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11β-羟类固醇脱氢酶1型基因沉默对胰岛β细胞系NIT-1葡萄糖刺激胰岛素分泌的影响
目的 观察RNA干扰阻断胰岛β细胞系NIT-1中11β-羟类固醇脱氧酶1型(11β-HSD1)表达对细胞葡萄糖刺激胰岛素分泌(GSIS)的影响.方法 pSuper质粒为载体,构建针对11β-HSD1基因的质粒oligo886、oligo866和乱序对照质粒oligoScr886,转染NIT-1细胞,RT-PCR和蛋白印迹法检测11β-HSD1 mRNA和蛋白表达.oligo886重组质粒转染25 mmol/L葡萄糖培养摹中的NIT-1细胞,测GSIS.结果 转染oligo886和oligo866质粒的NIT-1细胞11β-HSD1 mRNA分别下降78.1%±2.9%和51.7%±2.7%,11β-HSD1蛋白的水平分别下降82.2%±2.1%和56.5%±2.0%.oligo866转染25 mmoL/L葡萄糖培养基中的NIT-1细胞后,GSIS较对照组明显升高(P<0.01).结论 11β-HSD1基因沉默能改善NIT-1细胞的葡萄糖刺激胰岛素分泌能力,提示胰岛β细胞NIT-1通过11β-HSD1调节糖皮质代谢,参与葡萄糖刺激胰岛素分泌.
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胰高血糖素样多肽-1类似物利拉鲁肽全球Ⅲ期临床研究结果回顾
人们很早就认识到口服葡萄糖刺激胰岛素分泌的量明显大于静脉葡萄糖所引起的胰岛素释放,这种现象被称为"肠促胰素"效应[1].胰高血糖素样多肽-1(GLP-1)和葡萄糖依赖性胰岛素释放肽(GIP)均属于肠促胰素,但GIP对胰岛α细胞无作用且2型糖尿病患者的胰岛β细胞对GIP反应显著下降,因而限制了GIP的临床应用.
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胰岛素样生长因子-1对大鼠胰岛功能及细胞凋亡的影响
目的 研究胰岛素样生长因子-1(IGF-1)在高糖条件下对大鼠胰岛功能及胰岛细胞凋亡的影响.方法 体外培养SD大鼠胰岛48 h,按培养液不同分为3组:对照组(葡萄糖5.6 mmol/L)、高糖组(葡萄糖15.6 mmol/L)、IGF-1组(葡萄糖15.6 mmol/L+IGF-1.10 ng/mL),检测项目(1)胰岛细胞分泌功能:放射免疫法、免疫组织化学法;(2)胰岛细胞凋亡:Hoechst33342染色免疫荧光法、DNA断裂的原位末端标记法(TUNEL法)、免疫组织化学法、透射电镜.结果 与对照组比较,高糖组胰岛素分泌量、细胞内胰岛素表达率明显减少(P＜0.05);凋亡细胞明显增多,人B细胞淋巴瘤/白血病因子-2(Bcl-2)表达率明显减少(P＜0.05);细胞核碎裂固缩多,核仁消失核膜变形分泌颗粒减少可见淀粉样物质沉积.与对照组及高糖组比较,IGF-1组胰岛素分泌量、胰岛素表达率均明显升高(P＜0.05);胰岛细胞凋亡率低于高糖组但高于对照组(P＜0.05)、Bcl-2表达率高于高糖组但低于对照组(P＜0.05);核碎裂、核固缩少,细胞核形态结构正常及分泌颗粒数量相对增加.结论 IGF-1可以直接作用于胰岛,有促进胰岛素分泌及抗细胞凋亡作用,这种功能可能与诱导抗凋亡因子Bcl-2高表达有关.
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DTBNP、DTDP促进INS-1细胞葡萄糖刺激胰岛素分泌
目的:探讨巯基氧化还原试剂对葡萄糖刺激胰岛素分泌(glucose-stimulated insulin secretion,GSIS)影响,进而揭示其调节胰岛素分泌的可能机制.方法:INS-l细胞经传代培养3~4 d后在KRBH液中,37℃培养箱孵育30 min,再用含有不同浓度葡萄糖和巯基氧化还原试剂的KRBH液中培养60 min.然后留取上清液进行胰岛素测定.结果:(1)INS-1细胞在2.5、5、10、15、20 mmol/L葡萄糖浓度范围内胰岛素分泌量逐渐增加,G5、G10、G15组间两两相比均有统计学意义(P<0.05);(2)与G10组相比,G10+DTBNP、G10+DTDP组胰岛素分泌量显著增加(P<0.05),且该效应可以被DTT所消除.(3)DTBNP、DTDP均能增加NIF处理组胰岛素分泌,但其增加幅度低于非NIF处理组(P<0.05);(4)与非DIA组相比,G10+DIA+DTBNP、G10+DIA+DTDP组胰岛素分泌增加幅度显著减低(P<0.05);(5)同G10组比较,G10+DIA+NIF+DTBNP、G10+DIA+NIF+DTDP组胰岛素分泌值增加(P<0.05).结论:本研究显示巯基氧化还原试剂对GSIS产生调节作用.DTDP、DTBNP可能通过对KATP、L型CaV通道及IP3受体活性的调节,促进胰岛素分泌.
关键词： 葡萄糖刺激胰岛素分泌 INS-1细胞 巯基氧化还原试剂 -
解偶联蛋白-2在胰腺β细胞中的作用
2型糖尿病是世界广泛流行的内分泌代谢性疾病之一,其主要临床表现是葡萄糖刺激胰岛素分泌(glueose stimulated insulin secretion,GSIS)障碍.线粒体通过偶联葡萄糖氧化产生ATP在GSIS中发挥了重要作用.
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PLCζ在INS-1细胞中的表达及功能初步分析
目的:探讨磷脂酶Cζ(Phospholipase Cζ,PLCζ)在INS-1细胞中的表达,并初步分析PLCζ对葡萄糖刺激胰岛素分泌(Glucose-stimulated insulin secretion,GSIS)的影响.方法:(1)设计6类PLC的引物,RT-PCR检测INS-1细胞中各类PLC的表达.(2)设定葡萄糖浓度梯度:10、20、40、80、100 mmol/L,分别刺激INS-1细胞40 min,ELISA检测细胞培养上清液中胰岛素的含量,确定适葡萄糖刺激浓度,设定时间梯度:20、40、60、80、120min,以适葡萄糖浓度刺激后ELISA检测细胞培养上清液中胰岛素含量,确定适刺激时间.(3)用适葡萄糖浓度刺激INS-1细胞适当时间后,半定量RT-PCR、Western Blot检测PLCζ 的表达变化.结果:(1)6类PLC中PLCβ、PLCγ、PLCδ、PLCζ、PLCη在INS-1细胞中表达,PLCε不表达.(2)用40 mmol/L 葡萄糖刺激60 min,INS-1细胞的胰岛素分泌量大,半定量RT-PCR、Western Blot检测葡萄糖刺激INS-1细胞后PLCζ的表达上调.结论:(1)先前发现在精子中特异表达的PLCζ在INS-1细胞中有表达.(2)葡萄糖刺激INS-1细胞后PLCζ的表达明显增加,提示PLCζ可能参与GSIS信号转导.
关键词： 磷脂酶cζ 表达 RT-PCR 葡萄糖刺激胰岛素分泌 -
S-雌马酚改善高糖培养条件下INS-1细胞胰岛素分泌功能的研究
目的 研究大豆甙元活性代谢产物S-雌马酚(S-equol,S-Eq)对高糖培养条件下大鼠胰岛素瘤(INS-1)细胞胰岛素分泌功能的影响.方法 采用26.2 mmol/L葡萄糖(高糖组,H)及葡萄糖分别与不同浓度S-Eq(0.1、1、10、100 μmol/L S-Eq+H组)干预INS-1细胞24 h,另设未干预的INS-1细胞为对照组(C).采用CCK-8检测细胞活力,ELISA法测定葡萄糖刺激胰岛素分泌(GSIS)功能,TUNEL法联合Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡,Real-time PCR和Western blot分别检测前胰岛素原(preproinsulin,PPI)、葡萄糖转运蛋白2(glucose transporter 2,Glut2)、线粒体阴离子载体解偶联蛋白2(uncoupling protein 2,UCP2) mRNA及蛋白表达.结果 S-Eq能显著增加高糖培养条件下INS-1细胞活力(P＜0.05),其中1μmol/L S-Eq效果为明显.GSIS检测发现,与对照组比较,高糖处理后INS-1细胞胰岛素分泌显著降低,而S-Eq能显著增加高糖处理的INS-1细胞的胰岛素分泌(P＜0.05).同时,0.1、1、10 μmol/L S-Eq均能明显减少高糖培养条件下INS-1细胞凋亡,上调PPI mRNA、Glut2 mRNA和Glut2蛋白表达,而显著抑制UCP2 mRNA及其蛋白的表达(P＜0.05).结论 S-Eq可有效改善高糖培养条件下INS-1细胞胰岛素分泌功能,可能与抑制细胞凋亡,调节Glut2和UCP2表达有关.
关键词： S-雌马酚 INS-1细胞 葡萄糖刺激胰岛素分泌 葡萄糖转运蛋白2 解偶联蛋白2 -
磷脂酶Cβ1过表达对葡萄糖刺激胰岛素分泌的影响
目的 观察过表达磷脂酶Cβ1(phospholipaae C β1,PLCβ1)对葡萄糖刺激胰岛素分泌(glucose-stimulated insulin secretion,GSIS)的影响.方法 ①设定葡萄糖浓度梯度:10、20、40、80、100 mmol/L,分别刺激INS-1细胞40 min,检测细胞培养上清液中胰岛素含量,确定适的葡萄糖刺激浓度;设定时间梯度:20、40、60、80、120 min,以适葡萄糖浓度刺激,检测胰岛素含量,确定适的刺激时间.②以适葡萄糖浓度刺激INS-1细胞适当时间后,RT-PCR检测PLCβ1表达变化.③构建PLCβ1真核表达载体(PCMV-HA-PLCβ1),转染INS-1细胞,Western blot检测INS-1细胞中PLCβ1蛋白的表达.④收集转染后INS-1细胞培养上清液,检测胰岛素含量.结果 用40 mmol/L葡萄糖刺激60 min,INS-1细胞的胰岛素分泌量大;RT-PCR观察刺激后PLCβ1表达显著升高;过表达PLCβ1的INS-1细胞培养上清液中胰岛素含量为(1.906±0.080)ng/ml,较转染PCMV-HA载体的对照组(0.740±0.091)ng/ml显著升高(P<0.01).结论 过表达PLCβ1显著增加INS-1细胞的胰岛素分泌,提示PLCβ1可能参与GSIS信息传递.
关键词： 磷脂酶Cβ1 葡萄糖刺激胰岛素分泌 过表达 胰岛素 瞬时转染
