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AntiMRP3(scFv) -sTRAIL靶向诱导多形性成胶质细胞瘤的凋亡
目的:观察抗人类多药耐药相关蛋白3 (multidrug resistance protein 3,MRP3)的单链抗体与可溶性坏死因子相关凋亡诱导配体( soluble TNF-related apoptosis inducing ligand,sTRAIL)的融合蛋白antiMRP3( scFv) -sTRAIL对多形性成胶质细胞瘤( glioblastoma multiforme,GBM) U251细胞凋亡的影响,并探讨其机制.方法:MTT法检测不同浓度antiMRP3( scFv) -sTRAIL( 3.9063～250 nmol/L)作用后U251细胞的存活率.给予亲代antiMRP3( scFv)或TRAIL活性中和抗体mAb 2E5预孵育,应用IC50剂量的antiM RP3 (scFv) -sTRAIL作用U251细胞,流式细胞仪检测U251细胞的凋亡率,Western blotting检测U251细胞中caspase-3的激活及其关键底物DNA裂解因子(DNA fragmentation factor,DFF)的降解.结果:随着antiMRP3( scFv) -sTRAIL浓度的增加,U251细胞的存活率逐渐降低[(84.84±0.2)％～(19.93±1.8)％];IC50剂量(62.5 nmol/L)的antiMRP3(scFv) -sTRAIL单独或给予antiMRP3(scFv)、mAb 2E5预孵育后处理,致U251细胞的凋亡率分别为(58.0±1.3)％、(14.9±1.7)％和(17.4±3.0)％;amiMRP3 (scFv)或mAb 2E5预孵育均可阻断U251细胞中antiMRP3( scFv) -sTRAIL诱导的caspase-3的激活及DFF的裂解.结论:AntiMRP3 (scFv) -sTRAIL促进sTRAIL靶向识别并诱导GBM细胞凋亡,为开发靶向性抗肿瘤药物奠定了基础.
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川西獐牙菜单体齐墩果酸上调阻塞性胆汁淤积大鼠肝脏核受体Lrh-1和胆酸转运蛋白Mrp3的表达
目的 建立胆道结扎的大鼠模型,观察川西獐牙菜活性单体齐墩果酸(oleanolic acid,OA)对胆道结扎所致的肝外胆汁淤积的保护作用,及其对多药耐药相关蛋白3(multidrug resistanceassociated protein 3,Mrp3)、核受体Lrh-1的调控作用.方法 采用随机数字表法将15只SD大鼠分为3组:假结扎组(Sham组)、胆道结扎组(BDL组)、齐墩果酸组(BDL+OA组),每组5只.分别用生理盐水、齐墩果酸处理7d后,收集组织标本,HE染色检测肝脏损伤程度,Western blot及RT-PCR检测Mrp3和Lrh-1在蛋白及mRNA水平的变化.结果 HE染色结果显示BDL+ OA组肝脏损伤程度较胆道结扎组明显减轻;Western blot结果表明BDL+ OA组Mrp3表达较Sham组增加2.4倍,Lrh-1表达增加1.8倍;RT-PCR结果显示BDL+ OA组Mrp3表达较Sham组增加3.2倍,Lrh-1表达升高2.2倍.结论 川西獐牙菜单体齐墩果酸对胆道结扎所致大鼠胆汁淤积性肝损伤具有保护作用,而这种保护作用可能与Lrh-1、Mrp3有关.
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川西獐牙菜醇提物上调HepG2细胞膜转运蛋白MRP3、核转录因子SP1及核受体CPF、PXR表达
目的 体外培养HepG2细胞观察川西獐牙菜醇提物(Swertia mussitii Franch)对多药耐药相关蛋白3(multidrug resistance protein 3,MRP3)、核转录因子SP1 (specificity protein 1 transcription factor,SP1)及核受体孕烷X受体(pregnane X receptor,PXR)、CYP7A启动子结合因子(CYP7A promoter-binding factor,CPF)表达的影响.方法 用MTT比色法检测川西獐牙菜醇提物的佳作用浓度,再分别于0、12、24、48、72h刺激HepG2细胞,抽提细胞的RNA、总蛋白和核蛋白,采用荧光定量PCR和蛋白免疫印迹技术检测膜转运蛋白MRP3、转录因子SP1及核受体PXR、CPF在转录与蛋白水平的表达变化.每个时间点设立阴性对照DMSO组和阳性对照熊去氧胆酸(ursodeoxycholic acid,UDCA)组.结果 川西獐牙菜醇提物可显著诱导HepG2细胞膜转运蛋白MRP3的mRNA和蛋白水平的高表达,其作用强于UDCA(P＜0.05).川西獐牙菜醇提物也可明显上调核转录因子SP1及核受体PXR的mRNA和蛋白表达水平,作用强于UDCA.对CPF表达的上调作用与UDCA相当(P＜0.05).结论 川西獐牙菜醇提物可刺激HepG2细胞膜转运蛋白MRP3上调,且有可能是通过核转录因子SP1及核受体PXR、CPF上调其表达.
