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伊立替康与4-氨基吡啶联合应用对人结直肠癌细胞增殖作用的影响
目的 研究肿瘤化学治疗药物伊立替康(CPT-11)对人结直肠癌细胞株HT-29细胞的作用及对钾离子通道阻断剂4-氨基吡啶(4-AP)的影响,并探讨其抗HT-29细胞的可能机制.方法 CPT-11、4-AP以及两药联合应用对HT-29细胞增殖及细胞侵袭力的影响分别用MTT比色法和Transwell法检测.用流式细胞术膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素碘化丙啶双染法检测上述两种药物对HT-29细胞凋亡的影响.用膜片钳方法 检测ATP敏感性钾电流(IKATP)的电流变化.结果 1.0～64.0μg/ml CPT-11可呈剂量依赖性和时间依赖性地抑制HT-29细胞增殖,而1.0 mmol/L的4-AP可使CPT-11的作用增强.16.0 μg/ml CPT-11和1.0 mmol/L 4-AP单独应用均可明显诱导HT-29凋亡、抑制HT-29细胞侵袭力,而两药联合应用能明显增加上述诱导凋亡和抑制侵袭力的作用.不同浓度CPT-11可剂量依赖性地降低细胞膜IKATP水平,呈剂量依赖负相关性.结论 CPT-11抑制人结直肠癌HT-29细胞增殖和侵袭力、诱导细胞凋亡等作用可被4-AP协同增强,可能机制与CPT-11抑制ATP敏感性钾通道开放有关.
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ATP敏感性钾电流与蛋白激酶关系的研究
目的观察蛋白激酶A(PKA)及蛋白激酶C(PKC)抑制剂和蛋白脱磷酸化物质对大鼠心室肌细胞ATP敏感性钾电流(IKATP)的影响,探讨克罗卡林(cromakalim)开放ATP敏感性钾通道的作用机制.方法采用全细胞膜片钳技术记录心室肌细胞IKATP.结果在37 ℃时克罗卡林(1 μmol·L-1)可阻断ATP的抑制作用,诱导出IKATP.PKA抑制剂PKI(6～22)amide (1 μmol·L-1),可模拟克罗卡林的作用,激活IKATP;而PKC抑制剂calphostic C无此作用.同时还观察到蛋白脱磷酸化物质butanedioe monoxime (BDM,5 mmol·L-1)也可诱发出IKATP.结论克罗卡林开放IKATP机制与抑制PKA的活性有关,而与PKC无关.
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丹参注射液对模拟缺血预适应引起兔心室肌细胞动作电位和ATP敏感性钾电流变化的影响
目的:探讨丹参注射液对模拟缺血预适应引起兔心室肌细胞动作电位和ATP敏感性钾电流(IK(ATP))变化的影响,试图揭示其保护心肌缺血-再灌注损伤,抗缺血性心律失常作用的离子机制.方法:采用酶解法分离兔左心室细胞,按先后顺序,用正常Tyrode液和模拟缺血液以及模拟缺血液加丹参(750 mg·L-1)灌流,利用膜片钳全细胞记录技术记录不同条件下动作电位和IK(ATP)前后变化.结果:①模拟缺血液灌流后动作电位时程(APD)复极化的50%(APD50)和90%(APD90)分别缩短(与正常组相比P<0.05,n=12);模拟缺血液加丹参灌流,APD50和APD90缩短更加明显,分别缩短了80.46% 和71.87%(与正常组相比P<0.01,与模拟缺血液组相比P<0.05,n=12).静息电位和动作电位幅值无明显改变;②经模拟缺血液灌流,引起IK(ATP)通道的开放,膜电流显示外向性直线形,发生率为58.33%(7/12,P<0.05 ).模拟缺血液加丹参,更容易引起IK(ATP)开放,膜电流曲线完全成为直线,诱发率为91.67%(11/12,与正常组和模拟缺血液组相比P<0.05);③ Glibenclimide能使这种外向性直线形膜电流恢复为"N"形,证明这种膜电流为IK(ATP);经丹参作用后,改用正常Tyrode液冲洗,心肌细胞上结合的丹参可以被洗脱以及从模拟缺血液中得到恢复. 结论:丹参能产生类似心肌缺预适应的病理生理过程,起到了ATP敏感性钾通道开放剂效应,这可能是丹参对心肌缺血预适应的保护作用具有增强效应电生理基础.
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氯胺酮对人单个心房肌细胞ATP敏感性钾电流(IK·ATP)的影响
目的:探讨氯胺酮对人单个心房肌细胞ATP敏感性钾电流(IK·ATP)的影响.方法:取房缺或室缺修补术患者的右心耳组织,置于100%氧饱和的无钙心肌细胞保护液中,30 min内送至实验室.将标本剪成1 mm3的小块,用二步酶解法分离出单个心房肌细胞.采用膜片钳全细胞记录方法,观察两种浓度氯胺酮对人单个心房肌细胞IK·ATP的影响.结果:在电极内液含ATP(0.3 mmol·L-1)的条件下,记录到一束外向K+电流.该电流可被KATP通道特异阻滞药格列苯脲(10μmol·L-1)抑制,表明此电流为IK·ATP在指令电位为+20mV时,用含低浓度氯胺酮(0.01 mmol·L-1)的细胞外液灌流时,IK·ATP受到抑制,抑制率为11.1%(n=3,P＜0.01).用含高浓度氯胺酮(0.1 mmol·L-1)的细胞外液灌流时,IK·ATP被大量激活,增加率为57.6%(n=3,P＜0.01).结论:低浓度氯胺酮(0.01 mmol·L-1)对人心房肌细胞IK·ATP具有抑制作用;高浓度氯胺酮(0.1 mmol·L-1)对IK·ATP则有激活作用.
