首页 > 文献资料
-
肿瘤坏死因子受体相关死亡域蛋白在暴发型肝衰竭肝组织中的表达
目的研究肿瘤坏死因子受体相关死亡域蛋白(TRADD)在暴发性肝衰竭小鼠动物模型肝组织中的表达、分布及在发病机制中的作用.方法尾静脉注射肿瘤坏死因子α(TNFα)于D-氨基半乳糖(GalN)致敏的BALB/c小鼠,造成暴发性肝衰竭模型,用脱氧核糖核酸转移酶介导的缺口原位末端标记(ISEL)技术、琼脂糖凝胶电泳检测肝组织DNA梯带观察肝细胞凋亡,Envision两步免疫组织化学方法检测TRADD蛋白在肝组织中的表达及分布.结果对照组、GalN组和TNFα组肝细胞各时点基本没有或有少量TRADD蛋白表达,而GalN+TNFα组在3.5h时点就有明显表达,此时肝细胞凋亡不明显,6h时点TRADD蛋白表达为明显,9h时点,肝细胞凋亡和坏死非常明显,而TRADD蛋白表达虽然很明显,但低于6h时点.TRADD蛋白阳性率分别为1.3%(1.5h)、3.0%(3.5h)、23.4%(6h)和18.6%(9h).结论TNFα介导的小鼠暴发性肝衰竭动物模型中,TRADD蛋白表达增加,TRADD蛋白表达先于肝细胞凋亡,TRADD蛋白表达和肝细胞凋亡在一定程度上呈正相关,提示TNFα通过上调TRADD蛋白表达介导肝细胞凋亡和坏死进而诱发暴发性肝衰竭.
关键词： 肿瘤坏死因子α 肝细胞 凋亡 肿瘤坏死因子受体相关死亡域蛋白 -
TRADD基因外显子的拼接及重组腺病毒的构建
目的 构建含有人TRADD基因片段的重组腺病毒载体.方法 从人肝组织中提取总RNA,逆转录得到cDNA.按照TRADD基因4个外显子的基因序列设计引物,分别扩增得到4个外显子的基因片段.对4个外显子进行基因拼接,得到全长的TRADD片段.利用AdEasy系统构建TRADD重组腺病毒,测定病毒滴度.并转染成纤维细胞.结果 拼接成功939 kb的TRADD基因,行PCR扩增重组腺病毒中TRADD基因,在略小于1000kb处见到明显的TRADD条带.结论 构建成功的含有TRADD基因片段的重组腺病毒.可用于转染人成纤维细胞.用于检测TRADD对病理性瘢痕成纤维细胞的影响.
关键词： 肿瘤坏死因子受体相关死亡域蛋白 克隆 基因拼接 腺病毒
