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超速玻璃化法冻存小鼠肝细胞球形聚集体的初步研究
现有的肝细胞冻存法是将分散的肝细胞用于冻存.从肝组织消化分离的肝细胞,其细胞完整性和功能都会受影响.有报道用肝细胞球形聚集体培养,效果优于用分散肝细胞培养[1].玻璃化法冻存细胞组织,由于不形成冰晶,对细胞损伤较小,已成功用于冻存胚胎、卵巢、胎肝组织和脑细胞[2-5].本研究将小鼠肝细胞预培养成球形聚集肝细胞,用改进的超速玻璃化法冻存,解冻后与含胶原培养液混合、培养,通过检测培养上清液中ALT、AST、乳酸脱氢酶(LDH)浓度判断肝细胞受损漏出情况,检测白蛋白( Alb)浓度判断肝细胞合成功能.对照组用单层贴壁培养分散肝细胞做同样冻存和检测.
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神经干细胞的单层培养及分化过程中HES1和MASH1的表达变化
[目的]建立神经干细胞(NSC)体外培养方案,使NSC的体外可以得到增殖和分化,并检测NSC分化过程中HES1和MASH1的表达变化.[方法]无菌条件下取SD大鼠胚胎端脑,无血清悬浮培养,形成P2代神经球后,将神经球消化成单细胞,分为神经球悬浮培养和单层贴壁培养,并对两种不同培养方式下的NSC进行干性鉴定和分化能力鉴定.用不同浓度(20、40、80 μg/L)的脑源性神经生长因子(BDNF)诱导NSC分化,选出合适的浓度.用BDNF佳诱导浓度诱导NSC分化,Q-PCR检测分化过程中HES1和MASH1的表达变化.[结果]神经球悬浮培养和单层贴壁培养均可得到的NSC;分化3d后,在不加入任何诱导因素的情况下,单层贴壁培养的NSC能更高比例[(19.55±1.09)％]地分化为β-tubulinⅢ阳性细胞；BDNF 40 μg/L能诱导出更多的β-tubulinⅢ阳性细胞[(34.17±0.60)％]；在分化1、3和7d时,Q-OCR结果表明MASH1在BDNF诱导下组较NSC和对照组表达水平明显上升.[结论]单层贴壁培养的神经干细胞更利于分化为神经元,BDNF为40μg/L时能诱导出更高比例的神经元,BDNF可以诱导MASH1在NSC分化过程中表达明显上升.
