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可视化微孔板芯片检测结核分枝杆菌利福平及异烟肼耐药性研究
目的 构建基于可视化微孔板芯片技术的结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药性检测方法.方法 将针对结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药性相关基因设计的探针按预设模式固定于芯片表面构建基因芯片,并用其检测结核分枝杆菌的基因突变以判断其耐药性,阳性结果在芯片表面形成裸眼可见的色点.结果 可视化微孔板芯片展示了稳定的试验结果,在50株异烟肼耐药株中检出40株(80%),主要为katG基因315位突变;在20株利福平耐药株中检出15株(75%),主要为rpoB基因531及526位突变.芯片鉴定阳性样本经聚合酶链反应(PCR)测序比对,其结果与芯片结果完全相符.结论 可视化微孔板芯片用于检测结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药性具有较高的特异性和敏感性,该方法可以快速、准确、方便地应用于结核分枝杆菌耐药性的检测.
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4种腹泻病病原菌的可视化微孔板芯片检测方法
目的 构建一种针对4种常见腹泻病病原菌(霍乱弧菌、痢疾杆菌、出血性大肠杆菌O157、空肠弯曲菌)的可视化微孔板芯片检测方法.方法 针对4种常见的腹泻病病原菌,设计特异性的PCR引物(5’端生物素标记)和检测探针.利用探针制备仪将探针按5×5点阵模式点置于N3微孔板芯片内,经紫外交联固定制成基因检测芯片.通过建立多重PCR扩增体系实现多重靶标的同时扩增,扩增形成的生物素化PCR产物与制备的微孔板芯片杂交,并进一步应用链霉亲和素-碱性磷酸酶和显色底物NBT/BCIP的显色反应来检测特异性的PCR杂交产物,检测结果阳性的样品同时以传统微生物分离鉴定方法鉴定.结果 制备的基因检测芯片对标准菌株的测定展示了良好的特异性和稳定的实验结果.在对6份样本的测定中,检出痢疾杆菌感染1例,出血性大肠杆菌O157感染1例,空肠弯曲菌感染1例,检测结果与传统的微生物分离鉴定结果一致.结论 本研究建立的可视化微孔板芯片检测技术可同时检测4种腹泻病病原菌,具有快速、准确及简便易行的特点,适用于临床的快速诊断及通关口岸的快速筛查.
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深低温保存单采血小板凋亡相关miRNA的差异表达
目的 了解单采血小板在深低温保存过程中凋亡相关micmRNA (miRNA)的表达改变.方法 应用miRNA微孔板芯片技术分析-80℃保存不同时间单采血小板凋亡相关miRNA表达谱的差异,同时利用qRT-PCR技术验证该结果的准确性;采用生物信息学软件预测差异表达miRNA可能的靶基因.结果 与新鲜单采血小板相比,凋亡相关miRNA表达谱在血小板-80℃保存5d时无明显变化、保存7d时仅有2种明显上调变化的miRNA:miR-216和miR-296.选择表达谱中miR-216 miR-296 miR-7和miR-16共4种miRNA做qRT-PCR验证:以新鲜血小板表达水平为基准值1,-80℃保存5、7d后miR-216的相对表达量分别为1.81±0.21和2.88±0.23,miR-296的相对表达量分别为2.27±0.20和3.85±0.17,miR-7的相对表达量分别为0.89±0.06和0.76±0.03,miR-16的相对表达量分别为1.12±0.35和1.40±0.32,miR-216和miR-296在＜7 d保存过程中表达上调(P＜0.05),miR-7和miR-16的表达未发生明显变化(P＞0.05).结论 短期(＜7 d)深低温保存单采血小板凋亡相关miRNA的表达谱接近新鲜单采血小板.
