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同种异体NK细胞KIR2DL1表达差异对其杀伤KG1A细胞活性的影响
目的:研究同种异体自然杀伤( natural killer,NK)细胞对人急性髓系白血病细胞株KG1A的杀伤率,探讨供者NK细胞表面杀伤细胞免疫球蛋白样受体2DL1( killer immunoglobulin-like receptor 2DL1,KIR2DL1)表达差异对NK细胞杀伤KG1A细胞活性的影响.方法:自9名健康志愿供者分离外周血NK细胞,流式细胞术检测NK细胞表面KIR2DL1的表达率,LDH释放法测定NK细胞在效靶比为20∶1时对KG1A细胞的杀伤活性.结果:NK细胞表面KIR2DL1的表达率存在个体差异,9名供者的表达范围为(33.20±1.95)％～(92.69±1.47)％；9名健康供者NK细胞对KG1A细胞的杀伤活性不同,杀伤率范围为(44.40±1.97)％～(93.70±1.12)％.不同个体NK细胞KIR2DLI表达率与其对KGIA细胞的杀伤率呈负相关(r=-1.00,P=0.00).结论:不同个体NK细胞其表面KIR2DL1表达率与NK细胞对KGlA细胞的杀伤率呈负相关.
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人KIR2DL1-Ig融合蛋白在COS-7细胞的表达
目的: 获得人KIR2DL1分子(killer Ig-like receptor 2DL1)胞外区与人IgG Fc段的融合蛋白.方法: 从人外周血单个核细胞中提取总RNA, 通过RT-PCR扩增编码KIR2DL1胞外段cDNA, 经Nhe Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切后, 定向插入真核细胞表达载体CD5lnegl中.构建的重组真核表达载体CD5lnegl-KIR2DL1.经酶切分析和测序鉴定后, 通过DEAE-dextran/chloroquine法转染COS-7细胞.瞬时表达后, 取培养上清液经亲和层析、ELISA、SDS-PAGE及Western印迹,鉴定融合蛋白的表达及其免疫学活性.结果: 序列测定证实, 该重组表达载体含有正确的KIR2DL1胞外区基因序列.重组真核表达载体CD5lnegl-KIR2DL1转染COS-7细胞后, ELISA法检测细胞培养上清中有融合蛋白的表达.SDS-PAGE结果显示, 该融合蛋白的相对分子质量(Mr)约为73 000.Western印迹结果证实, 该蛋白能被特异性单克隆抗体(mAb)EB6所识别.结论: KIR2DL1-Ig融合蛋白表达载体成功构建并在COS-7细胞中获得功能性表达, 为KIR2DL1的功能及其配体MHC的研究奠定了基础.
