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  • 日本血吸虫未知基因的获得、鉴定和编码区的克隆

    作者:李焱;余新炳;吴忠道;郑焕钦;李晖婷;包俊英

    目的寻找日本血吸虫未知基因,并对其进行鉴定和编码区克隆.方法运用表达序列标签(EST)法寻找日本血吸虫未知基因,对获得的表达序列标签运用生物学软件进行分析,根据同源基因序列推测其可能的功能,并将其克隆人真核表达载体pEGFP-N3中.结果获得1个完整的日本血吸虫cDNA序列(JAYL0230),氨基酸同源性分析发现与其他生物的抗凋亡因子1具有同源性,构建了重组克隆pEGFP-N3-JAYL0230.结论EST法是一种快速发现和鉴定日本血吸虫未知表达基因的有效方法,有助于加速其全长cDNA的克隆.

  • 日本血吸虫新基因Sj Dad1的DNA免疫动物保护性实验研究

    作者:李焱;余新炳;吴忠道;孟玮;陈慧红;彭寨玉

    目的观察日本血吸虫未知基因Sj Dad1的DNA免疫保护动物实验效果,探讨其作为疫苗候选分子的可能性.方法构建Sj Dad1的真核表达载体pEGFP-N3-Sj Dad1,两次质粒DNA免疫BALB/c小鼠后给予小鼠日本血吸虫尾蚴攻击感染,设置生理盐水对照组(NS)和pEGFP-N3对照组,攻击感染后42天处死小鼠,计算减虫率和减卵率.结果双酶切和PCR反应以及测序结果证实重组真核表达载体pEGFP-N3-Sj Dad1构建成功,DNA免疫动物的保护实验证明pEGFP-N3-Sj Dad1与生理盐水组相比对小鼠没有显著的减虫作用(P>0.05),减卵效果具有显著性意义(P<0.01),减卵率是65.74%.结论日本血吸虫pEGFP-N3-Sj Dad1有抗血吸虫生殖作用,具有疫苗研究开发价值.

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