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虫种特异性基因检测小鼠无虫病理组织裂头蚴感染的可行性研究
目的 研究用细胞色素C氧化酶1基因(cox1)及内转录间隔区1(ITS-1)特异性序列检测小鼠无虫病理组织中裂头蚴感染的可行性. 方法 6～8周龄昆明小鼠20只,采用随机抽签法分为感染组(15只)和未感染组(5只),感染组小鼠经口感染蛇源裂头蚴(5条/只),未感染组不作任何处理. 感染后第14天剖杀小鼠,取感染组小鼠皮下含裂头蚴肌肉组织(含虫组织)、去除裂头蚴肌肉组织(无虫组织)及未感染组小鼠相应部位肌肉,制作组织切片,苏木精-伊红染色法(HE)染色后观察. 用改良的蛋白酶K消化法提取未染色肌肉组织切片的DNA,PCR扩增cox1(2对引物,对应cox1-1和cox1-2片段)和ITS-1序列.选取从感染组无虫组织DNA扩增的cox1-1进行克隆并测序,与GenBank 中猬裂头蚴序列(KJ418421、KF990161、GQ999947)进行比对.以猪囊尾蚴感染的小鼠肌肉组织同法制作切片并提取DNA,评价cox1和ITS-1 PCR扩增的特异性. 结果 感染组含虫组织DNA经1次PCR即可扩增出414bp(cox1-1)、151 bp(cox1-2)、822 bp(ITS-1)的条带.感染组无虫组织DNA笫1次PCR未扩增出条带,以第1次PCR产物为模板再次PCR,扩增出相同大小的3条条带.未感染组DNA第1次和第2次PCR均未扩增出条带.序列比对结果显示,从感染组无虫组织DNA扩增的cox1-1序列与KJ418421、KF990161、GQ999947序列的同源性分别为98.2％、99.1％、99.1％.猪囊尾蚴感染组织DNA没有扩增出条带. 结论 以cox1和ITS-1序列为靶序列进行重复PCR,能鉴定小鼠无虫病理组织裂头蚴感染.
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虫种特异性基因检测小鼠无虫病理组织裂头蚴感染的可行性研究
目的 研究用细胞色素C氧化酶1基因(cox1)及内转录间隔区1(ITS-1)特异性序列检测小鼠无虫病理组织中裂头蚴感染的可行性. 方法 6～8周龄昆明小鼠20只,采用随机抽签法分为感染组(15只)和未感染组(5只),感染组小鼠经口感染蛇源裂头蚴(5条/只),未感染组不作任何处理.感染后第14天剖杀小鼠,取感染组小鼠皮下含裂头蚴肌肉组织(含虫组织)、去除裂头蚴肌肉组织(无虫组织)及未感染组小鼠相应部位肌肉,制作组织切片,苏木精-伊红染色法(HE)染色后观察.用改良的蛋白酶K消化法提取未染色肌肉组织切片的DNA,PCR扩增cox1(2对引物,对应cox1-1和cox1-2片段)和ITS-1序列.选取从感染组无虫组织DNA扩增的cox1-1进行克隆并测序,与GenBank中猬裂头蚴序列(KJ418421、KF990161、GQ999947)进行比对.以猪囊尾蚴感染的小鼠肌肉组织同法制作切片并提取DNA,评价cox1和ITS-1 PCR扩增的特异性. 结果 感染组含虫组织DNA经1次PCR即可扩增出414 bp(cox1-1)、151 bp (cox1-2)、822 bp(ITS-1)的条带.感染组无虫组织DNA第1次PCR未扩增出条带,以第1次PCR产物为模板再次PCR,扩增出相同大小的3条条带.未感染组DNA第1次和第2次PCR均未扩增出条带.序列比对结果显示,从感染组无虫组织DNA扩增的cox1-1序列与KJ418421、KF990161、GQ999947序列的同源性分别为98.2％、99.1％、99.1％.猪囊尾蚴感染组织DNA没有扩增出条带. 结论 以cox1和ITS-1序列为靶序列进行重复PCR,能鉴定小鼠无虫病理组织裂头蚴感染.
