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散发性乳腺癌中BRCAl基因甲基化状况及其与蛋白表达的关系
目的 探讨散发性乳腺癌中BRCAl基因异常甲基化状况及其与蛋白表达的关系,进而研究散发性乳腺癌中BRCAl基因异常的表遗传学作用.方法 用甲基特异性聚合酶链反应(PCR)和免疫组织化学(SP)法研究乳腺癌组织、癌旁正常组织中BRCAl基因启动子甲基化状况及蛋白表达情况.结果 在52例散发性乳腺癌中,BRCAl甲基化率为29%,BRCAl蛋白表达下降率为33%;15例BRCAl发生甲基化的癌组织标本中BRCAl的表达下降率为87%,而37例BRCAl未发生甲基化的癌组织中BRCAl蛋白表达下降率11%.在肿瘤分级中,T3分级患者的肿瘤组织中BRCAl甲基化率(45%)及表达下降率(60%)均分别高于T1+T2分级患者肿瘤组织的BRCAl甲基化率(19%)和表达下降率(16%);有淋巴结转移患者的肿瘤组织中BRCAl甲基化率(46%)及蛋白表达下降率(50%)均分别高于无淋巴结转移的甲基化率(14%)和表达下降率(18%).结论 BRCAl基因表遗传学改变是其蛋白表达下降乃至失活的重要原因,并且与散发性乳腺癌的恶性进程和淋巴结转移密切相关.
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改变退火温度对甲基特异性PCR检验指标有效性的影响
目的 探讨改变退火温度对甲基特异性聚合酶链反应PCR检验指标有效性的影响.方法 将经测序证实的RASSF1A甲基化标本分别作为完全甲基化(100%M)和完全未甲基化的标本(0%M),按1∶3体积比例混合,作梯度PCR扩增,摸索适当的退火温度.选取单一电泳条带的温度为优化的退火温度,并以这些温度检测70例标本[35对,以同一患者的肿瘤组织(K)、癌旁组织(N)为1对],比较其在各温度情况时的扩增效果.结果 以上指标依年龄(70岁以上/70岁以下)不同出现不同的变化趋热;似然比分析数值均介于0.1～10之间;70岁以下组阳性预测值大多＞70岁以上组;若定义64℃以上温度为高温段,63.3℃以下温度为低温段,则低温段70岁以下组阴性预测值＞70岁以上组,高温段70岁以上组＞70岁以下组.结论 与普通PCR类似,甲基特异性PCR可以通过调整退火温度来改变其检测效能,但温度变化间隔好不要＜1℃;应用甲基特异性PCR检测RASSF1A甲基化可以作为膀胱肿瘤早期诊断的辅助方法,在较低年龄组的应用价值高于高年龄组,尤其是在排除肿瘤方面.
