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复制力文献资料
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MicroRNA-A6增效的HEV体外瞬时转染HepG2复制体系的建立及鉴定
目的 验证HEV编码的MicroRNA-A6对全长HEV瞬转HepG2细胞系中病毒复制的增效作用.方法 按照已报道序列合成miR-A6,利用重组PCR、基因克隆以及体外转录技术获得单一高浓度的HEV RNA.HEV RNA与miR-A6按比例采用脉冲电流转染HepG2细胞,转染后24、48和96h后观察细胞上清IgG分泌和HEV RNA表达载量,与不加miR-A6的HepG2细胞进行比较,分析miR-A6对HEV复制的作用,然后加入anti A6抑制miR-A6表达,分析其对HEV表达和复制的影响.结果 MiR A6∶HEV RNA质量比为0.5∶1和1∶1,共转染HepG2细胞后48 h,与单转染HEV RNA相比,lg值升高了1.57和2.44.HEV-IgG先于HEVRNA表达.体外实验显示,Ⅰ型和Ⅳ型HEV复制力没有明显差别,都在转染后48 h达到峰值,加入anti A6抑制miR-A6后HEV-IgG抑制47.12％,HEV RNA抑制43.3％.结论 MiR-A6可以在体外显著增加HEV RNA瞬转HepG2细胞系中HEV病毒的复制力,为后续HEV分子病毒学和表型耐药研究奠定基础.
