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日本血吸虫糖基化磷脂酰肌醇锚定蛋白的鉴定
目的 鉴定日本血吸虫的糖基化磷脂酰肌醇锚定蛋白(GPI-AP). 方法 根据曼氏血吸虫的糖基化磷脂酰肌醇(GPI)锚定蛋白Sm200的编码基因(GenBank登录号为XM 002569560.1),运用生物信息学方法寻找日本血吸虫的同源基因,分析后选取基因蛋白质编码区(CDS)的部分基因序列(SjGPIs,长约933 bp)进行PCR扩增,并克隆入原核表达载体pET-28a(+),重组质粒转化大肠埃希菌(E.coli) BL21 (DE3)感受态细胞,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,用镍柱Ni-NTA亲和层析纯化重组肽段SjGPIs.用纯化的重组肽段SjGPIs免疫新西兰大耳兔,以制备的重组肽段抗血清检测日本血吸虫GPI锚定蛋白.用磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C(PI-PLC)鉴定检测到的蛋白在日本血吸虫虫体上的锚定方式.检测日本血吸虫感染小鼠的白细胞,确定其是否吞噬GPI锚定蛋白. 结果 日本血吸虫的基因组中存在与曼氏血吸虫GPI锚定蛋白Sm200基因的同源基因序列,经比对拼接后获得3495 bp含完整编码蛋白C末端的基因编码序列.以所选基因序列进行肽段原核表达,获得重组质粒pET-28a(+)-SjGPIs.通过对蛋白C末端序列分析、经蛋白质印迹(Western blotting)分析和PI-PLC酶切验证,发现日本血吸虫被膜存在以GPI形式锚定的蛋白,相对分子质量约为Mr 200000,命名为SjGPI200.感染日本血吸虫小鼠的白细胞中可检测到完整的SjGPI200蛋白. 结论 日本血吸虫存在锚定蛋白SjGPI200,并以GPI形式锚定于虫体被膜上.
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精子表面的GPI锚定蛋白
糖基化磷脂酰肌醇锚定蛋白(GPI-APs)是一类通过其羧基末端的糖基化磷脂酰肌醇结构锚定于真核细胞膜表面而不跨越其磷脂膜双层的蛋白.精子上的GPI-APs是一类重要的精子表面蛋白,已报道的有十几种,功能多样,在精子的发生、成熟、获能、受精以及免疫保护等方面起着重要作用.这类蛋白有些可能是某些男性不育症潜在的诊断和治疗靶点,有些则是有前景的免疫避孕候选靶标.
关键词： 糖基化磷脂酰肌醇锚定蛋白 GPI-APs 精子 免疫避孕
