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亲和纯化技术联合质谱分析筛选乳腺癌中p90核糖体S6蛋白激酶4相互作用蛋白
背景与目的：p90核糖体S6蛋白激酶4基因(ribosomal S6 kinase 4 gene，RSK4)作为抑癌基因，能够抑制细胞增殖、迁移并诱导细胞的凋亡，但与其配合发挥相应功能的相互作用蛋白尚不明确。该研究利用Flag标签纯化技术和质谱分析筛选鉴定乳腺癌细胞株MDA-MB-231中的RSK4相互作用蛋白。方法：构建含有RSK4全长和Flag亲和标签的真核表达载体pcDNA3.1/EGFP-RSK4-Flag，将其转染至MDA-MB-231乳腺癌细胞株，72 h后收集细胞蛋白。采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time lfuorescent quantitative polymerase chain re-action，RTFQ-PCR)和蛋白[质]印迹法(Western blot)检测RSK4表达情况。运用标签分离纯化RSK4蛋白，液相质谱/质谱分析技术(liquid chromatography mass spectrometry/mass spectrometry，LC-MS/MS)鉴定RSK4相互作用蛋白，通过生物信息学的方法(GO分析和IPA分析)归纳分析互作蛋白以及与RSK4相互作用机制。结果：通过标签纯化联合质谱分析成功鉴定出丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶38(serine/threonine-protein kinase 38，STK38)/丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶38类(serine/threonine-protein kinase 38-like，STK38L)、MOB激酶致活因子2(MOB kinase activator 2，MOB2)、蛋白精氨酸N甲基转移酶5(protein arginineN-methyltransferase 5，PRMT5)等24个RSK4相互作用蛋白。对所鉴定出的互作蛋白进行生物信息学分析，提示RSK4互作蛋白组参与包含细胞凋亡和细胞迁移运动等在内的多种生物信号通路。结论：利用亲和纯化技术联合质谱鉴定成功筛选出RSK4相互作用蛋白并通过生物信息学分析获得了RSK4参与乳腺癌细胞的凋亡、迁移相关生物调控网络。
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新辅助化疗对手术根治性结直肠癌组织RSK4蛋白表达及术后淋巴结检出数目的影响
目的 探析新辅助化疗对手术根治性结直肠癌组织RSK4蛋白表达及术后淋巴结检出数目的影响.方法 选择我院2011年1月至2015年6月收治77例结直肠癌患者作为研究对象,患者均行根治手术,根据患者意愿分为新辅助组(n=32)与单纯根治组(n=45),比较两组临床疗效、直肠癌组织RSK4蛋白表达情况、术后淋巴结检出数目及毒副反应发生率.结果 新辅助组治疗有效率为84.3％(27/32),高于单纯根治组60.0％(27/45),差异有统计学意义(P＜0.05).两组入院时的直肠癌组织RSK4蛋白表达水平的差异无统计学意义,新辅助组RSK4蛋白表达水平术后高于该组入院时及单纯根治组术后,差异均有统计学意义(P＜0.05).新辅助组术后平均淋巴结检出数目及检出淋巴结平均直径均低于单纯根治组,差异有统计学意义(P＜0.05).新辅助组共9例(28.1％)出现毒副反应,单纯根治组为11例(24.4％),以Ⅰ、Ⅱ度为主,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 新辅助化疗利于强化手术根治性结直肠癌组织疗效并增加RSK4蛋白表达,抑制肿瘤进展,对中晚期患者有较大积极意义.但其也会引起术后淋巴结检出的减少,日后临床需制定新的淋巴结数量标准,而不宜继续将淋巴结数目超过12枚作为手术切除彻底性评估指标.
