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应用形态学与PCR技术鉴定黄胸鼠和黄毛鼠体内锥虫
目的 应用形态学和PCR方法对浙江省发现的两例疑似感染锥虫的鼠血样进行鉴定. 方法 采集两例疑似感染锥虫的鼠血样,制作血涂片进行显微镜检查,测量锥虫的相关形态学指标.提取两例鼠血样DNA,应用PCR法扩增锥虫属18S rRNA基因特异性片段.扩增产物测序后,应用NCBI中Blast分析程序对测序序列进行比对分析,并将测序序列提交至GenBank. 结果 两份疑似感染锥虫的鼠血样分别来源于野外黄毛鼠和室内黄胸鼠.制作血涂片进行显微镜检查,测量锥虫的相关形态学指标.镜下观察发现,血涂片中的锥虫均具备核、鞭毛和动基体等锥虫特征性结构.分离自黄毛鼠和黄胸鼠的锥虫总体长分别为27.50 μm和23.80 μm,游离鞭毛的长度分别为9.60 μm和9.20 μm,核指数分别为0.74和1.05,动基体指数分别为1.40和1.57,属于啮齿动物内寄生的匍锥虫亚属(Herpetosoma)锥虫.应用PCR法扩增锥虫属18S rRNA基因的特异性片段,片段大小约为700 bp,对扩增产物测序后将序列提交至GenBank,登录号分别为KP098535和KP098536.分离自黄毛鼠锥虫的18S rRNA基因序列(KP098535)与Trypanosoma rabinowitschae(AY491765.1)、T.blanchardi(AY491764.1)和T.musculi (AJ223568.1)等序列的18S rRNA基因序列的同源性均为100％,可以确定其为匍锥虫亚属,但尚不能确定具体种.分离自黄胸鼠锥虫的序列(KP098536)与GenBank中路易斯锥虫(rlewisi)的18S rRNA基因序列(AB242273.1和AJ009156.1)的同源性为100％,可判定其为路易斯锥虫. 结论 分离自黄胸鼠的锥虫为路易斯锥虫,分离自黄毛鼠的锥虫隶属于匍锥虫亚属,可判为类路易斯锥虫.
