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抗广州管圆线虫成虫单克隆抗体的研制及初步应用
目的制备抗广州管圆线虫成虫单克隆抗体并研究其初步应用.方法用广州管圆线虫成虫可溶性抗原免疫BALB/c小鼠,经融合,筛选分泌高滴度、高特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株.使用所得的单克隆抗体以Western blotting检测广州管圆线虫病患者血清,并建立双抗体夹心ELISA法检测感染大鼠血清.结果获得3株分泌高滴度抗广州管圆线虫成虫可溶性抗原的单克隆抗体杂交瘤细胞株(2A2、3F1、4H2),其分泌的抗体与日本血吸虫、卫氏并殖吸虫、猪囊尾蚴、旋毛虫抗原均不发生交叉反应.3株单克隆抗体均可识别广州管圆线虫成虫可溶性抗原蛋白 Mr 15 000,以及患者血清中两种循环抗原 Mr24 000和 Mr15 000.双抗体夹心ELISA检测阳性率为76.5%.结论制备的抗广州管圆线虫成虫可溶性抗原的杂交瘤细胞株能分泌高滴度、高特异性的单克隆抗体,且在循环抗原的检测方面有应用前景.
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杜仲提取物抗HIV活性成分的分离鉴定
目的:研究杜仲提取有效成分对HIV gp41六股螺旋束的抑制作用,为寻求新的抗HIV病毒进入抑制剂提供实验依据.方法:将杜仲水提取液分别用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取,萃取物干燥称量后制备成浓度为1mg/ml的样品液,用夹心免疫酶联法检测杜仲及其萃取物对HIV gp41六股螺旋束结构形成的抑制作用.结果:发现杜仲抗HIV gp41的活性部分存在于在乙酸乙酯萃取物中,经过醇沉后的上清液失去活性,而沉淀物具有较高的活性.结论:杜仲可抑制HIV gp41六股螺旋束的形成从而起到抗HIV的作用,其活性部位主要在乙酸乙酯萃取物里,活性物质是能被乙醇沉淀的大分子物质.
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IL-12对SLE患者PBMC分泌IL-10、IFN-γ的影响
目的了解白细胞介素-12(IL-12)对SLE患者外周血单一核细胞(PBMC)分泌白细胞介素-10(IL-10)、γ-干扰素(IFN-γ)的影响.方法在培养体系中加入或不加入IL-12,观察IL-12对SLE患者及正常对照PBMC分泌IL-10,IFN-γ的水平变化.结果 IL-12可使SLE患者PBMC分泌IL-10水平降低而使IFN-γ水平升高.结论在体外,加入适当的IL-12可部分纠正与SLE发病有关的主要的异常细胞因子格局.
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应用双抗体夹心ELISA法定量检测人源破伤风毒素单克隆抗体中的IgG含量
采用山羊抗人IgG作为包被抗体,辣根过氧化物酶标记的山羊抗人IgG作为标记抗体,建立一种双抗体夹心法用于定量检测人源破伤风毒素单克隆抗体的IgG含量.以纯化的IgG作标准,用平行线法测得亲和层析纯化的人源破伤风毒素单克隆抗体G2的含量为O.512μg/ml,与分光光度法测得的结果基本一致.因而样品检测采用纯化G2作参考标准,制作标准曲线,测定了已知样品和未知样品的抗体含量.结果表明本法重复性好,特异性强,可定量测定培养及纯化样品中人源单克隆抗体的含量.
关键词： 人源破伤风毒素单克隆抗体 夹心ELISA法 IgG
