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血清预培养促进神经干细胞的增殖
目的介绍一种时间短、花费少的神经干细胞培养方法.方法先用含10%胎牛血清的DMEM培养液预培养神经干细胞48h,换含表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、B27的DMEM/F12培养液继续培养干细胞球.血清诱导分化后行nestin免疫荧光染色.结果血清预培养48h后即可见神经干细胞聚球,nestin免疫荧光染色为阳性.结论血清预培养可使神经干细胞聚球速度加快,促进神经干细胞增殖.
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新鲜分离的与预培养的成年肝细胞对胆红素代谢和细胞活性的差异比较
目的 探讨新鲜分离的成年动物肝细胞(adult animal hepatocytes,AAH)与预培养24h的AAH对人体胆红素代谢活性的差异,为体外生物人工肝支持系统(extracorporeal bioartificial liver support system,EBLSS)寻求佳的肝细胞材料应用方案.方法 福建省龙岩市第二医院采用机械分离法获得3个月龄的雄性小白鼠肝细胞,设新鲜分离组与预培养组,两组培养液均用含20%胎牛血清、5胰岛素/ml的高糖型DMEM培养基.新鲜分离组在获取肝细胞后即加入胆红素血清作共培养3h后离心取上清液送检,预培养组对肝细胞作预培养24h再加入胆红素血清继续共培养3h后离心取上清液送检;设不含肝细胞的胆红素血清作对照;用贝克曼全自动生化分析仪检测两组总胆红素、直接胆红素、间接胆红素的变化;以相同的方法作3次重复实验后分析评估.结果 新鲜分离肝细胞组使总胆红素、间接胆红素分别下降33.91%、39.29%,而直接胆红素变化不大;预培养组使总胆红素、间接胆红素分别下降8.00%、5.40%.两组总胆红素变化的比较P＜0.01(t=3.707),间接胆红素变化的比较P＜0.01(t=4.734).以上实验在完全相同的条件下重复3次,实验结果均显示新鲜分离的AAH对胆红素的代谢活性优于预培养的AAH.结论 新鲜分离的AAH对胆红素的代谢活性优于预培养的AAH,在EBLSS使用时以新鲜分离的AAH为佳.
关键词： 体外生物人工肝支持系统 成年肝细胞 新鲜分离 预培养 胆红素 -
理化因子影响EL-4细胞增殖反应的剂量效应关系
近年来环境理化因子对人体和哺乳动物的作用愈来愈受到人们的重视。有关低剂量化学因子诱导兴奋效应的研究已有系统资料［1］，但对化学因子增强免疫的报道尚少。本文作者选择有机物(丝裂霉素C)和无机物(氯化镉)两种化学因子与电离辐射进行比较，用3H-TdR掺入法，观察3种因子对EL-4细胞增殖反应的影响，以揭示低剂量理化因子的免疫增强效应机理。 一、材料和方法 1.细胞培养：EL-4细胞由日本引进。取处于指数生长期的细胞，用RPMI-1640培养液(含10% FCS)调浓度为5×105个*ml-1，取180 μl加至96孔培养板中，4复孔，在37℃及体积分数为5%的CO2条件下预培养3 h。 2.照射条件：用国产X.S.S.250(FZ)型固定式X射线深部治疗机，电压200 kV，电流100 mA，滤板0.5 mm Cu,1.0 mm Al，靶细胞距分别为56 cm，247.3 cm，吸收剂量为50、75、100、200 mGy及0.5、1、2、4、6 Gy，吸收剂量率相应为12.5 mGy*min-1及0.287 Gy*min-1。
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预培养时间对结核分支杆菌噬菌体试验结果的影响
目的:探讨研究预培养环节对分支杆菌噬菌体生物扩增法试验结果的影响. 方法:对166例临床诊断为肺结核患者的标本,经液化处理后均进行过夜组(预培养24h)及不过夜组(室温放置6h后)分支杆菌噬菌体生物扩增试验,试验方法按结核分支杆菌噬菌体裂解试剂盒(FAST Plaque TBTM )操作手册操作,对照分析二者的阳性率和污染率.结果:166例肺结核患者标本,过夜组分支杆菌噬菌体试验结果阳性率为59.0%;非过夜组分支杆菌噬菌体试验结果阳性率为57.8%,二者的阳性率接近,差异无统计学意义(x2=0.496,P＞0.05),过夜组污染率为13.9%,明显高于未过夜组的7.2%, 二者的差异有统计学意义(x2=3.86,P＜0.05).结论:分支杆菌噬菌体生物扩增法试验标本处理后室温放置6h比预培养1d效果好,可以提前一天报告结果,建议临床推广应用.
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体外受精卵子体外培养时间相关问题
近年来,体外受精(IVF)技术在促排卵、受精和胚胎培养等方面取得了很大进展,临床妊娠率也得到了提高,但每个移植周期的妊娠率仍不理想,其影响因素值得进一步研究.卵母细胞的质量是影响成功率的重要因素之一.它受体内激素水平的精密调节,采集到的卵子是否成熟,直接影响到胚胎质量.目前,常规IVF一般是在取卵后4～6h进行.但近年来有学者认为卵子体外培养2～3 h受精[1],甚或培养12h受精对实验室指标与临床结局都无影响[2],可见对于IVF卵子到底培养多长时间受精佳尚需进一步研究.下面就相关问题做一综述.
关键词： 体外受精 卵母细胞 预培养 卵胞浆内单精子显微注射 控制性卵巢刺激 -
超速玻璃化法冻存小鼠肝细胞球形聚集体的初步研究
现有的肝细胞冻存法是将分散的肝细胞用于冻存.从肝组织消化分离的肝细胞,其细胞完整性和功能都会受影响.有报道用肝细胞球形聚集体培养,效果优于用分散肝细胞培养[1].玻璃化法冻存细胞组织,由于不形成冰晶,对细胞损伤较小,已成功用于冻存胚胎、卵巢、胎肝组织和脑细胞[2-5].本研究将小鼠肝细胞预培养成球形聚集肝细胞,用改进的超速玻璃化法冻存,解冻后与含胶原培养液混合、培养,通过检测培养上清液中ALT、AST、乳酸脱氢酶(LDH)浓度判断肝细胞受损漏出情况,检测白蛋白( Alb)浓度判断肝细胞合成功能.对照组用单层贴壁培养分散肝细胞做同样冻存和检测.
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预培养对血液常见感染菌血培养阳性报警时间的影响
目的 探究不同预培养条件对血液常见感染菌血培养阳性报警时间的影响,指导临床血培养标本合理运输与接收. 方法 将金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和铜绿假单胞菌三种血液常见感染菌配成10 CFU/ml和100 CFU/ml浓度菌液,分别注入标准需氧和厌氧血培养瓶,人工模拟构建阳性血流感染标本.血培养瓶置于25℃和37℃预培养0、2、4、8、12、24 h立即放入BacT/Alert 3D血培养仪,记录、分析阳性报警时间. 结果 金黄色葡萄球菌、大肠杆菌在25℃预培养8h、37℃预培养4h阳性报警时间均明显缩短,铜绿假单胞菌在25℃预培养12 h、37℃预培养8h阳性报警时间明显缩短,与未预培养组(0 h)相比差异均有统计学意义(P＜0.05).不同菌落数(菌液浓度)和不同培养瓶类型(需氧或厌氧)间阳性报警时间差异不明显(P＞0.05).铜绿假单胞菌25℃和37℃预培养24 h BacT/Alert 3D血培养仪均报告阴性(假阴性). 结论 从实验结果得出,三种实验菌的阳性报警时间主要受预培养温度和时间的影响,与注入菌落数及培养瓶类型相关性不大;不能及时放入血培养系统的标本应置于37℃预培养,预培养时间不能超过24 h.
