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淋巴管内皮特异性透明质酸受体文献资料
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人LYVE-1的基因克隆及其在毕赤甲醇酵母细胞中的表达鉴定
目的 获得可溶、稳定、与人淋巴管内皮特异性透明质酸受体(LYVE-1)具备相同抗原性的重组人LYVE-1,为进一步研究LYVE-1在淋巴管形成中的作用及临床肿瘤免疫学诊断打下基础、提供材料.方法 采用逆转录-酶链聚合反应(RT-PCR)自人淋巴结获得LYVE-1全长cDNA,将其克隆入真核表达载体pPICZα,构建含人LYVE-1的重组质粒(pPICZα-LYVE-1);经全自动序列分析仪测序确证后,将此重组质粒转化入毕赤甲醇酵母细胞(GS115)中进行诱导表达,表达产物经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析及免疫印迹试验(Western blot)鉴定.结果 经甲醇诱导的含pPICZα-LYVE-1的酵母细胞表达出重组人LYVE-1的融合蛋白,此蛋白在凝胶上表现为一约70 000的区带,在Western blot实验中可被LYVE-1的特异多克隆抗体识别.结论 人LYVE-1融合蛋白在酵母表达系统中高水平表达,并具有与人体天然蛋白相同的抗原活性.
关键词： 淋巴管内皮特异性透明质酸受体 毕赤甲醇酵母 基因表达 鉴定
