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Cdc42基因在非甾体抗炎药抑制乳腺癌细胞丝状伪足形成中的作用
目的:研究细胞分裂周期蛋白42(cell division cycle 42,Cdc42)基因在非甾体抗炎药(non-steroidal anti-inflammatory drugs,NSAIDs)诱导抑制细胞丝状伪足形成中的作用,探究NSAIDs抑制在肿瘤细胞迁移和侵袭过程中可能的信号转导途径.方法:使用环氧合酶-2 (cyclooxygenase-2,Cox-2)选择性抑制剂NS-398处理乳腺癌 MCF-7细胞,同时将针对Cox-2的特异性小干扰RNA (small interfering RNA,siRNA)转染入MCF-7细胞;利用实时荧光定量-PCR和Western印迹法检测NS-398处理组、Cox-2 siRNA干扰组、干扰阴性对照组和空白对照组细胞中Cox-2和Cdc42的mRNA转录水平以及蛋白表达水平;使用微丝绿色荧光探针观察MCF-7细胞的伪足形态;Transwell小室检测MCF-7细胞的体外侵袭能力.结果:乳腺癌MCF-7细胞经NS-398处理后,细胞丝状伪足消失,体外侵袭能力显著下降(P＜0.05);Cox-2 mRNA转录及蛋白表达水平均未见明显改变(P＞0.05),Cdc42 mRNA及总蛋白表达水平也未见明显改变(P＞0.05),但活化态Cdc42含量显著减少(P＜0.05).经siRNA干扰Cox-2表达后,MCF-7细胞的丝状伪足消夫,体外侵袭能力显著下降(P＜0.05),活化态Cdc42含量显著减少(P＜0.05).结论:NSAIDs在体外抑制肿瘤细胞侵袭的作用可能是通过抑制Cox-2活性,使活化态Cdc42含量减少,终抑制细胞丝状伪足形成而实现的.
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RhoA、Rac1及Cdc42在胆道闭锁肝纤维化中的作用
目的 研究胆道闭锁(biliary atresia,BA)患儿肝组织中RhoA、Rac1及Cdc42表达情况与肝纤维化的关系,探讨其在BA发病中可能的作用机制.方法 选取胆管扩张症患儿肝组织(胆扩组)15例,BA患儿肝组织(BA组)15例,BA发展至肝硬化接受肝移植患儿自体肝活检组织(移植组)10例,采用HE观察肝组织标本纤维化程度;免疫组化染色检测RhoA、Rac1及Cdc42在肝组织中的蛋白表达情况;实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)方法检测肝组织中RhoA、Rac1及Cdc42基因表达情况.结果 ①HE染色:胆扩组偶见少许纤维组织增生;BA组汇管区增宽,纤维组织增生、桥接纤维化现象普遍,可见假小叶形成;移植组假小叶显著;②免疫组化:胆扩组RhoA、Rac1及Cdc42均表达为弱阳性,BA组及肝移植组患儿RhoA、Rac1及Cdc42蛋白在肝细胞、汇管区胆管上皮细胞中均为阳性表达;③半定量分析:RhoA(0.1419±0.0683、0.2203±0.0476和0.2295±0.0623),Rac1(0.1587±0.0072、0.1970±0.0242和0.1993±0.0270)和Cdc42 (0.887±0.0270、0.1397±0.0360和0.1519±0.0168)在三组蛋白表达水平之间比较差异有统计学意义(P＜0.05),且三组中BA组及肝移植组RhoA、Rac1及Cdc42蛋白表达水平明显高于胆扩组(P＜0.05);移植组RhoA、Rac1及Cdc42蛋白含量与BA组,表达差异无统计学意义(P＞0.05);④qRT-PCR:RhoA[0.3350(0.2525～0.6350)、1.5200(1.4375～2.1700)和1.9350 (1.7950～2.3925)],Rac1 [0.2800 (0.1450～0.3025)、0.8200(0.7275～0.9300)和0.8000(0.7725～0.9825)],Cdc42[0.5950(0.4375～0.7125)、1.8950(1.8675～2.1925)和1.9900(1.8675～2.2050)],三组中mRNA表达水平比较差异有统计学意义(P＜0.017),同时在这三组中,BA组及肝移植组RhoA、Rac1及Cdc42含量表达明显高于胆扩组(P＜0.017).结论 RhoA、Rac1及Cdc42在BA患儿肝组织呈高水平表达,表明其可能参与并促进BA肝纤维进程.
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RhoA和CDC42在急性白血病的表达异常及其意义
目的 检测急性白血病(AL)患者骨髓单个核细胞中RhoA和CDC42蛋白的表达水平,探讨Rho GTP酶相关的骨髓微环境与造血干细胞相互作用异常在白血病细胞恶性行为中的作用.方法 分离并制备54例AL患者及22名正常供者的骨髓单个核细胞的细胞裂解液,应用Western blotting方法,检测其中RhoA和CDC42蛋白的相对表达量,非配对t检验分析RhoA和CDC42蛋白在AL患者和正常供者中表达的差异,Spearman分析患者RhoA和CDC42基因的蛋白表达量与临床资料的相关性.结果 初治AL患者骨髓中RhoA和CDC42的蛋白表达水平显著高于健康人,其中急性髓系白血病M2、M3,及M5亚型患者的RhoA蛋白表达升高尤为显著,M3亚型患者的CDC42蛋白表达量升高为显著.结论 初治AL患者骨髓中RhoA和CDC42表达显著上调,提示Rho GTP酶介导的白血病细胞迁移活跃导致骨髓微环境相互作用异常在白血病发生中起作用.
