胞(APC)上的抗原肽一主要组织相容性(抗原)复合物(MHC)相互作用,同时还需要协同刺激信号.
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B细胞免疫突触在抗原捕获、加工和递呈过程中的作用
B细胞具有捕获外部抗原的能力,B细胞将其捕获的外部抗原在抗原加工区室中降解成肽段,然后抗原肽与进入区室的MHCⅡ类分子结合,表达于B细胞表面并提呈给CD4+T细胞,这是适应性免疫反应过程的一个关键性步骤。 B细胞与T细胞之间的这种联系被称为T、B细胞的合作[1],这个过程B细胞形成生发中心,并且分化为能够产生亲和力更高的的浆细胞,同时发展成为记忆性B 细胞亚群。B细胞通过MHCⅡ类分子对抗原进行递呈的过程是十分复杂的,主要涉及以下几个阶段:第一,B细胞可通过B细胞抗原受体( BCR)识别并捕获外部抗原;第二,捕获后的抗原在B细胞的抗原加工室中被降解为肽段,然后被降解的肽段与MHCⅡ类分子结合;第三, MHCⅡ类分子与肽段的复合物将表达于B细胞表面并提呈给CD4+T细胞,见图1。
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癌-睾丸抗原NY-ESO-1的表位鉴定及其抗原肽疫苗研究
癌-睾丸抗原(Cancer-testis antigen,CTA)是一类在多种肿瘤组织中表达,而在睾丸以外的其它正常组织中几乎不表达的抗原.由于它们独特的表达特性,CTA成为肿瘤免疫治疗的理想抗原.目前,一些CTA疫苗已试用于临床治疗并收到了较好的效果,显示出良好的开发前景.
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癌-睾丸抗原SSX-2抗原肽的鉴定及功能分析
SSX基因又称滑膜肉瘤X断裂点基因(Synovial Sarcoma X breakpoint,SSX),是个多成员的基因家族,其中一些成员编码的产物被认为是癌-睾丸抗原(Cancer-Testis Antigen,CTA).CTA是一类可在多种肿瘤组织中表达,而在睾丸以外的其它正常组织中几乎不表达的抗原.因此,CTA非常适用于肿瘤免疫治疗.目前对SSX基因家族中的SSX-2抗原的研究显示,SSX-2抗原分子作为肿瘤免疫治疗的靶物质有着潜在的应用前景.现将其研究进展综述如下.
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PD-L1/PD-1通路与肿瘤免疫治疗
在控制肿瘤细胞的生长、扩散和复发过程中,T细胞介导的免疫应答有着重要的作用.T细胞的活化需要双信号作用,第一信号来自抗原肽-MHC复合物与T细胞表面受体(TCR)结合.第二信号来自抗原呈递细胞(APC)上协同刺激分子与T细胞表面上相应受体的结合[1].协同刺激分子影响T细胞发育、活化、增殖、起效、凋亡的各个阶段[2].缺少协同刺激分子提供的第二信号,会导致T细胞不能充分活化,使效应T细胞被诱导呈无能状态或凋亡,进而使得肿瘤逃脱机体的免疫监控.
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TCRαβ分子识别抗原肽-MHC复合物的争议问题探讨
T细胞抗原受体(TCR)是T细胞表面的特征性标志分子,其与CD3分子组成的TCR-CD3复合体,是进行抗原识别,发挥细胞免疫重要功能的基础.一般认为,TCR必须识别抗原肽-MHC分子复合物才能活化T细胞,其中CD4+T细胞识别MHCⅡ类抗原,CD8+T细胞识别MHC Ⅰ类抗原.TCR分子是由两条不同肽链构成的跨膜蛋白,肽链的种类有α、β、γ、δ四种,根据组合的差异,可分为TCRαβ+T细胞和TCRγδ+T细胞,其中TCRαβ+T细胞在发挥特异性细胞免疫过程中发挥重要作用.有关TCRαβ分子识别抗原肽-MHC分子复合物的基本分子机制已形成了经典的免疫学理论,但其中有关MHC分子限制性、CD4及CD8分子的辅助性以及TCR分子α链与β链在识别过程中的地位及作用等问题还存在不少存有争议的地方,本文将介绍相关领域的研究进展,并结合自己的综合分析,对TCRαβ分子识别抗原肽-MHC复合物过程中的一些争议问题进行探讨.
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不同免疫途径对抗原肽修饰DC疫苗免疫效应的影响
目的:探讨不同的免疫途径对抗原肽修饰树突状细胞(DC)疫苗免疫效果的影响.方法:用鸡卵清蛋白(OVA)MHC Ⅰ限制性多肽SIINFEKL(OVAp257-264)包被小鼠骨髓来源的DC,通过皮下、腹腔、静脉或肌肉注射免疫小鼠,7天后行体内细胞毒性T淋巴细胞杀伤实验(In vivo CTL)分析CTL杀伤活性和细胞内IFN-γ染色(ICS)分析免疫小鼠脾脏CD8+细胞产生IFN-γ的情况.结果:免疫7天后,In vivo CTL结果显示SIINFEKL修饰的DC皮下、腹腔、静脉或肌肉注射免疫小鼠其特异性CTL杀伤效应分别是37.3%±7.3%、61.0%±4.2%、56.9%±3.6%和10.8%±2.3%;ICS结果示四组小鼠产生IFN-γ的CD8+细胞占总CD8+细胞的比例分别是0.31%±0.07%、0.85%±0.12%、0.76%±0.14%和0.15%±0.04%.结论:不同免疫途径可明显影响抗原肽修饰DC疫苗的免疫效应,其中腹腔注射诱发的抗原特异性CTL反应强,静脉注射者次之,而皮下注射特别是肌肉注射较弱,提示通过腹腔注射DC疫苗可能是安全、高效的免疫途径.
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体外构建的HSP70-肝癌抗原肽诱导抗原肽特异性免疫反应1
目的:研究体外构建的HSP70-肝癌抗原肽复合物诱导针对肝癌的特异性免疫反应能力,为该复合物的临床应用奠定基础.方法:在体外构建HSP70-肝癌抗原肽复合物,联合应用粒/巨细胞集落刺激因子(GM-CSF)及白介素-4(IL-4)直接从志愿者外周血中培养出DC;以HSP70、HSP70 -肝癌抗原肽、抗原肽分别刺激DC,DC激活同源的T淋巴细胞产生细胞毒性T淋巴细胞(CTL) ,检测其杀伤T2细胞和肝癌细胞系的能力.结果:HSP70-抗原肽、抗原肽均可诱导CD8+的抗原肽特异性CTL,而前者的诱导效果更强.结论:体外构建的HSP70-抗原肽复合物具有免疫原性,HSP70可以增强抗原肽诱导特异性免疫反应的能力,HSP70-抗原肽复合物有可能作为肽疫苗用于临床肿瘤免疫治疗.
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MAGE-1、-2、-3基因在消化道肿瘤中的表达
MAGEs(melanoma antigen genes)家族位于X染色体上,由17个基因成员组成的基因家族。 除了睾丸和胎盘外,它们在正常组织中均不表达。但在黑色素瘤、肺癌、乳腺癌、大肠癌等 恶性肿瘤中表达。它们编码的抗原肽可与人类白细胞抗原HLA(Human leukecyte Antigen )分子结合,形成抗原复合物, 与CTL受体结合, 被特异性CTLs(cytolytic T lymphocytes )细胞所识别,激活特异性CTL的杀伤活力。因此MAGEs基因编码蛋白成为肿瘤免疫治疗的靶 抗原。本文采用RT-PCR检测MAGE-1、2、3在消化道肿瘤患者的分布,以分析其在消化道肿 瘤中免 疫治疗的应用价值。
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rhHSP70-HER2/neu抗原肽对小鼠乳腺癌的治疗作用研究
目的:使用在毕赤酵母中重组表达的rhHSP70与合成的HER2/neu抗原肽在特定条件下形成复合物,探讨其用于肿瘤生物治疗的可行性.方法:在ADP存在的条件下,将rhHSP70与合成的HER2/neu抗原肽体外非共价结合形成复合物,并分次免疫BALB/c小鼠,检测该复合物诱导特异性CTL的能力和对小鼠乳腺癌的治疗作用.结果:rhHSP70-HER2/neu抗原肽复合物免疫小鼠后,可以诱导出肿瘤特异性CTL,并对小鼠的乳腺癌有明显的治疗作用.结论:在毕赤酵母中重组表达的rhHSP70可以在体外与一定的抗原肽非共价结合形成复合物,该复合物具有较强的诱导特异性CTL的能力.
关键词: 重组人热休克蛋白70 抗原肽 乳腺癌 免疫治疗 -
HIV自然感染与疫苗诱导产生抗体鉴别肽的原核表达及纯化
目的 原核表达并纯化HIV自然感染与疫苗诱导产生抗体鉴别肽skl、sk2、sk3及3条肽段串联序列.方法 用普通PCR及重叠延伸PCR法从HIV-1 B亚型质粒扩增得到sk1、sk2、sk3基因序列及3条肽段基因片段的6种连接序列,并分别克隆人原核表达载体pET-32a(+)及pGEX4T-2中,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经Ni-NAT或谷胱甘肽-Sepharose-4B层析柱亲和层析纯化.SDS-PAGE分析融合肽的表达,Western blot分析融合肽的抗原性.结果 分别以pET-32a(+)和pGEX4T-2为载体,共构建了18个重组表达质粒;his-sk1、his-sk123、his-sk213、his-sk231及GST-sk3、GST-sk123、GST-sk213分别在pET-32a(+)及pGEX4T-2表达载体中以可溶形式表达,且均能与HIV-1阳性血清反应,而不能与HIV DNA-天坛疫苗免疫血清反应;经大量诱导表达纯化后,GST-sk3表达量高,可达40 mg/L,纯度超过90%.结论 已成功表达并纯化了具有生物学活性的HIV自然感染与疫苗诱导产生抗体鉴别肽,为研制HIV自然感染与疫苗诱导产生抗体鉴别诊断试剂盒奠定了基础.
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多价EZH2肿瘤相关抗原肽的制备及其抗原性
目的 人工设计制备多价EZH2肿瘤相关抗原肽,并鉴定其抗原特性.方法 设计合成编码多价EZH2肿瘤相关抗原肽的DNA序列,克隆入原核表达载体pET-30a(+)中,构建含4个EZH2肿瘤相关抗原肽段(Aa120-128、Aa165-174、Aa291-299、Aa735-742)的重组多价抗原肽原核表达质粒pET-30a(+)-EZH2-antigen,转化E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达后,用Ni-NTA树脂在变性条件下对重组多肽进行亲和层析纯化,Western blot分析重组多价EZH2肿瘤相关抗原肽的抗原特性.用重组多价EZH2肿瘤相关抗原肽免疫大耳白兔,制备多克隆抗体,间接ELISA法检测血清中抗体效价,Western bolt分析多抗的特异性.结果 重组原核表达质粒pET-30a(+)-EZH2-antigen经酶切及测序证实构建正确;表达的重组多价EZH2肿瘤相关抗原肽表观相对分子质量约4 300,主要以包涵体形式存在;纯化的多肽纯度不低于90%,浓度为0.5 mg/ml,且能被兔抗EZH2多抗和兔抗His标签多抗有效识别和结合;纯化的多价EZH2肿瘤相关抗原肽能在动物体内高效诱导抗体生成,抗血清效价为1:64× 104,且能特异性识别和结合PC3人前列腺癌细胞中表达的EZH2蛋白.结论 成功制备了一种多价EZH2肿瘤相关抗原肽,该多价抗原肽相对分子质量虽小,但抗原肽密度高,可能具有更强的肿瘤相关抗原的活性,具有重要的应用前景.
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CD11b+单核细胞在EAM中的作用
实验性自身免疫性心肌病(experimental autoimmune myo-carditis,EAM)作为一种感染后心肌炎模型为研究人类病毒性心肌炎提供了很好的研究模型.其可以通过给BALB/c鼠主动免疫肌球蛋白α重链抗原肽的方法而建立.
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天花粉蛋白免疫抑制作用的功能性肽段筛选及其作用机制
在人工合成天花粉蛋白(Tk)多个重叠肽段的基础上,采用前期工作中筛选出的天花粉蛋白高敏感(C57BL/6)和低敏感(C3H/He)小鼠近交系,建立OVA特异的体外二次应答增殖系统,检测各肽段抑制能力,并通过细胞剔除及过继试验确认发挥作用的细胞,采用ELISA方法检测细胞因子分泌格局的改变.结果筛选到5条具有明显免疫抑制功能的Tk衍生肽,其中PE和PS对两个品系皆显示抑制活性,而PQ、PB及PJ仅在C57BL/6小鼠中诱导抑制.Tk衍生肽段改变了OVA特异性增殖系统中细胞因子分泌的格局,使得以Th1/Tc1型细胞因子为主状态向Th2/Tc2偏移,表现为IL-4和IL-10分泌增加,而IFN-γ分泌减少.剔除CD8+ T细胞明显解除Tk及其肽段的抑制作用.表明Tk的某些肽段与全蛋白一样具有免疫抑制功能,其机制可能与诱导T细胞向CD8+Tc2方向偏移有关.