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平滑肌肌动蛋白α基因R258C突变转基因小鼠模型的建立
目的：建立携带突变位点R258C的平滑肌肌动蛋白α（ACTA2）基因的转基因小鼠模型。方法：利用基因重组技术，将人工合成的小鼠ACTA2基因第七外显子258位精氨酸（R）突变为半胱氨酸（C），再克隆到质粒pBluescript KS的多克隆位点，通过显微注射法，把线性化、纯化后含有鼠ACTA2启动子/外显子1/内含子1/外显子2～9（含R258C）/3′端非翻译区的质粒注射入C57BL/6J小鼠受精卵中，将存活的胚胎移植入同期发情的假孕受体母鼠内，获得子代小鼠。用聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）和Southern印迹杂交方法检测子代鼠尾DNA，鉴定基因型。结果：移植注射胚胎后得到32只新生仔鼠，经PCR和Southern印迹杂交检测得到3只阳性小鼠。结论：携带突变位点R258C的ACTA2基因的转基因鼠模型构建成功，为进一步探索ACTA2基因突变在胸主动脉瘤发病中的作用和机制提供了重要的前期工作基础。
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利格列汀对体外高糖诱导后人肾小管上皮细胞E-cadherin、α-SMA表达的影响及机制
目的：探讨利格列汀对体外高糖诱导后人肾小管上皮细胞钙黏附蛋白E（E-cadherin）、肌动蛋白α（α-SMA）表达的影响及机制。方法将体外培养的人肾小管上皮细胞（HK-2细胞）随机分为正常对照组、高糖组、高糖＋Wnt4 siRNA组、高糖＋β-catenin siRNA组、高糖＋利格列汀组，高糖＋Wnt4 siRNA组、高糖＋β-catenin siRNA组分别转染siRNA沉默Wnt4、β-catenin，12 h后与高糖组、高糖＋利格列汀组同时加入D-葡萄糖（葡萄糖终浓度为30 mmol／L），高糖＋利格列汀组同时加入利格列汀（终浓度10μmol／L），继续培养48 h。采用Western blotting法检测各组E-cadherin、α-SMA、Wnt4、β-catenin蛋白表达，倒置显微镜观察细胞形态学改变，测定细胞长与宽比值。结果与正常对照组比较，高糖组E-cadherin表达下调、α-SMA、Wnt4、β-catenin表达上调（P均＜0．05）；与高糖组比较，高糖＋Wnt4 siRNA组、高糖＋β-catenin siRNA组、高糖＋利格列汀组E-cadherin表达上调、α-SMA表达下调（P均＜0．05）。高糖组细胞由卵圆形伸长呈梭形，高糖＋利格列汀组细胞由卵圆形向梭形改变程度减轻。高糖组细胞长／宽较正常对照组、高糖＋利格列汀组升高（P均＜0．05）。结论利格列汀可部分抑制体外高糖诱导的人肾小管上皮细胞E-cadherin表达下调、α-SMA表达上调，其机制可能与Wnt4／β-catenin通路有关。
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肾动脉内膜射频消融术对小型猪肾动脉内膜的影响
目的 探讨心脏导管肾动脉射频消融术(renal denervation,RDN)在小型猪肾动脉内膜损伤中的作用.方法 健康广西巴马小型猪6只,随机分为假手术组和RDN组各3只.2组均在全身麻醉下行双侧肾动脉造影,RDN组在肾动脉造影术后应用常规心脏消融导管随机对一侧肾动脉行RDN术,假手术组仅将消融导管送入肾动脉.2组术后即刻、术后5min再次行肾动脉造影,观察肾动脉充盈情况.术后30min处死动物,取双侧肾动脉行 HE及TUNEL染色,荧光定量PCR法检测肾动脉内皮平滑肌细胞肌动蛋白α(smooth muscleα-actin,SMα-actin)mRNA表达.结果 假手术组术前、术后即刻及术后5min肾动脉造影显示肾动脉主干及分支显影良好,未见狭窄、动脉粥样硬化斑块,HE染色结果提示无肾动脉内膜损伤;RDN组术前肾动脉造影结果同假手术组,术后即刻可见消融部位肾动脉发生严重狭窄,术后5min可见狭窄有所减轻,HE染色可见平滑肌细胞坏死,结合TUNEL染色结果提示肾动脉损伤;2组肾动脉内膜平滑肌细胞免疫组织化学染色SM α-actin阳性表达率均为100％;假手术组和 RDN组术前SM α-actin mRNA表达量(1.36±0.02、1.16±0.11)比较差异无统计学意义(P＞0.05),RDN组术后30 min SM α-actin mRNA表达量(0.44± 0.12)低于假手术组(1.57±0.23)(P＜0.05).结论 RDN术可损伤肾动脉内膜平滑肌细胞,导致肾动脉粥样硬化.
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生、熟地黄缓解肾间质纤维化的作用及其机制研究
目的:探讨生地黄和熟地黄对单侧输尿管梗阻模型(UUO)大鼠肾间质纤维化的作用及其机制.方法:雄性SD大鼠随机分为生地黄水煎液组、熟地黄水煎液组、模型对照组、假手术组,每组5只.生地黄水煎液组、熟地黄水煎液组分别按生地黄、熟地黄剂量1.6 g/(kg·d)灌胃给药14 d,测定血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN).HE染色、Masson染色观察肾脏组织病理学变化,免疫印迹检测TGF-、α-SMA和Collagen-Ⅰ的表达.结果:与模型组比较,各给药组大鼠Scr、BUN值显著降低(P＜0.05);肾小球玻璃样病变减轻,肾小管囊性扩张和空泡变性程度缓解,胶原沉积减少,肾间质纤维化程度明显改善;TGF-、α-SMA和Collagen-Ⅰ表达显著降低(P＜0.05).与熟地黄水煎液组比较,生地黄水煎液组的Scr、BUN值较低,胶原沉积较少,肾间质纤维化改善较明显,α-SMA表达显著减少(P＜0.05).结论:生地黄和熟地黄均能缓解肾间质纤维化,以生地黄作用较强,其作用机制可能与下调TGF-β1、α-SMA和Collagen-Ⅰ的表达有关.
