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磷脂酶Cβ1上调表达与肝细胞肝癌增殖和预后相关
目的 探讨磷脂酶Cβ1 (PLCβ1)表达是否与肝细胞肝癌(HCC)患者临床病例参数及预后相关.方法 采用组织芯片(TMA)技术和免疫组织化学法检测141例HCC患者肿瘤及癌旁组织PLCβ1表达,分析PLCβ1表达与临床病理特征相关性;集落形成与细胞凋亡实验检测PLCβ1对HCC细胞增殖的影响;Kaplan-Meier法和Cox回归模型多因素分析HCC预后.结果 PLCβ1在肿瘤组织中表达明显高于癌旁组织,并与肿瘤分期密切相关.Kaplan-Meier生存分析表明PLCβ1高表达HCC患者生存率低于低表达患者.Cox多因素分析结果显示PLCβ1高表达是HCC患者预后的独立影响因素.PLCβ1在HCC细胞中过表达,促进HCC细胞增殖并抑制其凋亡.进一步研究发现,细胞外调节蛋白激酶(ERK)信号通路激活可能参与PLCβ1介导的HCC细胞生长.结论 PLCβ1促进HCC进展,可作为HCC预后的独立影响因素,有望成为理想的治疗靶点.
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磷脂酶Cβ1过表达对葡萄糖刺激胰岛素分泌的影响
目的 观察过表达磷脂酶Cβ1(phospholipaae C β1,PLCβ1)对葡萄糖刺激胰岛素分泌(glucose-stimulated insulin secretion,GSIS)的影响.方法 ①设定葡萄糖浓度梯度:10、20、40、80、100 mmol/L,分别刺激INS-1细胞40 min,检测细胞培养上清液中胰岛素含量,确定适的葡萄糖刺激浓度;设定时间梯度:20、40、60、80、120 min,以适葡萄糖浓度刺激,检测胰岛素含量,确定适的刺激时间.②以适葡萄糖浓度刺激INS-1细胞适当时间后,RT-PCR检测PLCβ1表达变化.③构建PLCβ1真核表达载体(PCMV-HA-PLCβ1),转染INS-1细胞,Western blot检测INS-1细胞中PLCβ1蛋白的表达.④收集转染后INS-1细胞培养上清液,检测胰岛素含量.结果 用40 mmol/L葡萄糖刺激60 min,INS-1细胞的胰岛素分泌量大;RT-PCR观察刺激后PLCβ1表达显著升高;过表达PLCβ1的INS-1细胞培养上清液中胰岛素含量为(1.906±0.080)ng/ml,较转染PCMV-HA载体的对照组(0.740±0.091)ng/ml显著升高(P<0.01).结论 过表达PLCβ1显著增加INS-1细胞的胰岛素分泌,提示PLCβ1可能参与GSIS信息传递.
关键词： 磷脂酶Cβ1 葡萄糖刺激胰岛素分泌 过表达 胰岛素 瞬时转染
