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蝎毒多肽对白血病细胞株KG1a干细胞活性的影响
目的:探讨蝎毒多肽对白血病细胞株KG1a干细胞活性的影响.方法:免疫磁珠法分离出CD34+CD38-的KG1a细胞,按照不同给药方式分空白组、PESV组、DNR组、PESV+DNR组,培养后经WST-8、流式细胞仪分别检测KG1a干细胞增殖抑制率、细胞凋亡率和细胞周期,并经RT-PCR检测PTEN基因、Tie-2基因mRNA表达.结果:KG1a干细胞在PESV组、DNR组细胞增殖抑制率(％)与空白组相比差异有统计学意义(P＜0.05).诱导细胞凋亡作用强弱:PESV+DNR组＞DNR组＞PESV组.细胞周期检测结果显示,G0/G1期PESV+DNR组与PESV组、DNR组相比差异有统计学意义(P＜0.01).在G2/M期PESV+DNR组与PESV组、DNR组相比差异有统计学意义(P＜0.05).PESV组、DNR组、PESV+DNR组KG1a干细胞的PTEN基因、tie-2基因表达均上调,PESV+DNR组为高表达.结论:PESV能够抑制KG1a干细胞增殖,但不能增强DNR的抑制作用;PESV对DNR损伤KG1a干细胞有诱导凋亡和分化的作用,其机制可能与上调KG1a干细胞的PTEN基因、tie-2基因表达有关.
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益气养阴方对白血病干细胞MDR1mRNA和P-gp表达的影响
目的 探讨益气养阴方对白血病干细胞多药耐药基因1 (multidrug resistance gene 1,MDR1)mRNA和P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)表达的影响.方法 从KG1a细胞株中分选出CD34+ CD38-KG1a细胞,采用CCK-8法检测益气养阴方联合柔红霉素(daunorubicin,DNR)对KG1a干细胞的抑制率及IC50值;RT-PCR法检测益气养阴方干预KG1a干细胞后MDR1 mRNA的表达量;流式细胞术检测益气养阴方干预KG1a干细胞后各组P-gp表达.结果 经过免疫磁珠法分选CD34+ CD38-KG1a细胞比例为(97.2±2.5)％,IC50 (48 h)值为(0.50±0.07)μg/mL.与DNR组和对照兔血清+DNR组比较,20、40 μL含药兔血清+DNR组24、48、72 h的抑制率均增高(P＜0.05).与空白组比较,DNR组MDR1 mRNA表达增高(P＜0.05);与对照兔血清组比较,对照兔血清+ DNR组MDR1 mRNA表达增高(P＜0.05);与含药兔血清组比较,含药兔血清+DNR组MDR1 mRNA表达降低(P＜0.05).与空白组比较,DNR组P-gp表达量增高,但差异无统计学意义(P＞0.05);分别与DNR组、含药兔血清组比较,含药兔血清+DNR组P-gp表达量均明显降低(P＜0.05).结论 益气养阴方可逆转KG1 a干细胞对DNR的耐药性,其机制可能与其协同DNR降低多药耐药基因编码的P-gp蛋白表达,从而提高对DNR的敏感性.
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中华眼镜蛇毒组分联合活化免疫细胞对白血病KG1a细胞的杀伤作用
本研究旨在探讨中华眼镜蛇毒组分(Naja Naja Actra Venom Component,NNAVC)与活化免疫细胞联合对人急性髓系白血病系KG1a细胞的杀伤作用.采用CCK-8法检测不同浓度NNAVC对KG1a细胞的杀伤作用,乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒测定活化免疫细胞对KG1a细胞的细胞毒作用、NNAVC与活化免疫细胞联合杀伤KG1a细胞以及NNAVC作用后存活的KG1a细胞对活化免疫细胞的杀伤敏感性变化.结果显示,NNAVC对KG1a细胞的抑制率随药物浓度的增加而增高,而活化免疫细胞对KG1a细胞的杀伤活性随效靶比的升高(6.25∶1、12.5∶1和25∶1)分别达到12.30％、24.85％和52.26％.NNAVC与不同效靶比(10∶1、20∶1)的活化免疫细胞联合,对KG1a细胞的杀伤率达到56.21％和85.59％,高于两因素各自的单独作用效果.以不同浓度NNAVC杀伤后存活的KG1a细胞为靶细胞,活化免疫细胞对其杀伤活性在效靶比为10∶1时分别为25.65％、31.33％、28.63％和16.78％,在效靶比为20∶1时分别为40.62％、44.70％、44.62％、40.72％.结论:NNAVC与活化免疫细胞在体外均可以有效杀伤KG1a细胞,二者联合应用能够增强对KG1a细胞的杀伤作用.
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柔红霉素对KG1a细胞增殖及肿瘤相关抗原Eps8表达的影响
本研究旨在观察柔红霉素(DNR)对KG1a细胞株的杀伤抑制作用及新型肿瘤相关抗原表皮生长因子受体通路底物8(Eps8)在KG1a细胞中的表达,在mRNA和蛋白水平探讨DNR作用于KG1a后对Eps8表达的影响.不同浓度DNR作用于KG1a细胞24、48和72 h,用台盼蓝拒染色法检测药物对KG1a细胞的杀伤抑制率,用实时荧光定量PCR法检测Eps8 mRNA转录水平的变化和Western blot法观察Eps8蛋白表达变化.结果表明:随着药物浓度(0.1,0.4 μg/ml)的增加及作用时间(24,46,72 h)的延长,DNR对KG1a细胞的杀伤抑制率显著提高(r=0.983,P＜0.01)；不同DNR药物浓度作用于KGla 24、48和72 h后,Eps8表达水平以DNR作用浓度和时间依赖方式明显下降(r=0.979,P＜0.05).结论:随药物浓度的增加和作用时间的延长,DNR对KG1a细胞的杀伤抑制率提高,使Eps8表达下降,推测降低Eps8的表达可能是DNR抑制KG1a细胞增殖的机制之一.
关键词： 表皮生长因子受体通路底物8 KG1a细胞 柔红霉素 -
N-cadherin阳性白血病KG1a细胞系在G0期抵抗VP16杀伤的作用
抗药性是白血病干细胞的重要特征,为探索N-cadherin阳性的白血病细胞耐受化疗药物VP16杀伤作用的机制,本研究以白血病细胞系KGla为研究模型,利用流式细胞术测定N-cadherin阳性和N-cadherin阴性细胞在G0期比例的差异,利用G-CSF诱导KG1a细胞进入细胞周期,观察G0期细胞比例的变化,并测定诱导后KG1a细胞对VP16的敏感性；再利用EGTA抑制N-cadherin介导的细胞间黏附后,观察KG1a细胞耐药性的变化.结果 显示,N-cadherin阳性的KG1a细胞G0期比例高于N-cadherin阴性的细胞；诱导KG1a细胞进入细胞周期后G0期细胞比例明显下降,KG1a细胞对VP16的敏感性显著升高；利用EGTA处理KG1a细胞24小时抑制N-cadherin的作用后,KG1a细胞在G0期比例降低,KG1a细胞对VP16的药物敏感性显著升高.结论:N-cadherin通过介导白血病细胞之间的黏附作用,使白血病细胞处于G0期的静息状态,从而耐受VP16的杀伤作用.
关键词： N-cadherin 白血病细胞 KG1a细胞 VP16 G0期细胞比率 -
来自噬菌体抗体库识别KG1a细胞的scFv5C1的高效表达、纯化及其生物学特性
目的为深入研究源于噬菌体抗体库特定单链抗体（scFv）的功能和其识别抗原的分子特征，将识别KG1a细胞的单链抗体5C1 scFv高效表达、纯化；用scFv测定未知抗原的相对分子质量（Mr）；并研究5C1 scFv对KG1a部分细胞生物学特性的影响。方法基因重组构建表达5C1 scFv的载体pSTE-5C1，在大肠杆菌中诱导表达，金属离子螯和亲和层析法纯化，获得高纯度的活性5C1 scFv；借助生物素-链亲和素的高亲和力和高灵敏度的显色系统，用Western blot分析其识别的KG1a细胞膜蛋白的Mr；用聚集实验分析5C1 scFv对KG1a细胞同型聚集的影响。结果 5C1 scFv在大肠杆菌中获高效表达，纯化后活性蛋白产量可达每升培养物50～60mg，纯度大于95%；成功地测定了其识别抗原的Mr为（85.0/124.5）×103；并确认5C1 scFv以浓度依赖方式抑制KG1a细胞的同型聚集。结论高效表达纯化的5C1 scFv特异性识别Mr为（85.0/124.5）×103的KG1a细胞膜表面分子，此分子可能是一种在KG1a细胞表面表达的参与细胞同型聚集的分子或受体。这些结果为进一步深入研究抗原本质及克隆抗原分子基因奠定了良好的基础。
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同种异体NK细胞对AML细胞体外杀伤活性及初步机制
目的 探讨同种异体自然杀伤细胞(NK细胞)对急性髓系白血病(AML)细胞株KG1a的杀伤活性及其分子机制.方法 以NK敏感的K562细胞株为对照,免疫磁珠法分离5例健康志愿者NK细胞,乳酸脱氢酶(LDH)释放法测定在不同效靶比时NK细胞对KG1a细胞的杀伤活性,并用流式细胞仪检测KG1a细胞表面人类白细胞抗原I(HLA-I)类分子和NKG2D的配体主要组织相容性复合体(MIC)A/B、ULBP1-3的表达情况.结果 效靶比1∶1、5∶1、10∶1、20∶1时NK细胞杀伤K562和KG1a细胞的活性不同,NK细胞对KG1a细胞的杀伤活性较K562细胞明显减低(P＜0.01);K562细胞低表达HLA-I类分子,高表达NKG2D配体MIC可溶性Ⅰ类分子相关蛋白A(MICA)、MICA有亲源性的蛋白(MICB)、ULBP1、ULBP2、ULBP3,而KG1a细胞高表达HLA-I类分子,低表达NKG2D配体MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3.结论 同种异体NK细胞对AML细胞株KG1a的杀伤率低于K562细胞;其杀伤率不同的分子基础与其分子表面配体表达差异和HLA-I分子表达率不同有关.
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体外观察中华眼镜蛇毒组分对KG1a细胞增殖抑制作用及对其细胞周期的影响
目的:探讨中华眼镜蛇毒组分(Naja Naja Actra Venom Component,NNAVC)对KG1a细胞的增殖抑制作用及对其细胞周期的影响.方法:以人急性髓系白血病细胞株KG1a细胞为研究对象进行实验.应用不同剂量的中华眼镜蛇毒组分作用于KG1a细胞后,采用MTT法测定其对KG1a细胞的生长抑制作用,倒置显微镜镜下观察药物作用前后细胞形态学变化,流式细胞仪检测中华眼镜蛇毒组分对KG1a细胞周期的影响.结果:中华眼镜蛇毒组分可以明显的抑制KG1a细胞的增殖.在0.7μg/mL至1.2μg/mL的浓度范围内,中华眼镜蛇毒组分作用具有时间依赖性及剂量依赖性.显微镜镜下观察KG1a细胞经中华眼镜蛇毒组分作用6h后状态开始发生变化,随着药物作用时间的延长,细胞逐渐出现体积变小、变形、胞内空泡、细胞固缩等形态学变化.流式细胞仪检测证实中华眼镜蛇毒组分作用后,能够将KG1a细胞阻滞于细胞周期的G0/G1期,而处于G2/M期的细胞含量减少.结论:中华眼镜蛇毒组分对KG1a细胞的增殖具有明显抑制作用,调节细胞周期停滞于G0/G1期,减少G2/M期的细胞含量,提示影响细胞周期进程可能是中华眼镜蛇毒组分时KG1a细胞的发挥增殖抑制作用的机制之一.
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人参皂苷单体Rh2(S亚型)对人急性髓系白血病细胞株KG1α增殖、凋亡的影响及其机制
目的 探讨人参皂苷单体Rh2(S亚型)对人急性髓系白血病细胞株KG1α增殖、凋亡的影响及其机制.方法 取对数生长期的KG1α细胞,分为两组:空白对照组(常规培养)和人参皂苷单体Rh2(S)组,采用MTT法检测细胞的增殖活力,倒置显微镜观察细胞的形态及数量,透射电镜观察细胞的超微结构,流式细胞仪检测细胞周期的分布,Real-time PCR检测细胞中β-catenin基因mRNA水平,免疫细胞化学法检测细胞中β-catenin、TCF4、CyclinD1蛋白的定位及表达,Western blot检测细胞中β-catenin、TCF4、CyclinD1蛋白的表达水平.结果 人参皂苷单体Rh2(S)对KG1α细胞的增殖具有明显的抑制作用,且呈浓度和时间依赖性.与空白对照组比较,Rh2(S)作用48 h后,可见KG1α细胞分散生长,数量明显减少；可见数量不等,程度不同的凋亡细胞；G0/G1期细胞比例明显上升(P＜0.05),G2+M和S期细胞比例明显下降(P＜0.05)；细胞中β-catenin基因mRNA水平明显降低(P＜0.01).β-catenin、TCF4、CyclinD1蛋白的表达水平明显降低(P＜0.05或P＜0.01).结论 人参皂苷单体Rh2(S亚型)对KG1α细胞具有明显的增殖抑制作用,其机制可能抑制Wnt/β-catenin/TCF4/CyclinD1信号通路,使细胞周期阻滞,诱导细胞凋亡.
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去甲斑蝥素增强IL-15活化的PBMC对白血病KG1a细胞的杀伤作用
目的:探讨去甲斑蝥素(norcantharidin,NCTD)是否能增强IL-15活化的人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)对人急性髓系白血病KG1a细胞的杀伤作用及其可能机制.方法:锥虫蓝拒染法、CCK-8法检测NCTD对KG1a细胞增殖的影响,流式细胞术检测NCTD对KG1a细胞周期的影响,LDH释放法检测IL-15活化的PBMC(IL-15-PBMC)对NCTD处理后KG1a细胞的细胞毒活性,流式细胞术检测KG1a细胞表面NKG2D(natural killer group 2 member D)配体的表达.结果:NCTD有效抑制白血病KG1a细胞的增殖,呈时间(r=0.398,P=0.000)和剂量依赖性(r=0.861,P=0.000),并阻滞KG1a细胞周期于G2/M期；4μg/ml以下的NCTD对IL-15-PBMC没有明显的增殖抑制作用(P＞0.05).当效靶比为10∶1和20∶1时,IL-15-PBMC对0.125 μg/ml NCTD处理后KG1a细胞的杀伤率较对照组明显增加[志愿者A:(37.44±5.78)％ vs (9.33±1.69)％,(38.33±3.07)％vs (16.75 ±1.20)％；P＜0.05].NCTD不影响KG1a细胞表面NKG2D配体蛋白的表达(P＞0.05).结论:NCTD能增强IL-15-PBMC对白血病KG1a细胞的杀伤作用,可能与抑制细胞增殖、阻滞细胞周期于G2/M期有关.
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同种异体NK细胞KIR2DL1表达差异对其杀伤KG1A细胞活性的影响
目的:研究同种异体自然杀伤( natural killer,NK)细胞对人急性髓系白血病细胞株KG1A的杀伤率,探讨供者NK细胞表面杀伤细胞免疫球蛋白样受体2DL1( killer immunoglobulin-like receptor 2DL1,KIR2DL1)表达差异对NK细胞杀伤KG1A细胞活性的影响.方法:自9名健康志愿供者分离外周血NK细胞,流式细胞术检测NK细胞表面KIR2DL1的表达率,LDH释放法测定NK细胞在效靶比为20∶1时对KG1A细胞的杀伤活性.结果:NK细胞表面KIR2DL1的表达率存在个体差异,9名供者的表达范围为(33.20±1.95)％～(92.69±1.47)％；9名健康供者NK细胞对KG1A细胞的杀伤活性不同,杀伤率范围为(44.40±1.97)％～(93.70±1.12)％.不同个体NK细胞KIR2DLI表达率与其对KGIA细胞的杀伤率呈负相关(r=-1.00,P=0.00).结论:不同个体NK细胞其表面KIR2DL1表达率与NK细胞对KGlA细胞的杀伤率呈负相关.
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注射用核糖核酸Ⅱ上调p53诱导人白血病细胞凋亡
目的：研究注射用核糖核酸Ⅱ诱导人白血病细胞系K562和KG1 a细胞凋亡的作用。方法以K562和KG1 a细胞为研究对象，采用CCK-8法检测注射用核糖核酸Ⅱ对细胞增殖的影响；流式细胞术检测细胞凋亡率的变化；Hoechst 33258染色观察细胞核形态；免疫印迹技术检测p53及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和cleaved caspase-3的表达。结果以100～300 mg·L－1注射用核糖核酸Ⅱ处理K562和KG1a细胞12、24、48 h后，CCK-8检测结果显示K562和KG1a细胞的增殖降低，抑制率明显增高，并呈时间剂量依赖性；100、150、200 mg·L－1注射用核糖核酸Ⅱ处理K562和KG1 a细胞24 h后， FCM结果显示细胞凋亡率随药物剂量增加而增高；Hoechst 33258染色观察到细胞核出现染色质浓缩聚集、染色加深等凋亡指征；Western blot结果显示，注射用核糖核酸Ⅱ上调p53、Bax和cleaved caspase-3的表达，下调Bcl-2表达。结论注射用核糖核酸Ⅱ通过上调p53，调控Bcl-2／Bax的表达，激活caspase-3诱导人白血病K562和KG1 a细胞凋亡。
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线粒体通路和死亡受体通路在中华眼镜蛇毒组分诱导KG1a细胞凋亡中的作用
目的 研究线粒体通路和死亡受体通路在中华眼镜蛇毒组分(naja naja actra venom component,NNAVC)诱导KG1a 细胞凋亡过程中的作用.方法 以人急性髓系白血病细胞株KG1a细胞为研究对象,采用Annexin V-FITC/PI荧光染色法进行凋亡细胞的形态学观察,流式细胞仪检测细胞凋亡率,分光光度法检测Caspase-9、Caspase-8和Caspase-3的活性,ELISA法检测胞质内细胞色素C的表达水平,流式细胞仪分析TRAIL死亡受体(DR4、DR5)和诱骗受体(DcR1、DcR2)的改变.结果 NNAVC作用后,荧光显微镜下可见明显的凋亡细胞,细胞凋亡率随药物作用浓度的增加而升高;Caspase-9、Caspase-8和Caspase-3蛋白被激活,胞质内细胞色素C的表达明显增加;流式细胞仪检测结果显示,NNAVC具有降低死亡受体DR4和诱骗受体DcR1的表达率,而提高DR5和DcR2的表达水平的作用.结论 线粒体凋亡通路和死亡受体通路均参与NNAVC诱导KG1a细胞凋亡的过程,这可能是NNAVC发挥抗白血病作用的机制之一.
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莱菔硫烷促进KG1a细胞凋亡及其作用机制
目的:研究莱菔硫烷对急性髓系白血病细胞株KG1a细胞凋亡的影响及作用机制.方法:利用细胞增殖实验CCK-8试剂盒检测SFN对KG1a细胞增殖的抑制作用,利用流式细胞术检测SFN对KG1a细胞早期凋亡率的影响,进一步利用PCR、Western-blot技术研究SFN对KG1a细胞Bax和bcl2 mRNA和蛋白水平表达的影响.结果:(1)SFN可抑制KG1a细胞的增殖,且随SFN浓度增加和作用时间延长抑制率增加;(2)在0,4,8,12 μmol· L-1 SFN作用KG1a细胞后,其早期凋亡率呈浓度依赖性增加,早期凋亡率分别为0,3.12％,13.33％,28.18％;(3)SFN可增加KG1a细胞的Bax的mRNA和蛋白的表达,与对照组(0 μmol· L-1浓度组)存在统计学差异(P＜0.05).SFN可降低bcl2 mRNA和蛋白表达水平,12 μmol· L-1SFN浓度组的蛋白表达与对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:SFN可通过调控Bax和bcl2基因促进KG1a细胞凋亡,抑制KG1a细胞增殖.
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白藜芦醇对髓系白血病干细胞增殖和凋亡的影响及其与allo-NK细胞的联合杀伤作用
目的 探讨白藜芦醇(RES)对髓系白血病干细胞(CD34+CD38-KG1a细胞,以下简写为KG1a细胞)增殖和凋亡的影响,并初步探讨RES增强allo-NK细胞对KG1a细胞杀伤作用的机制.方法 免疫磁珠分选法分选人外周血单个核细胞(PBMCs)中的CD16+CD56+CD3-NK细胞(以下简写为NK细胞).流式细胞术检测细胞表面分子CD34、CD38、CD3、CD15和CD56.MTT法、甲基纤维素克隆形成实验检测RES对KG1a细胞增殖抑制作用.DAPI染色法和流式细胞术检测RES对KG1a细胞凋亡的影响.使用IC50的RES作用KG1a细胞24 h后清洗离心获得RES/KG1a细胞.LDH释放法检测NK细胞对KG1a细胞和RES/KG1a 2种细胞的杀伤能力.流式细胞术检测KG1a细胞和RES/KG1a细胞的表面配体ULBP1、ULBP2、ULBP3、MICA和MICB.结果 免疫磁珠分选后,外周血单个核细胞中的NK细胞比例为(90.5±3.2)％;KG1a细胞纯度为(91.2±3.9)％.RES对KG1a细胞的增殖抑制作用具有时间和剂量依赖性,24 h的IC50=24.0 μmol·L-1;48h的IC50=13.7 μmol·L-1.RES抑制KG1a细胞的克隆形成能力并诱导细胞凋亡,具有剂量依赖性(P＜ 0.05).NK细胞对RES/KG1a细胞的杀伤能力比其对KG1a细胞的杀伤能力强(P＜ 0.05).与KG1a细胞比较,RES/KG1a细胞表面配体ULBP1、ULBP2、ULBP3表达明显上调(P＜0.05),MICA和MICB变化不明显.结论 RES能够抑制KG1a细胞增值抑制并诱导细胞凋亡,联合NK细胞对KG1a细胞具有协同杀伤作用,这可能与KG1a细胞表面的ULBP1、ULBP2、ULBP3表达上调相关.
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吉西他滨对CD34+CD38-髓系白血病干细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用
目的:探讨与阿糖胞苷(Ara-C)结构相似的新型脱氧胞苷相似物和核苷还原酶抑制剂——吉西他滨(gemeitabine,GEM)对CD34+ CD38-KGla髓系白血病干细胞(LSCs)增殖抑制和诱导凋亡的影响.方法:流式细胞术检测急性髓系白血病KGla细胞表面CD34和CD38的表达；24 h和持续用药软琼脂克隆形成实验观察不同浓度GEM对KG1a细胞增殖的影响,流式细胞术检测不同浓度GEM对KGla细胞周期的影响,Annexin V/PI双染法检测不同浓度GEM对KGla细胞凋亡的影响.结果:急性髓系白血病KGla细胞中CD34+CD38-占(98.02±0.72)％.0.05 mg/L、0.lmg/L和0.5 mg/L的GEM分别作用KGla细胞24h、48 h和72 h后,0.5 mg/L GEM作用KGla细胞24h后, G0/G1期细胞高于盐水对照组(P＜0.05),而0.05 mg/L和0.1 mg/L GEM作用KGla细胞24h后,G0/G1期细胞与盐水对照组相比,差异无统计学意义(P＞0.05).0.05 mg/L、0.1 mg/L和0.5 mg/LGEM作用KGla细胞24h后,软琼脂培养第14 d和21d后,0.1mg/L和0.5 mg/L组形成的克隆数,低于盐水对照组(P＜0.05),0.05 mg/L GEM组14 d、21 d的克隆数与对照组相比,差异无统计学意义(P＞0.05).0.05 mg/L、0.1 mg/L、0.5 mg/L GEM和Ara-C持续作用组,软琼脂培养14 d和21d均未见集落生长,与对照组相比差异显著(P＜0.05).0.05 mg/L、0.1 mg/L GEM作用KG1a细胞后其凋亡率与盐水对照组相比,差异无统计学意义(P＞0.05),而0.5 mg/L GEM作用24h后KGla细胞凋亡率显著高于盐水对照组(P＜0.05).结论:GEM能抑制CD34+CD38-髓系白血病干细胞增殖和克隆形成,并将CD34+ CD38-KG1a细胞阻滞在G0/G1期和诱导其凋亡.
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去甲基化KG1a细胞DNA对人外周血单个核细胞杀伤活性和T细胞受体Vαβ T细胞增殖的影响
目的:研究去甲基化的急性髓性白血病细胞KG1a的DNA体外诱导人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)的杀伤活性和T细胞受体Vαβ(αβ chain variable gene of T cell receptor,TCR Vαβ)谱系的表达和克隆情况.方法:去甲基化试剂盒对KG1a细胞去甲基化处理,并提取其DNA.应用乳酸脱氢酶释放法检测DNA诱导前后PBMC杀伤KG1a细胞的活性,应用RT-PCR方法扩增各组外周血T细胞的32个TCR Vα亚家族和24个TCR Vβ亚家族的CDR3,并用基因扫描分析扩增产物以确定T细胞的克隆性.结果:基因扫描显示去甲基化的KG1a细胞DNA可以诱导出呈单克隆、寡克隆或寡克隆趋势生长的亚家族T细胞,且在效靶比为20:1时去甲基化的KG1a细胞DNA诱导前后PBMC杀伤KG1a细胞的活性差异有统计学意义(P＜0.05).结论:去甲基化的KG1a细胞DNA可提高PBMC杀伤活性,且诱导T细胞呈克隆性增殖.
