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组成性活化形式的Notch1(ICN)文献资料
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Notch1基因转染对人肝癌细胞Hep3B生长的影响及作用机制的研究
目的:研究逆转录病毒介导的Notch1(ICN)基因转染对人肝癌细胞生长的影响,并对其作用机制进行了探讨.方法:采用磷酸钙沉淀法质粒共转染293T细胞,制备出表达组成性活化形式的Notch1(ICN)和/或绿色荧光蛋白(GFP)的逆转录病毒载体MSCV-ICN/GFP及对照逆转录病毒载体MSCV-GFP,并检测病毒滴度.用逆转录病毒感染人肝癌细胞Hep3B,观察病毒的感染效率,MTT比色法测定瞬时表达Notch1(ICN)对Hep3B人肝癌细胞生长的影响,利用流式细胞仪分析细胞周期分布的变化,Western blot方法检测细胞周期调控蛋白的变化.结果:通过质粒共转染可获得具有较高滴度的重组逆转录病毒.MTT比色法显示瞬时表达Notch1(ICN)基因可以抑制人肝癌细胞Hep3B的生长,瞬时表达Notch1(ICN)基因可使Hep3B细胞周期停滞在G0/G1期并上调细胞周期调控蛋白P53的表达水平.结论:Notch1基因可通过影响细胞周期分布和P53蛋白的表达水平而抑制人肝癌细胞生长.
