首页 > 文献资料
-
MAGE-A家族与NY-ESO-1在乳腺癌中的表达及免疫治疗前景
以肿瘤特异性抗原为基础的肿瘤免疫治疗已经成为乳腺癌的新的治疗模式,癌睾丸抗原(CTA)是肿瘤免疫治疗研究的热点.MAGE-A家族与NY-ESO-1作为癌睾丸抗原家族的重要成员,在乳腺癌的诊断、治疗、预后等各个方面发挥重要作用.MAGE-A家族不同成员在乳腺癌组织中有不同程度的阳性表达,其表达机制可能和DNA甲基化和组蛋白去乙酰化相关.目前MAGE-A的肿瘤疫苗研究尚处于起步阶段,而且其应用也有一定的局限性.有人认为通过去甲基化药物激活MAGE-A表达,可以增加MAGE-A的免疫原性,增强免疫治疗疗效.NY-ESO-1在不同类型肿瘤组织中均有阳性表达,它也是判断肿瘤预后的重要指标.基因甲基化可能是调控NY-ESO-1在肿瘤中表达的机制.以NY-ESO-1为基础的多种疫苗已相继进入临床研究阶段.综上,MAGE-A和NY-ESO-1可成为现在以及将来免疫治疗的理想靶标.
-
转染NY-ESO-1特异性TCR增强人PBMC对NY-ESO-1阳性肿瘤细胞的特异性细胞毒性
目的 探讨体外转导NY-ESO-1特异性T细胞受体至人外周血淋巴细胞中,是否可增强转导后细胞体外特异性识别并杀伤肿瘤细胞的能力.方法 将NY-ESO-1特异性TCR质粒(pCDNA3.1-ESO-TCR)体外电转入新分离的正常人PBMC中,RT-PCR法鉴定转导是否成功；采用流式细胞仪分析转导后PBMC表型；用特异性NY-ESO-1b抗原肽(p157-165)刺激转导PBMC后,用ELISPOT法检测PBMC分泌IFN-γ的能力,用实时无标记动态细胞分析仪检测PBMC特异性细胞毒性作用.结果 电转后PBMC能够扩增出特异性TCR片段；电转pCDNA3.1-ESO-TCR质粒的PBMC细胞表面特异性TCR表达率高于电转空载体的PBMC的表达率(P＜0.05)；经多肽刺激后,电转目的质粒的PBMC分泌IFN-γ的斑点数明显多于电转空载体的PBMC(P ＜0.05)；转导后PBMC特异性细胞毒性作用明显强于电转空载体的PBMC.结论 经NY-ESO-1特异性TCR基因修饰的PBMC对NY-ESO-1阳性HepG2细胞的体外特异性杀伤作用有明显提高,为进行下一步肝癌过继性免疫研究提供了基础资料.
-
肿瘤-睾丸抗原SSX、NY-ESO-1、MAGE-A1在胰腺癌中的表达及其生物学意义
目的 检测肿瘤-睾丸抗原(CTA)SSX、NY-ESO-1、MAGE-A1在正常胰腺组织、慢性胰腺炎以及胰腺癌中的表达情况,寻找胰腺肿瘤中高表达的CTA.方法 应用免疫组织化学SP法检测8例正常胰腺组织、15例慢性胰腺炎组织、52例胰腺癌组织中SSX、NY-ESO-1、MAGE-A1的表达.Western blotting检测52例胰腺癌组织中SSX、NY-ESO-1、MAGE-A1的表达.结果 正常胰腺组织、慢性胰腺炎中SSX、MAGE-A1和NY-ESO-1均不表达,SSX、NY-ESO-1、MAGE-A1在52例胰腺癌的阳性表达率分别为48.08%(25/52)、7.69%(4/52)、5.77%(3/52);经相关分析,SSX、NY-ESO-1和MAGE-1的阳性表达与患者的年龄、性别、病变部位、分化程度均未见明显相关关系(P＞0.05); SSX的表达与肿瘤的浸润转移呈负相关(r=-0.306,P=0.028); 52例胰腺癌病例中55.77%(29/52)有1种以上的CTA表达.结论 不同种类的CTA在胰腺癌中的表达存在显著差异,SSX的阳性表达率高;胰腺癌中SSX的高表达与肿瘤的转移呈明显的负相关关系;CTA在胰腺癌中的表达呈现簇生现象.
-
NY-ESO-1和LAGE-1癌症-睾丸抗原在肝细胞癌的表达
目的检测NY-ESO-1和LAGE-1癌症-睾丸抗原在肝细胞癌中的表达,探讨其作为肝细胞癌免疫治疗靶标的可行性及其与肝癌生物学行为的关系.方法逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学EnVision二步法检测30例肝细胞癌新鲜标本NY-ESO-1和LAGE-1的表达;另将191例肝癌石蜡组织制成芯片观察NY-ESO-1蛋白在肝癌中的分布和表达.结果NY-ESO-1和LAGE-1基因mRNA在肝癌中的阳性表达率分别是33.3%(10/30)和16.7%(5/30),至少表达1种基因mRNA者为36.7%(11/30);NY-ESO-1蛋白主要分布在肝癌细胞胞质,有效标本中NY-ESO-1表达13.8%(24/174),小肝癌、中晚期肝癌、发生转移肝癌中的阳性表达率逐渐升高,分别为6.8%(3/44)、16.2%(21/130)、23.1%(12/52),不发生转移的肝癌仅为9.8%(12/122),其中转移组与无转移组之间比较差异有统计学意义(P<0.05),全部病例癌组织与癌旁组织比较差异有统计学意义(P<0.01).NY-ESO-1蛋白的阳性表达与肿瘤大小无关,所有癌旁肝组织均未见NY-ESO-1和LAGE-1的mRNA和蛋白的表达.结论 NY-ESO-1/LAGE-1在肝细胞癌组织中的特异性表达提示其可作为肝细胞癌特异性免疫治疗潜在的靶标;NY-ESO-1在肝癌早期出现,随病情进展表达率逐步增高,转移患者高,提示NY-ESO-1肽疫苗可能作为晚期肝癌患者治疗手段之一.
-
肿瘤-睾丸抗原MAGE-1和NY-ESO-1 mRNA在胃肠间质瘤中的表达
目的:探讨肿瘤-睾丸抗原(CTA)MAGE-1和NY-ESO-1作为胃肠间质瘤(GISTs)免疫治疗特异性靶点及MAGE-1和NY-ESO-1 mRNA作为辅助GISTs危险度分级指标的可能性.及其与GISTs生物学行为的关系.方法:采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术,检测30例GISTs中MAGE-1和NY-ESO-1mRNA的表达,并取正常胃肠道组织作为阴性对照组,同时分析MAGE-1和NY-ESO-1mRNA表达与病理特征的关系.结果:正常对照组中无阳性表达,30例GISTs中,18例至少表达一种CTA,MAGE-1和NY-ESO-1 mRNA在GISTs中的表达率分别为30%和47%.MAGE-1和NY-ESO-1 mRNA表达与患者年龄、性别和病理类型无关,而与肿瘤生长部位、肿瘤大小及危险度分级有关(P<0.05).MAGE-1和NY-ESO-1 mRNA在低危、中危、高危三个组中表达量随着危险度分级的升高而增高,三组间差异有统计学意义(P<0.05).MAGE-1和NY-ESO-1 mRNA在GISTs中的表达不存在相关性(r=0.018,P>0.05).结论:MAGE-1和NY-ESO-1 mRNA在GISTs中的高特异性表达,其抗原有望成为GISTs免疫治疗特异性的靶点:MAGE-1和NY-ESO-1 mRNA表达与GISTs危险度分级有关,MAGE-1和NY-ESO-1 mRNA有望成为辅助GISTs危险度分级的诊断指标.
-
肝细胞肝癌患者肿瘤/睾丸抗原SSX-1及NY-ESO-1mRNA的表达意义
目的:检测SSX-1及NY-ESO-1mRNA在肝细胞性肝癌(HCC)患者的外周血及肝癌组织中的表达情况及其临床意义.方法:用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法对26例HCC患者的外周血、癌组织、相应的癌旁组织及20例对照研究标本进行SSX-1和NY-ESO-1mRNA检测.为验证结果的可靠性,对SSX-1和NY-ESO-1的RT-PCR产物进行了DNA测序.结果:SSX-1及NY-ESO-1 mRNA在26例HCC组织中的表达率分别为61.5%和11.5%,在相应的外周血中的表达率分别为46.2%和3.8%.外周血中表达SSX-1或NY-ESO-1 mRNA的HCC患者,其组织标本中也表达上述基因.所有的癌旁组织,作为对照的肝硬化和正常肝组织以及非肿瘤患者的外周血中均未发现这两种基因的表达.测序结果表明所得到的cDNA确为要扩增的目的基因.SSX-1和NY-ESO-1基因的表达与患者的年龄、性别、肿瘤大小、分化程度、血清AFP水平、肝炎病毒感染等临床指标无显著相关性(P>0.05).37.5%的AFP正常(<20 ng/L)的HCC患者外周血中有SSX-1基因表达.外周血中表达SSX-1mRNA的患者的短期(6 mo)复发率为50%(4/8),不表达者的复发率为25%(3/12).结论在HCC患者及癌组织中SSX-1和NY-ESO-1基因高特异性表达,在检查AFP的同时检测外周血SSX-1mRNA的表达,有助于提高HCC的检出率.表达SSX-1mRNA的HCC患者的短期复发率明显增高,可作为监测HCC复发、转移和预后的指标.
-
NY-ESO-1基因在膀胱癌中的表达及临床意义的研究
目的 探讨NY-ESO-1的表达与膀胱癌分期分级的关系以及临床意义.方法 回顾性研究2001～2002年膀胱癌组织32例,其中男性24例,女性8例.正常膀胱粘膜对照取自耻骨上经膀胱前列腺切除术的良性前列腺增生的患者.阳性对照为正常睾丸组织.常规行RT-PCR方法检测膀胱癌组织及对照组等NY-ESO-1基因的表达,分析其表达与膀胱癌分期分级的关系以及临床意义.结果 NY-ESO-1 mRNA在32例膀胱癌组织中12例表达(37.5%),在正常膀胱粘膜上没有表达.肿瘤组织中PCR反应的产物与正常睾丸的表达产物一致.NY-ESO-1 mRNA的表达和膀胱癌的病理分级相关,有统计学差异(P＜0.05).NY-ESO-1 mRNA的表达率随着肿瘤病理分级的增高而升高:G1期是0/3(0%);G2期是4/16(25%);G3期是8/13(61.54%).浸润性膀胱癌中NY-ESO-1 mRNA的表达与表浅性肿瘤的表达无显著性差异.结论 NY-ESO-1 mRNA在正常膀胱组织上没有表达,仅在正常睾丸组织和病理膀胱癌组织上有表达.NY-ESO-1 mRNA的表达率随着膀胱癌病理分级的增高而升高.
-
NY-ESO-1蛋白在喉鳞状细胞癌中表达的意义
目的 检测NY-ESO-1蛋白在喉鳞癌中的表达情况,探讨其作为喉癌免疫治疗靶标的实验依据及其与喉癌生物学行为的关系.方法 免疫组织化学PV-9000两步法检测69例喉鳞癌患者原发灶及其常规病理报告为阳性的121个颈淋巴结中NY-ESO-1的表达,同时采用Western blotting方法检测其在喉鳞癌标本的癌中心区、癌周0.5、1.0 cm及9例全喉切除术患者的喉正常黏膜组织(对照)中的表达.结果 69例喉鳞癌组织中,NY-ESO-1蛋白表达阳性率为43.48%(30/69),在癌中心区、癌周0.5、1.0cm中的表达逐渐下降(P＜0.05),NY-ESO-1在对照组喉正常黏膜组织中无表达.NY-ESO-1蛋白在不同T分级、病理分级和不同颈淋巴结转移喉癌中的表达率差异无统计学意义(P＞0.05),颈转移淋巴结中NY-ESO-1的表达下调.结论 NY-ESO-1在喉鳞癌患者中特异性高表达,可能以某种方式参与了喉癌的发生、发展,是否能将其作为喉癌免疫治疗靶标有待深入研究.
-
CT抗原NY-ESO-1基因克隆、表达及纯化
目的:利用大肠杆菌表达人CT抗原NY-ESO-1,对表达产物进行Western印迹鉴定和纯化,为今后利用其进行肿瘤疫苗的研究奠定基础.方法:通过全基因拼接获得NY-ESO-1基因,构建重组表达载体NY-ESO-1-pET28a(+),在大肠杆菌BL21(DE3)中利用IPTG诱导获得表达,利用单克隆抗体进行Western印迹鉴定,通过Ni柱亲和纯化获得纯化蛋白.结果与结论:拼接的NY-ESO-1全基因经测序证明与GenBank中人的NY-ESO-l全基因完全相符;构建的原核表达载体NY-ESO-1-pET28a(+)可稳定地可溶性表达NY-ESO-1蛋白;经Ni柱亲和纯化获得较好的纯化结果;利用鼠抗人单克隆抗体对表达的蛋白进行验证,结果显示阳性.本研究成功利用原核表达系统实现了对CT抗原NY-ESO-1的可溶性表达.
-
癌-睾丸抗原NY-ESO-1研究进展
近年来,肿瘤的发病率和病死率呈明显上升趋势,严重威胁着人类健康.传统的化疗、放疗和手术方法仍存在着各种问题,因此迫切要求寻找新的治疗手段,肿瘤免疫治疗亦是这些新的治疗手段之一.
-
NY-ESO-1抗原与肿瘤免疫治疗进展
NY-ESO-1抗原是肿瘤-睾丸抗原家族中的重要成员,在多种类型的肿瘤中广泛表达,并且是迄今发现的具免疫原性的肿瘤抗原,可以在NY-ESO-1表达阳性的肿瘤患者体内引起自发性体液免疫反应和特异性T细胞免疫反应.因此,NY-ESO-1被认为是好的肿瘤候选疫苗,在肿瘤免疫治疗中具发展潜力.本文主要介绍了近年来有关NY-ESO-1抗原以及相关疫苗的研究进展.
-
癌-睾丸抗原NY-ESO-1的表位鉴定及其抗原肽疫苗研究
癌-睾丸抗原(Cancer-testis antigen,CTA)是一类在多种肿瘤组织中表达,而在睾丸以外的其它正常组织中几乎不表达的抗原.由于它们独特的表达特性,CTA成为肿瘤免疫治疗的理想抗原.目前,一些CTA疫苗已试用于临床治疗并收到了较好的效果,显示出良好的开发前景.
-
肝癌患者外周血中针对NY-ESO-1/LAGE-1 表位的自发性CTL的定量检测
目的 检测原发性肝细胞癌(HCC)患者外周血中针对HLA-A2限制性NY-ESO-1b表位的特异性细胞毒性T细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)的水平,评价该表位多肽诱导HCC患者自发性细胞免疫应答的能力.方法 采用流式细胞技术分析HCC患者的HLA表型,并通过RT-PCR技术检测其癌组织中NY-ESO-1/LAGE-1基因的表达情况;采用HLA-A2/多肽五聚体复合物即pentramer对HCC患者外周血中NY-ESO-1b表位特异性CTL进行标记并用流式细胞仪进行定量检测.结果 在HLA-A2阳性、且其癌组织中NY-ESO-1/LAGE-1 mRNA为阳性29例HCC患者中,13例(41.4%)患者外周血中可检测到针对HLA-A2限制性NY-ESO-1b表位(p157-165,SLLMWITQC)的特异性CTL应答,而在19例HLA-A2阳性的健康志愿者和12例HLA-A2阳性的肝炎后肝硬化患者外周血中均未检测到相应的自发性CTL应答(P值分别为0.004和0.023).结论 NY-ESO-1b表位多肽可诱发HCC患者体内产生较高频率的自发性CTL应答,提示该多肽可作为备选疫苗用于HCC的主动免疫治疗.
-
重组耻垢分枝杆菌NY-ESO-1疫苗的制备及其免疫原性分析
目的 制备重组耻垢分枝杆菌(recombinant Mycobacterium smegmatis,rM.smegmatis)NY-ESO-1疫苗,并分析其在小鼠体内的免疫原性.方法 从人睾丸mRNA中扩增NY-ESO-1基因,克隆至携带β半乳糖苷酶信号肽的表达载体,转化M.smegmatis,构建rM.smegmatis.以rM.smegmatis经腹腔免疫小鼠,200μl/只,于第12周用NY-ESO-1加强免疫1次,第3、6、9、12、13周经尾静脉采血1次,分离血清,并于第13周取小鼠脾脏,制备脾淋巴细胞,检测小鼠血清中NY-ESO-1抗体及其亚型、CD4+、CD8+T细胞比例、脾细胞增殖能力、IFNγ及IL-2的分泌水平及体外CTL杀伤能力.结果 加强免疫后,与NY-ESO-1组比较,rM.smegmatis-pLA71NY组小鼠血清抗体水平差异无统计学意义(P＞0.05),CD4+及CD8+T细胞比例、IFNγ及IL-2的分泌水平及体外CTL杀伤能力均显著升高(P＜0.05),脾细胞的增殖能力显著下降(P＜0.05).结论 rM.smegmatis NY-ESO-1疫苗在小鼠体内具有良好的免疫原性,为该疫苗用于肿瘤的免疫治疗奠定了基础.
-
癌-睾丸抗原NY-ESO-1在食管鳞状细胞癌中的表达及其意义
目的 检测NY-ESO-1蛋白在食管鳞癌中的表达,分析其与肿瘤临床病理参数的关系以及NY-ESO-1蛋白在晚期食管鳞癌免疫治疗中的意义.方法 选取113例中晚期食管鳞癌标本构建组织芯片,应用免疫组化EnVision二步法,检测NY-ESO-1蛋白的表达,SPSS统计软件分析所得数据.结果 109例有效标本中,有32例NY-ESO-1阳性(29.4%),阳性部位在细胞浆,10例正常食管黏膜中无-例表达NY-ESO-1蛋白.NY-ESO-1蛋白的表达主要集中在肿瘤细胞分化较好的Ⅰ级和Ⅱ级食管鳞癌,阳性率有显著性差异(P＜0.01),与肿瘤的大小,浸润深度及有无淋巴结转移无关(P＞0.05).结论 NY-ESO-1是目前已知的免疫原性强肿瘤抗原,可诱导自发的体液免疫和细胞免疫反应,其在晚期食管鳞癌中的表达提示NY-ESO-1可作为食管癌的免疫治疗的靶点.
-
肿瘤抗原NY-ESO-1研究进展
NY-ESO-1是肿瘤-睾丸(cancer-testis,CT)抗原家族成员之一,在许多不同类型的人类肿瘤中都有表达,是迄今发现的具免疫原性的肿瘤抗原之一.NY-ESO-1可以在阳性表达肿瘤患者体内诱导自发性体液和T细胞免疫应答,因此在肿瘤疫苗研制中具有非常广泛的前景.
-
NY-ESO-1在原发性肝癌免疫治疗中的研究进展
NY-ESO-1抗原是CT抗原家族中的重要成员,在原发性肝癌组织中广泛表达,是迄今发现的具免疫原性的肿瘤抗原,能在NY-ESO-1表达阳性的肝癌患者体内诱导自发性体液免疫反应和特异性T细胞免疫反应.因此,NY-ESO-1被认为是较好的肿瘤候选疫苗,在原发性肝癌免疫治疗中较具发展潜力.
-
NY-ESO-1致敏树突状细胞诱导的CTL对肝癌细胞株的特异性杀伤作用
目的:探讨肿瘤睾丸抗原NY-ESO-1(New York-esophageal-1)致敏树突状细胞体外诱导特异性CTL对肝癌细胞株的杀伤作用.方法:重组质粒pGEX-ESO1经原核诱导表达并纯化GST-ESO1融合蛋白肽.重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)和白细胞介素4(rhIL-4)诱导培养人外周血来源的树突状细胞(dendritic cells, DCs),经GST-ESO1融合蛋白肽致敏后诱导特异性CTL增殖.以此CTL为效应细胞,分别以NY-ESO-1阳性表达的肝癌细胞株HepG2和不表达NY-ESO-1的肝癌细胞株H2P为靶细胞,MTT法检测CTL对肝癌细胞株的杀伤作用.结果:重组质粒pGEX-ESO1经IPTG诱导,在大肠杆菌中表达相对分子质量约36 000的GST-ESO1融合蛋白肽,纯化后的质量浓度为50 μg/ml;经rhGM-CSF和rhIL-4联合诱导成功培养人外周血DCs,其表型分子HLA-DR为91.4%、CD86为70.5%、CD83为71.2%、CD80为55.3%.NY-ESO-1致敏的DCs能明显诱导CTL增殖,此CTL对肝癌细胞株HepG2的杀伤率显著高于GST刺激组、未致敏DC组和无DC刺激组(均P<0.05),效靶比为50 ∶1时杀伤效应达到高峰[(53.23±3.78)%,P<0.01];相同条件下CTL对H2P细胞无特异性杀伤作用.结论: NY-ESO-1抗原致敏的DCs在体外可诱导同种CTL产生和增殖,后者对NY-ESO-1阳性肝癌细胞株具有特异性杀伤效应,该方法为肝癌免疫治疗提供了一条新思路.
-
NY-ESO-1抗原的基础与临床研究进展
NY-ESO-1是癌-睾丸抗原家族中的重要一员,在多种肿瘤组织中广泛表达,但在正常组织中几乎不表达.目前已经发现了20多个抗原表位,并在多种肿瘤患者体内检测到自发性免疫反应,包括体液和细胞免疫反应,NY-ESO-1的表达及体内自发性免疫应答被证实与肿瘤的诊断和预后有重要关联.NY-ESO-1被认为是肿瘤免疫治疗的理想靶抗原,以NY-ESO-1抗原为靶点的肿瘤治疗性疫苗、TCR基因修饰的T细胞、CAR修饰的T细胞等临床研究相继开展,展示了良好的前景.
-
MHC四聚体技术的应用研究进展
通过描述免疫应答和免疫反应特征来定义抗原特异性T淋巴细胞反应类型的方法具有繁杂、准确性差等缺点.为精确辨别T淋巴细胞反应类型,发展了可直接对抗原特异性T淋巴细胞进行标记的MHC四聚体(tetramer)技术.利用T细胞受体(TCR)与MHC分子识别结合机制在T细胞表面结合肽-主要组织相容性复合物(peptide major histocompatibility complex,pMHC)配基,T细胞聚合形成可溶性肽-MHC四聚体,增加特异性T细胞检测的灵敏度,该技术即四聚体技术.该文主要论述MHC四聚体技术的原理和临床应用.
