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从感染小鼠获得微小隐孢子虫卵囊方法的改进
目的建立从感染C57BL/6N小鼠获得大量微小隐孢子虫卵囊的方法.方法在饮水中添加不同浓度的地塞米松对人工感染小鼠进行免疫抑制,探讨获得多卵囊数的药物添加量;比较不同纯化方法得到的卵囊回收率和纯度;探讨来自不同动物、不同纯化方法的卵囊在牛输卵管上皮细胞培养系统的感染情况.结果地塞米松加入量为20 μg/ml的第3组获得的卵囊量高达4 16×109/30个小鼠;用饱和盐水漂浮法与用蔗糖密度梯度离心法纯化得到的卵囊具有相同的回收率和纯度;从感染小鼠与犊牛中获得的卵囊在感染性上差异不显著.结论成功地建立了从感染小鼠获得大量微小隐孢子虫卵囊的方法,具有简单、方便、快速等优点,并且不影响活力.
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人脐带间充质干细胞来源外体提取方法的比较
目的 比较蔗糖密度梯度离心法和差速离心法提取的脐带间充质干细胞来源外体(hucMSC-Ex)在高丰度蛋白质含量和纯度上的差异.方法 分别用蔗糖密度梯度离心法和差速离心法提取hucMSC-Ex,透射电镜下观察两法提取的外体的形态结构,SDS-PAGE分析二者的蛋白质组分,western blot检测二者的表面标志蛋白CD9和CD81,免疫荧光法检测二者内化至靶细胞EA.hy926的数量.结果 两种方法提取的hucMSC-Ex均为直径约30～100 nm的圆形或椭圆形膜性囊泡结构;在相同蛋白质总量下,差速离心法提取的hucMSC-Ex高丰度蛋白质含量明显低于蔗糖密度梯度离心法,但其表面标志蛋白CD9和CD81的表达量却明显高于蔗糖密度梯度离心法;在相同蛋白质浓度下,差速离心法提取的hucMSC-Ex被靶细胞EA.hy926细胞内化的数量更多.结论 两种方法均能成功提取hucMSC-Ex,差速离心法提取的hucMSC-Ex纯度更高,而高丰度蛋白质含量明显降低.
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心肌缺血再灌注时核孔复合体通透性变化与细胞核钙含量关系探讨
目的:研究心肌缺血再灌注时心肌细胞核核孔复合体通透性的变化与核内钙含量改变的关系.方法:制作大鼠心肌缺血再灌注损伤模型,蔗糖密度梯度离心法分离纯化大鼠心肌细胞核,采用原子分光光度法测定细胞核内钙含量,用荧光分光光度计测定荧光标记的钙调素跨核膜转运量以观察核孔复合体通透性改变.
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三七总甙对大鼠烧伤后心肌细胞膜离子泵活性的影响
心肌细胞膜Na+-K+泵、Ca2+-Mg2+泵通过消耗ATP, 调节离子转运,直接参与心肌舒缩过程的调控;红细胞膜上的Na+-K+泵与左心室收缩功能之间有高度相关性,而Ca2+-Mg2+泵则与心脏舒张及收缩功能均显著相关.本室既往研究发现大鼠在严重烧伤后心功能下降,三七总皂苷(PNS)能有效改善烧伤后心功能.为观察PNS对烫伤大鼠红细胞及心肌细胞膜Na+-K+泵、Ca 2+-Mg2+泵活性的影响,进一步探讨PNS改善烧伤后心功能的机制,本研究通过30%体表面积背部皮肤Ⅲ度烫伤大鼠模型,应用溶血法制备红细胞膜,蔗糖密度梯度离心法分离心肌细胞膜,用哇巴因抑制Na+-K+泵活性,采用生化方法同步测定红细胞膜与心肌细胞膜中Ca2+-Mg2+泵及Na+-K+泵活性, 以单位时间内分解ATP产生Pi量表示酶活性.用硫代巴比妥酸比色法测定心肌MDA产量.结果发现:大鼠烫伤后心率加快,心电图T波低平,心肌细胞与红细胞膜Ca2+-Mg 2+泵和Na+-K+泵活性均显著下降(P<0.01),Ca2+-Mg 2+泵活性在心肌细胞膜与红细胞膜之间呈显著相关性(r=0.951,P<0.01).100mg/kg的PN S可使心率及T波恢复、离子泵活性明显增加(心肌细胞膜两种离子泵活性分别升高48%、102% ;红细胞膜两泵活性分别升高98%、33%).烫伤后心肌组织MDA含量显著增加(P<0.05),PNS 可剂量依赖性抑制这种变化,PNS剂量与MDA产量显著负相关(r=-0.973,P<0.01).提示三七总皂甙改善烫伤大鼠心功能与其提高心肌细胞膜Na+-K+泵、Ca2+-M g2+泵活性,减少烫伤后心肌脂质过氧化有关.
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流感病毒疫苗纯化方法的研究
实验通过收取流感病毒收获液,经过超滤浓缩后,分别采用sepharose4FF凝胶层析和蔗糖密度梯度离心法进行纯化,并对纯化产物进行检定.结果显示sepharose4FF凝胶层析法的纯度、卵清蛋白及杂质蛋白去除率略高于蔗糖密度梯度离心法,而蔗糖密度梯度离心法的病毒回收率优于sepharose4FF凝胶层析法.因此两种方法均可用于流感病毒的纯化.
